王文棟 裴澤浩 席小雪 崔偉亮 張 彤 常曉彤（河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，張家口075000）

肺癌嚴(yán)重危害人類健康，其發(fā)病率、死亡率均居惡性腫瘤之首［1］。隨著科學(xué)技術(shù)和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，肺癌治療手段有所提升。但由于大部分患者明確診斷時(shí)已發(fā)展至中晚期，手術(shù)治療效果甚微［2］。因此，尋找非侵入性、高靈敏度、高特異性的肺癌腫瘤標(biāo)志物的意義重大。

有研究表明，微小RNA（microRNAs，miRNAs）的表達(dá)與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在肺癌腫瘤細(xì)胞的黏附、浸潤和擴(kuò)散過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用［3］。由于miRNAs在腫瘤組織和外周血液中表達(dá)相對穩(wěn)定，組織特異性較高，使其在肺癌診斷和分型中的應(yīng)用成為可能，具有探索價(jià)值［4］。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-21不僅在肺癌患者的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高，其在外周血中表達(dá)水平也高于正常人群，與肺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良有關(guān)［5］。鑒于此，miR-21可能是一種有前途的肺癌診斷和預(yù)后監(jiān)測的無創(chuàng)標(biāo)記物，但外周miR-21表達(dá)水平是否與肺癌病理分型有關(guān)目前尚無報(bào)道，且miR-21作用的分子機(jī)制尚不明確。因此，本研究擬通過生物信息學(xué)分析方法挖掘miR-21靶基因及其分子特征，然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（real-time fluorescence quan?titative PCR，RT-qPCR）檢測不同病理類型肺癌患者（小細(xì)胞肺癌、鱗狀上皮細(xì)胞肺癌、腺癌）與健康對照人群血清的miR-21表達(dá)水平，進(jìn)行ROC（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線分析，以豐富miR-21與肺癌關(guān)聯(lián)的分子機(jī)制、探討血清miR-21對于肺癌診斷及病理分型的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 資料 收集中國人民解放軍第二五一醫(yī)院經(jīng)病理檢查確診的肺癌患者靜脈血標(biāo)本61例（含小細(xì)胞肺癌21例，腺癌18例，鱗癌22例）及該院同期正常體檢人群靜脈血標(biāo)本26例。人miR-21引物套裝購自蘇州吉瑪基因股份有限公司；內(nèi)參U6引物購自美國Invitrogen公司；Trizol、FastQuant RTKit、SuperRe?al PreMix Plus購自北京天根生化科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 肺癌miR-21靶基因的生物信息學(xué)挖掘與分析

1.2.1.1 肺癌miR-21靶基因挖掘 利用miRe?cords數(shù) 據(jù) 庫（http：//c1.accurascience.com/miRe?cords/）［6］對人的miR-21進(jìn)行靶基因預(yù)測。并用Pic?Tar、PITA、MirTarget2、RNAhybrid和TargertScanS等11個(gè)miRNA靶基因預(yù)測工具對miRecords預(yù)測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，保證至少被2種不同算法預(yù)測的交集作為miR-21的靶基因。再使用GeneCards數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/）［7］搜索獲得肺癌的相關(guān)致病基因，將致病基因與miRecords得到的靶基因取交集得到肺癌miR-21靶基因集合。

1.2.1.2 肺癌miR-21及其靶基因染色體定位 利用UCSC數(shù)據(jù)庫（http：//genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway）［8］和MapGene2Chrom web v2在線分析工具（http：//mg2c.iask.in/mg2c_v2.0）［9］對肺癌miR-21及靶基因進(jìn)行染色體定位和可視化分析。

1.2.1.3 肺癌miR-21靶基因的功能注釋和STRING互作分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫（Visualiza?tion，Annotation and Integrated Analysis，https：//da?vid.ncifcrf.gov）［10］采用全新的模糊聚類算法，將肺癌miR-21靶基因關(guān)聯(lián)到生物學(xué)功能注釋上，找出最顯著富集的生物學(xué)功能注釋（P-value≤0.05和Count≥4 genes），有利于對肺癌進(jìn)行關(guān)聯(lián)性研究分析。聯(lián)合使用STRING11.0在線分析工具（https：//stringdb.org/）［11］和Cytoscape 3.6.1軟 件［12］構(gòu) 建 肺 癌miR-21靶基因編碼產(chǎn)物蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)，篩選出重要的中心節(jié)點(diǎn)蛋白。

1.2.2 肺癌血清miR-21表達(dá)水平檢測和診斷肺癌效能評估

1.2.2.1 RT-qPCR Trizol法提取樣本血清總RNA。TaqMan MicroRNA Reverse Transcription kit進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)總體系為10μl，分別加入10×Fast RTBuffer 2μl、U6 Reverse Primer 2μl、RNase-Free ddH2O 3μl、microRNA-21 Stem Loop Primer 2μl和RT Enzyme 1μl（即用即溶）。RT-qP?CR每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔，miRNA反應(yīng)體系為20μl：2×Super Real Premix Plus 10μl（終濃度為1×）、miR-21 PCR Primer Set（包含上下游引物）0.8μl、RNase-Free ddH2O 8.2μl和cDNA模板1μl。內(nèi)參基因U6的反應(yīng)體系為20μl：2×Super Real Premix Plus 10μl（終濃度為1×）、U6 Forward Primer 0.6μl、U6 Re?verse Primer 0.6μl、RNase-Free ddH2O 7.8μl和cD?NA模板1μl。設(shè)置PCR反應(yīng)模式，進(jìn)行PCR擴(kuò)增（反應(yīng)模式：95℃，3 min；95℃，12 s；62℃，40 s；共40個(gè)循環(huán)）。記錄各管Ct值，復(fù)孔間Ct值之差＞0.5，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2.2 數(shù)據(jù)處理 以U6為內(nèi)參基因，加入待測血清，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因均一化處理。待測血清miR-21的相對表達(dá)量公式：RQ=2-??Ct。RQ＜1，則肺癌患者血清中目的基因表達(dá)水平高于正常人群目的基因表達(dá)水平；反之，則肺癌患者血清中目的基因表達(dá)水平低于正常人群目的基因表達(dá)水平。?Ct=CtTarget-CtReference（CtTarget代表待測樣本目標(biāo)基因Ct值均值；CtReference代表待測樣本內(nèi)參基因Ct值均值）。肺癌患者與正常人群血清目的基因表達(dá)水平變化比較公式：RQ=2-??Ct；??Ct=（CtTarget-CtReference）肺癌組-（CtTarget-CtReference）正常組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對miR-21的相對表達(dá)水平（2-??Ct）進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布。數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS19.0軟件分析。統(tǒng)計(jì)方法為獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌miR-21靶基因 使用miRecords數(shù)據(jù)庫得到至少被2種不同算法預(yù)測且經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的miR-21靶基因共計(jì)30個(gè)。利用GeneCards數(shù)據(jù)庫獲取肺癌相關(guān)致病基因共計(jì)22 367個(gè)，將此22 397個(gè)致病基因與上述30個(gè)miR-21靶基因做交集，發(fā)現(xiàn)30個(gè)miR-21靶基因均存在于肺癌發(fā)病相關(guān)基因集合中，由此篩選到肺癌miR-21靶基因共計(jì)30個(gè)，分別為：腫瘤抑制因子原肌球蛋白1（TPM1）、核因子IB（NFIB）、細(xì)胞程序性凋亡蛋白4（PDCD4）、ser?pin家族B成員5（SERPINB5）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A（CDKN1A）、細(xì)胞表面凋亡受體（FAS）、代謝調(diào)節(jié)信號分子C（FAM3C）、同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶3（HIPK3）、跨膜γ羧基酸蛋白4（PRRG4）、肌動蛋白α2（ACTA2）、抗增殖因子2（BTG2）、2型骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體（BMPR2）、雌激素家族1（SESN1）、白介素受體6（IL6R）、細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制因子5（SOCS5）、糖皮質(zhì)激素1（GLC?CI1）、凋亡肽酶激活因子1（APAF1）、溶質(zhì)載體家族16成員10（SLC16A10）、血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶家族成員3（SGK3）、半胱氨酸胞外蛋白質(zhì)2（RP2）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）、肌動蛋白結(jié)合蛋白2（CFL2）、富含半胱氨酸的胞外蛋白質(zhì)（RECK）、金屬肽酶抑制劑3（TIMP3）、甲硫腺苷磷酸化酶（MTAP）、SRY-box轉(zhuǎn)錄因子5（SOX5）、磷酸酶張力蛋白同源物（PTEN）、轉(zhuǎn)移因子1（E2F1）、轉(zhuǎn)化生長因子β受體2（TGFBR2）和細(xì)胞分裂周期25A（CDC25A），見圖1。提示miR-21在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起重要作用。

圖1 肺癌miR-21靶基因Fig.1 miR-21 target genesin lung cancer

2.2 染色體定位 利用UCSC數(shù)據(jù)庫和Map?Gene2Chrom web v2在線分析工具對肺癌miR-21及其靶基因進(jìn)行染色體定位和可視化分析，miR-21位于人類17q23.1染色體，具體位置為chr17：59，841，266-59，841，337，長度22 bp。肺癌miR-21靶基因在染色體分布如圖2。

圖2 肺癌miR-21及其靶基因染色體定位Fig.2 Chromosomal localization of miR-21 and its target genes in lung cancer

圖3 肺癌miR-21靶基因功能注釋圖Fig.3 Functional annotation map of miR-21 target genes in lung cancer

2.3 靶基因功能注釋和互作網(wǎng)絡(luò) 利用DAVID數(shù)據(jù)庫將肺癌miR-21靶基因關(guān)聯(lián)到生物學(xué)功能注釋上，最顯著富集的生物學(xué)功能注釋（P-value≤0.05和Count≥4 genes）見圖3，包括：regulation of cell prolif?eration（細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)，含SGK3，TGFBR2，BM?PR2，F(xiàn)AS4個(gè)基因）、protein phosphorylation（蛋白質(zhì)磷酸化，含GK3，HIPK3，TGFBR2，CDK6 4個(gè)基因）、protein kinase binding（蛋白激酶結(jié)合，含E2F1，AC?TA2，PTEN，CDC25A 4個(gè)基因）、protein binding（蛋白 質(zhì) 綁 定 功 能，含RECK，E2F1，SGK3，F(xiàn)AM3C，RP2，TGFBR2，BMPR2，SOX5，CDK6，IL6R，SOCS5，TPM1，SESN1，PDCD4，TIMP3，PTEN，CDC25A，CD?KN1A，BTG2，SERPINB5，CFL2，MTAP，F(xiàn)AS，APAF1共計(jì)24個(gè)基因）、negative regulation of cell prolifera?tion（細(xì)胞增殖負(fù)調(diào)控，含CDKN1A，BTG2，CDK6，PTEN 4個(gè)基因）、negative regulation of apoptotic pro?cess（細(xì)胞凋亡負(fù)調(diào)控，含CDKN1A，HIPK3，F(xiàn)AS，PTEN，PDCD4 5個(gè)基因）、extracellular exosome（胞外，含BTG2，ACTA2，SERPINB5，F(xiàn)AM3C，CFL2，RP2，MTAP，APAF1，F(xiàn)AS，TIMP3共計(jì)10個(gè)基因）、cytosol（細(xì)胞液，含SGK3，ACTA2，TGFBR2，CDK6，TPM1，PDCD4，PTEN，SESN1，CDC25A，CDKN1A，BTG2，MTAP，APAF1，F(xiàn)AS共計(jì)14個(gè)基因）、cyto?plasm（細(xì)胞質(zhì)，含ACTA2，SERPINB5，HIPK3，RP2，BMPR2，MTAP，CDK6，F(xiàn)AS，GLCCI1，SOCS5，SESN1，PTEN，PDCD4，CDC25A共計(jì)14個(gè)基因）、ATP binding（ATP結(jié)合，含SGK3，ACTA2，HIPK3，TGFBR2，BMPR2，CDK6，APAF1 7個(gè)基因）、apoptot?ic process（細(xì)胞 凋亡過程，含HIPK3，TGFBR2，APAF1，F(xiàn)AS，PTEN，PDCD4 6個(gè)基因），miRNA-21靶基因主要分布在細(xì)胞外，參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的調(diào)控過程、具有與ATP和蛋白質(zhì)結(jié)合的功能，miRNA-21靶基因的異常表達(dá)可能與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。

圖4 肺癌miR-21靶基因互作網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Interaction network of miR-21 target genes in lung cancer

圖5 血清miRNA-21表達(dá)水平和ROC曲線Fig.5 Expression level and ROC curves of miRNA-21 in serum

利用STRING11.0在線分析工具和Cytoscape 3.6.1軟件構(gòu)建了肺癌miR-21靶基因編碼產(chǎn)物蛋白的互作網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)有24個(gè)靶基因，分別為PTEN，PDCD4，CDKN1A，TIMP3，SERPINB5，CDK6，RECK，TPM1，BTG2，CDC25A，E2F1，APAF1，ACTA2，TGF?BR2，F(xiàn)AS，SESN1，HIPK3，SGK3，PRRG4，GLCCI1，NFIB，F(xiàn)AM3C，CFL2和MTAP之間存在蛋白互作關(guān)系，其中PTEN、PDCD4和CDKN1A為關(guān)鍵的、重要的中心節(jié)點(diǎn)蛋白（圖4）。

2.4 血清miR-21的表達(dá)與診斷價(jià)值評估 提取的總RNA OD260/OD280為1.8～2.1可用于進(jìn)一步檢測。miR-21及U6內(nèi)參均能實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，溶解曲線為單峰，具有特異性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。血清miR-21在肺癌患者血清中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于正常人群（圖5A），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；各型肺癌相比（圖5B），腺癌患者血清miR-21的表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與鱗癌患者（P＜0.05），而后兩者之間無差異（P＞0.05）。根據(jù)各型肺癌患者血清miR-21擴(kuò)增數(shù)據(jù)，繪制受試者ROC曲線，直觀反映其診斷價(jià)值。血清miR-21診斷肺癌（圖5C）、小細(xì)胞肺癌（圖5D）、非小細(xì)胞肺癌（圖5E）、鱗狀上皮細(xì)胞肺癌（圖5F）、腺癌（圖5G）的AUC分別為0.915、0.879、0.934、0.911、0.962，見表1。使用Medcalc軟件，根據(jù)ROC曲線，獲得血清miR-21診斷肺癌及不同病理類型肺癌的臨界值、靈敏度和特異性（表2）。

表1 各型肺癌患者血清miR-21的診斷效能Tab.1 Diagnostic efficacy of serum miR-21 in patients with various types of lung cancer

表2 血清miR-21對于肺癌診斷及其病理分型的價(jià)值Tab.2 Value of serum miR-21 for diagnosis and pathological type of lung cancer

3 討論

惡性腫瘤的診斷是現(xiàn)代醫(yī)療和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)，引起廣泛關(guān)注。實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)早期準(zhǔn)確診斷，能夠明顯延長患者生存期，并降低其死亡率。mi-RNAs通過與靶mRNA的3'端非翻譯區(qū)結(jié)合，誘導(dǎo)靶mRNA降解或抑制其翻譯，從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)。自發(fā)現(xiàn)miR-Lin4至今，人類基因組中發(fā)現(xiàn)的miRNAs基因已達(dá)2 500個(gè)以上，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用［13］。

人類miR-21位于人類染色體17q23.1，其靶基因主要分布在1、2、3、6、7、8、9、10、11、12、14、15、17、18、20、22和X染色體上，而在5、13、16、19、21和Y染色體上沒有肺癌關(guān)聯(lián)的miR-21靶基因。有研究表明miR-21的異常表達(dá)與實(shí)體腫瘤密切相關(guān)，可能通過下調(diào)腫瘤抑制因子原肌球蛋白1（TPM1）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）通路相關(guān)基因、TCF21-KISS1基因、p53基因、細(xì)胞程序性凋亡蛋白4（PDCD4）促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，抵抗細(xì)胞分化凋亡，發(fā)揮癌基因功能［14-19］。本研究獲得的miR-21靶基因中，APAF1、FAS、GLCCI1、IL6R、NFIB和SOX5與細(xì)胞凋亡、分化過程有關(guān)，miR-21可能通過調(diào)控這些基因抵抗細(xì)胞凋亡分化，引發(fā)癌變；BTG2、CDC25A、CDK6、CD?KN1A、E2F1、SGK3、TGFBR2和TIMP3作為細(xì)胞周期的監(jiān)測點(diǎn)，控制細(xì)胞周期的正常過度，miR-21可通過調(diào)控這些基因促進(jìn)細(xì)胞增殖；ACTA2、BMPR2、CFL2和TPM1參與肌絲肌球蛋白的合成，miR-21可通過調(diào)控這些基因進(jìn)行微絲微管生成的調(diào)節(jié)，進(jìn)而影響細(xì)胞分裂過程；FAM3C被鑒定為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移進(jìn)展的新型調(diào)節(jié)劑，可用于區(qū)分臨床早期患者的預(yù)后［20］。有研究表明miR-21參與非小細(xì)胞肺癌上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化狀態(tài)的自分泌和旁分泌回路［21］；HIPK3在癌癥組織和細(xì)胞系中表達(dá)不同，在癌癥細(xì)胞生長，轉(zhuǎn)移和血管生成中起雙重作用，可能是癌癥治療的潛在靶標(biāo)［22］；MTAP具有腫瘤抑制活性，該基因編碼一種在多胺代謝中起主要作用的酶，其在許多癌癥中均缺乏［23］；PTEN是一種抑癌基因，通過負(fù)調(diào)節(jié)AKT/PKB信號傳導(dǎo)途徑起抑癌作用［24］，而miR-21可通過此途徑誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用［25］；RECK基因編碼的蛋白質(zhì)是富含半胱氨酸的胞外蛋白質(zhì)，其表達(dá)在許多腫瘤和各種癌基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中均被強(qiáng)烈抑制，RECK的過表達(dá)可通過影響相關(guān)蛋白的表達(dá)來促進(jìn)p53信號通路的激活，進(jìn)而抑制宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲［26］；RP2是X連鎖性視網(wǎng)膜色素變性的原因之一，多數(shù)X連鎖RP患者的色素性視網(wǎng)膜炎GTPase調(diào)節(jié)劑或RP2基因均發(fā)生突變［27］；SERPINB5是一種腫瘤抑制蛋白，在細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)可用于預(yù)測p期IA肺腺癌患者的不良預(yù)后［28］；SESN1基因編碼雌激素家族的成員，編碼的蛋白通過激活A(yù)MP激活的蛋白激酶介導(dǎo)p53對細(xì)胞生長的抑制［29］；SLC16A10是質(zhì)膜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的成員，在頭頸癌中SLC16A10的表達(dá)量與預(yù)后存在明顯正相關(guān)，該基因可能是一種腫瘤抑制基因［30］；SOCS5是細(xì)胞因子誘導(dǎo)的細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)因子，與過敏性支氣管哮喘有關(guān)［31］。

DAVID富集通路結(jié)果顯示，miR-21靶基因主要富集在“protein binding”通路上，蛋白質(zhì)作為反式作用因子與DNA結(jié)合，可影響細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期等生物學(xué)過程的發(fā)生，而腫瘤形成是細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)節(jié)和控制發(fā)生嚴(yán)重紊亂的結(jié)果［32-33］。

有研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清miR-21表達(dá)水平高于正常健康人群［34］；對于非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移與預(yù)后具有診斷價(jià)值，其表達(dá)水平降低可作為肺癌治療效果的指標(biāo)［35-36］，但尚未有miR-21表達(dá)水平針對肺癌病理分型檢測的報(bào)道。

為了評價(jià)血清miR-21對于肺癌的診斷和分型的價(jià)值，本研究采用RT-qPCR方法，檢測不同病理類型肺癌患者血清miR-21的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，肺癌患者總體血清miR-21表達(dá)水平遠(yuǎn)高于正常人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），與文獻(xiàn)報(bào)道相同；且腺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與鱗癌患者（P＜0.05），而小細(xì)胞肺癌與鱗癌兩者之間無顯著差異（P＞0.05），說明血清miR-21的表達(dá)與肺癌相關(guān)，且表達(dá)水平與肺癌的病理類型有關(guān)。

進(jìn)一步利用ROC曲線評價(jià)血清miR-21的診斷效能，已知ROC曲線下面積（AUC）越大，其臨床診斷效能越大，當(dāng)AUC＜0.5時(shí)，無診斷價(jià)值；AUC＞0.9時(shí)具有高診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血清miR-21診斷效能良好：肺癌AUC為0.915；小細(xì)胞肺癌為0.879；非小細(xì)胞肺癌為0.934，肺鱗癌為0.911，腺癌為0.963。結(jié)果揭示，血清miR-21對于各種類型肺癌均具有較好的診斷價(jià)值；針對病理分型，血清miR-21對于非小細(xì)胞肺癌的診斷優(yōu)于小細(xì)胞肺癌，特別是對于腺癌具有最高的診斷價(jià)值，可能是作為AC早期診斷的高度敏感，穩(wěn)定和可重復(fù)的生物標(biāo)記。

與臨床傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物相比，目前，臨床上診斷小細(xì)胞肺癌推薦首選胃泌素釋放肽前體（ProGRP），ProGRP診斷小細(xì)胞肺癌AUC為0.921，臨界值為65.66 ng/L，靈敏度和特異性分別為90.90%和89.90%，對于小細(xì)胞肺癌的診斷，該指標(biāo)優(yōu)于血清miR-21，但是ProGRP不適合非小細(xì)胞肺癌的診斷［37］。肺鱗癌診斷推薦首選細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段（CYFRA21-1）和鱗癌抗原（SCC-Ag）；腺癌則以癌胚抗原（CEA）和糖類抗原125（CA-125）為首選。魏晟瀟等［38］研究揭示，CEA和CA-125診斷非小細(xì)胞肺癌的AUC分別為0.839和0.843，其靈敏度分別為44.70%和59.30%，特異性分別為95.30%和90.40%。而血清miR-21診斷非小細(xì)胞肺癌的AUC為0.934、靈敏度為92.31%、特異性為80.00%，對比可知，對于非小細(xì)胞肺癌的診斷，血清miR-21優(yōu)于CEA和CA-125。李沫等［39］研究揭示，CYFRA21-1、SCC-Ag和CEA對于肺癌診斷的AUC分別為0.710、0.403和0.667；靈敏度分別為70.50%、23.00%和52.50%；特異性分別為66.00%、69.80%和71.70%；CYFRA21-1和SCC-Ag診斷肺鱗癌的靈敏度分別為83.30%和46.70%；CEA診斷腺癌的靈敏度為63.00%；CYFRA21-1診斷肺鱗癌的靈敏度高于其他類型肺癌，CEA診斷腺癌的靈敏度高于其他類型肺癌，而血清miR-21診斷肺鱗癌的AUC、靈敏度和特異性分別為0.911、69.23%和100.00%，優(yōu)于CYFRA21-1，血清miR-21診斷腺癌的AUC、靈敏度和特異性分別為0.963、92.31%和88.89%，優(yōu)于CEA。

綜上，miRNA-21靶基因主要分布在細(xì)胞外，參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖的調(diào)控過程、具有與ATP和蛋白質(zhì)結(jié)合的功能，miRNA-21靶基因的異常表達(dá)可能與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。肺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于正常人群；不同病理類型肺癌相比，肺腺癌患者血清miR-21表達(dá)水平顯著高于小細(xì)胞肺癌與肺鱗癌患者。血清miR-21表達(dá)水平的測定能夠輔助肺癌診斷，且有望用于腺癌的鑒別和病理分型，但尚無法區(qū)分小細(xì)胞肺癌與肺鱗癌。血清miR-21作為診斷肺癌的潛在腫瘤標(biāo)志物，具有廣泛應(yīng)用前景，一旦其檢測方法和參考區(qū)間得以明確，并與傳統(tǒng)肺癌腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測，將顯著提高肺癌診斷效率，改善患者治愈率與生存期，臨床價(jià)值不容小覷。