韋玉勇 徐 步 張?zhí)m琴 張 斌 沈欣悅 龔建森 俞 燕 吳 坤 董永毅*

1.江蘇省家禽科學(xué)研究所，江蘇揚(yáng)州225125；2.江蘇省揚(yáng)州市江都區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚(yáng)州225200；3.江蘇省揚(yáng)州市畜牧獸醫(yī)站，江蘇揚(yáng)州225000；4.江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南京210036

2015年下半年開始，江蘇多家養(yǎng)殖企業(yè)的雛鵝出現(xiàn)一種以拉白色糞便、腿腳癱瘓為主要癥狀的高發(fā)病率與病死率疾病，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。初步診斷確定為雛鵝腎腫綜合征（俗稱鵝痛風(fēng)病），通過實(shí)驗(yàn)室病原分離鑒定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)，確診為由鵝星狀病毒繼發(fā)大腸桿菌感染，及時(shí)采取治療措施后有效控制了疫情。

1 發(fā)病情況及病史調(diào)查

經(jīng)調(diào)查得知，江蘇省內(nèi)的揚(yáng)州鵝、泰州白鵝、大三花及其雜交品種鵝苗在大規(guī)模育雛階段，飼喂全價(jià)配合飼料5～7 d 后，約60%的鵝群出現(xiàn)弓背、縮頭、怪叫、拉白色糞便等癥狀；初期病程急且死亡率較高，后期常出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、跛行、癱瘓，總體死淘率呈逐年升高趨勢(shì)，最高近30%；發(fā)病鵝群一般在1日齡、4～5日齡采取小鵝瘟抗體注射。有部分養(yǎng)殖企業(yè)曾用星狀病毒抗體預(yù)防，也有部分養(yǎng)殖場(chǎng)用小蘇打、雙尿酸鈉飲水對(duì)癥治療，但效果不顯著[1]。

2 臨床癥狀

雛鵝發(fā)病初期表現(xiàn)為弓背縮頭、行動(dòng)遲緩、蹲伏、不愿走動(dòng)（圖1A），有的甚至癱瘓（圖1B），精神沉郁，食欲減退，羽毛蓬亂，排灰白色水樣稀糞或石灰渣樣糞便（圖1C）。隨著病程發(fā)展，出現(xiàn)趾跗關(guān)節(jié)腫脹、突出（圖1D），部分伴有發(fā)熱。本病病程通常7 d 左右，病情嚴(yán)重者可達(dá)10 d 以上。一旦有混合或繼發(fā)感染，癥狀更為復(fù)雜并出現(xiàn)批量死亡。

圖1 臨床癥狀

3 病理變化

病死雛鵝剖解病變可見：心臟表面尿酸鹽及絮狀物沉積、部分雛鵝心包積液或絨毛心（圖2A），心肌增生肥大、心臟血管充盈（圖2B）；肝臟表面尿酸鹽沉積，質(zhì)地變脆（圖2C）；腎臟極度腫脹、出血，形成典型花斑腎，兩側(cè)腎小管里面有大量尿酸鹽沉積（圖2D）；部分病死鵝在肌肉組織、關(guān)節(jié)組織（圖2E）、腸腔及腹膜上有廣泛性尿酸鹽沉積（圖2F）；嚴(yán)重病例可見腺胃內(nèi)尿酸鹽廣泛沉積（圖2G）。

圖2 病理變化

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌分離與鑒定

選擇腎臟病變典型的雛鵝腦組織樣品，無菌條件下取腦組織分別接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基，置37 ℃培養(yǎng)24 h。臨床多份腦組織樣品在麥康凱培養(yǎng)基上呈現(xiàn)圓形隆起、邊緣整齊、表面光滑、大小不等的紅色菌落。

對(duì)分離的細(xì)菌采用革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓、革蘭氏陰性、無芽孢的小桿菌、符合大腸桿菌形態(tài)特點(diǎn)；生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，其能發(fā)酵棉子糖、山梨醇、葡萄糖并產(chǎn)生氣泡，能利用硝酸鹽，不能利用尿素、枸櫞酸鹽（表1）。判定分離菌為大腸桿菌。

表1 4 株分離菌生化反應(yīng)結(jié)果

針對(duì)分離的多株大腸桿菌，結(jié)合臨床用藥實(shí)際，篩選部分藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[2]，其藥敏結(jié)果顯示，分離菌株對(duì)頭孢噻呋鈉、大觀霉素高度敏感，宜作為治療時(shí)首選藥物；對(duì)強(qiáng)力霉素、黏桿菌素低敏（表2）。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4.2 病毒分離與鑒定

將采集的有典型病變雛鵝的肝、腎等組織樣品，研磨成勻漿后反復(fù)凍融3 次，離心取上清，0.22 μm 濾器除菌后，將濾液分成2 份待用，一份用于病毒分離，另一份用于相關(guān)病毒PCR 檢測(cè)。

1）病毒分離。取組織樣品濾液經(jīng)卵黃囊途徑接種10 枚10日齡鵝胚，置37 ℃溫箱孵育，連續(xù)觀察5～10 d，收集尿囊液，病變明顯的尿囊膜和組織臟器研磨并混勻。收獲的組織處理液繼續(xù)接種10日齡鵝胚，連續(xù)盲傳至第4 代。在第3 代開始發(fā)現(xiàn)胚體死亡，絨毛尿囊膜增厚并附有尿酸鹽沉積（圖3A），胚體發(fā)育不良伴有水腫、出血，剖檢胚體發(fā)現(xiàn)肝臟呈現(xiàn)土黃色、斑塊狀出血（圖3B）；個(gè)別胚體腎臟蒼白、雙側(cè)輸尿管尿酸鹽輕度沉積。

圖3 鵝胚病變

2）RT-PCR 檢測(cè)。取接種前處理組織樣品1 份、接種后處理組織樣品1 份，分別抽提RNA 并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)GenBank 上已發(fā)表的鵝星狀病毒（GAstV）的ORF1 基因序列，使用Primer5.0 軟件設(shè)計(jì)1 對(duì)特異性鑒定引物，引物序列如下：上游引物F：5'-GATTGGACCCGTTATGATGG-3'，下游引物R：5'-TTTGACCCACATACCAAAGAC-3'，用于擴(kuò)增鵝星狀病毒ORF1b 約435 bp 的片段[3]。對(duì)組織樣品cDNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)鵝胚接種后的組織樣品顯示較強(qiáng)星狀病毒特異性引物擴(kuò)增條帶（圖4）。檢測(cè)結(jié)果表明，樣品中存在星狀病毒，由此推斷患病鵝群感染了鵝星狀病毒。

圖4 鵝胚組織樣品PCR 檢測(cè)結(jié)果

4.3 動(dòng)物回歸試驗(yàn)

為了解分離的病毒是否為引起雛鵝發(fā)病的病原，從未發(fā)生雛鵝痛風(fēng)病的種鵝場(chǎng)購買了20 只已接種小鵝瘟抗體的健康苗鵝，隨機(jī)分為A、B 兩組，每組10 只。A 組經(jīng)肌肉接種0.5 mL 發(fā)病雛鵝病毒分離尿囊液，B 組作為對(duì)照組不作處理。接種后分別隔離飼養(yǎng)，觀察14 d。

A 組苗鵝接種后，前5 d 精神、食欲正常，第7天開始陸續(xù)表現(xiàn)出減食、拉白痢、弓背、關(guān)節(jié)腫脹等雛鵝腎腫綜合征自然病例類似的早期癥狀，并死亡2 只，第10、11 天各死亡3 只，死亡苗鵝剖檢后發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)囊、心肌表面、腹膜、腎臟等部位有廣泛性尿酸鹽沉積；同時(shí)伴有腎臟腫脹及輸尿管尿酸鹽沉積等病變。無菌采集攻毒后死亡苗鵝病料，按常規(guī)方法處理后經(jīng)卵黃囊途徑接種10日齡鵝胚，收取死亡鵝胚的尿囊液，經(jīng)RT-PCR 檢測(cè)鵝星狀病毒陽性。B 組鵝苗在隔離飼養(yǎng)期間一切正常，RT-PCR 檢測(cè)陰性。

5 治療措施

根據(jù)患鵝的臨床癥狀、剖檢病變，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)診斷，對(duì)臨床類似病例初診疑為鵝星狀病毒感染誘發(fā)雛鵝腎腫綜合征。在發(fā)病初期一般可采取全群對(duì)因注射抗病毒、對(duì)癥口服中藥或二者結(jié)合方案的抗病毒治療方案[4-8]。

1）方案一：50 萬IU/瓶干擾素按200 羽/瓶劑量、2 mg/mL 反義核酸按0.2 mL/羽劑量、2 000 羽/瓶白介素按200 羽/瓶劑量、1 g 頭孢噻呋鈉按100 kg體重劑量和勻配合鵝星狀病毒高免抗體肌注2.5 mL/只，隔日視情況復(fù)注1 次；禽用口服補(bǔ)液鹽快速飲水，連用3～5 d；柴胡護(hù)肝顆粒+車錢草提取物飲水，連用3～5 d。

2）方案二：雙黃連注射液1 mL/kg，頭孢西丁1 g/100 kg，地塞米松0.05 mg/kg，混合均勻后肌注。隔日觀察，必要時(shí)復(fù)注。

3）方案三：干擾素配合白介素混合飲水250 羽/套，2～3 h 用完；痛星舒散方劑（主藥：黃芪、枳殼）拌料500 g/80 kg 料，全天使用，連用4～5 d；速控痛星舒（主藥：金銀花、茵陳、車前草、澤瀉、牛膝）方劑飲水（1 000 只鵝/500 g），連用4～5 d；晚上結(jié)合禽用口服補(bǔ)液鹽（主要成分為雙乙酸鈉）飲水，200 g/300 kg，連用5 d。

積極采取上述治療方案，同時(shí)降低飼喂日糧蛋白水平，有目的地降低嘌呤代謝水平。加強(qiáng)對(duì)鵝群動(dòng)態(tài)觀察，及時(shí)隔離發(fā)病患鵝或淘汰無治療價(jià)值的患鵝；調(diào)節(jié)適宜育雛溫、濕度；適當(dāng)降低日糧蛋白水平[8-9]，增飼青料，減少夜間飼料投喂；有條件時(shí)加強(qiáng)戶外運(yùn)動(dòng)。加強(qiáng)消毒防范措施，對(duì)鵝舍和活動(dòng)場(chǎng)地進(jìn)行噴霧消毒，早晚各1 次。

6 結(jié)果與分析

針對(duì)雛鵝腎腫綜合征發(fā)病初期采取上述治療方案或措施，一般2～3 d 后鵝群健康狀況總體有所好轉(zhuǎn)，第5 天精神狀態(tài)恢復(fù)、偶發(fā)零星死亡，第7 天臨床癥狀完全消失，飲水、采食恢復(fù)至正常水平。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2019年2月-2020年6月臨床共診治86 例雛鵝腎臟腫脹綜合征，治愈率達(dá)85%，說明藥物的使用可以有效抑制或減緩本病在鵝群進(jìn)一步發(fā)生與發(fā)展。對(duì)于本病中后期患病鵝群療效有待進(jìn)一步評(píng)估與分析。在雛鵝腎腫綜合征高發(fā)病區(qū)域應(yīng)慎重采取注射式治療方案，在病情判斷不明時(shí)，不當(dāng)使用易誘發(fā)雛鵝大量死亡，建議采取中藥對(duì)癥、對(duì)因治療方案。對(duì)鵝養(yǎng)殖量較大的肉鵝場(chǎng)，建議在育雛階段采取早期藥物投飼與飼養(yǎng)管理相結(jié)合的方式加強(qiáng)對(duì)本病的防控。后期跟蹤調(diào)查顯示，發(fā)病鵝群經(jīng)治愈后生產(chǎn)性能略受影響，一般推遲5～7 d 出欄，推測(cè)為雛鵝發(fā)病期間飼料攝入量不足而引起。

7 小 結(jié)

雛鵝腎臟腫脹綜合征在江蘇省內(nèi)呈現(xiàn)流行性態(tài)勢(shì)，該病的發(fā)生、發(fā)展及其危害日趨加重，影響了全省鵝產(chǎn)業(yè)持續(xù)性發(fā)展、提質(zhì)增效進(jìn)程。為確切了解該病發(fā)生情況，摸清發(fā)病原因，尋找防治方案，在江蘇省內(nèi)展開了針對(duì)本病的流行病學(xué)調(diào)查工作，重點(diǎn)調(diào)查分析疫病分布、流行特點(diǎn)、發(fā)病原因。通過調(diào)查研究得出如下幾點(diǎn)意見，供業(yè)界同仁參考：①無序種源雜交可能是誘發(fā)本病的源頭[3]；②苗鵝頻繁被動(dòng)免疫存在人為傳播的風(fēng)險(xiǎn)和速度；③種鵝發(fā)生黃病毒病與雛鵝發(fā)生本病存在直接或間接聯(lián)系；④部分炕孵業(yè)種蛋來源不確定性增加本病防控難度；⑤現(xiàn)有商品鵝生產(chǎn)模式與方式促進(jìn)了本病的傳播；⑥育雛鵝料營(yíng)養(yǎng)水平有待進(jìn)一步研究[9]；⑦密切關(guān)注大日齡鵝發(fā)病情況，警惕隱性感染。