易強(qiáng)　謝利民　鄺高艷　萬云峰　李肇華　曹寅生

〔摘要〕 目的 運(yùn)用不依賴加壓固定的體外關(guān)節(jié)制動(dòng)造模方式，制備皮膚軟組織健康的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型。方法 選用雄性新西蘭大白兔18只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組、傳統(tǒng)Videman法造模組（簡(jiǎn)稱Videman組）、懸吊式外固定法造模組（簡(jiǎn)稱懸吊組），各6只。正常組不予任何處理，Videman組單純采用管型高分子石膏完全制動(dòng)兔左膝關(guān)節(jié)于伸直位，懸吊組采用懸吊式外固定支具有限制動(dòng)兔左膝關(guān)節(jié)于伸直位。6周后解除關(guān)節(jié)制動(dòng)，觀察兔皮膚軟組織和左膝關(guān)節(jié)情況，用Bates-Jensen傷口評(píng)估工具（the Bates-Jensen wound assessment tool， BWAT）對(duì)皮膚軟組織健康情況進(jìn)行評(píng)估，用Lequesne MG評(píng)分對(duì)左膝關(guān)節(jié)功能進(jìn)行評(píng)估;空氣栓塞法處死動(dòng)物，對(duì)左膝關(guān)節(jié)軟骨行大體觀察和HE染色病理學(xué)觀察，并用Pelletier評(píng)分及Mankin評(píng)分對(duì)軟骨損傷情況進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果 （1）皮膚軟組織健康情況比較，與正常組和懸吊組相比，Videman組BWAT評(píng)分升高（P<0.05）;懸吊組與正常組BWAT評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）左膝關(guān)節(jié)功能比較，與正常組相比，Videman組和懸吊組Lequesne MG評(píng)分均顯著升高（P<0.01）;Videman組和懸吊組Lequesne MG評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）正常組左膝關(guān)節(jié)軟骨大體觀察和HE染色觀察結(jié)果均正常，Videman組和懸吊組均見典型的軟骨破壞，符合膝骨關(guān)節(jié)炎病理學(xué)改變。與正常組相比，Videman組和懸吊組Pelletier評(píng)分及Mankin評(píng)分均顯著升高（P<0.01），達(dá)到輕中度骨關(guān)節(jié)炎的評(píng)分等級(jí);Videman組和懸吊組Pelletier評(píng)分及Mankin評(píng)分比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 懸吊式外固定支具有限制動(dòng)膝關(guān)節(jié)于伸直位的造模方式可成功制備皮膚軟組織健康的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，其造模效果與傳統(tǒng)Videman造模法效果一致，但對(duì)皮膚軟組織的保護(hù)能力強(qiáng)于后者。

〔關(guān)鍵詞〕 膝骨關(guān)節(jié)炎;懸吊;有限制動(dòng);動(dòng)物模型;兔

〔中圖分類號(hào)〕R684;R274? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.02.014

〔Abstract〕 Objective To establish the model of knee osteoarthritis in rabbits with healthy skin and soft tissue by using the method of external joint braking with unpressurized fixation. Methods A total of 18 male New Zealand white rabbits were selected and randomly divided into the normal group， the traditional Videman model group （Videman group） and the suspension external fixation model group （suspension group） according to random number table method， with 6 rabbits in each group. The normal group did not do any treatment， the Videman group simply used tube type polymer gypsum to completely fix the left knee joint in the extension position， and the suspension group used suspension external fixator to restrict the movement of the left knee joint in the extension position. After 6 weeks， the joint external fixation was removed. The condition of skin soft tissue and the left knee joint were observed. The health status of skin soft tissue was evaluated by the Bates-Jensen wound assessment tool（BWAT）. The function of left knee joint was evaluated by Lequesne MG score. Then killed the rabbits by air embolization. The cartilage of the left knee joint was observed by gross observation and pathological observation by HE staining. The Pelletier score and Mankin score were usd to evaluate the cartilage injury. Results （1） Comparison of skin and soft tissue health， compared with the normal group and the suspension group， BWAT score in the Videman group was increased （P<0.05）; there was no statistically significant difference in BWAT scores between the suspension group and the normal group （P>0.05）. （2） Comparison of left knee joint function， Lequesne MG score in the Videman group and the suspension group was significantly higher than that in the normal group （P<0.01）; there was no statistically significant difference in Lequesne MG score between the Videman group and the suspension group （P>0.05）. （3） Gross observation and HE staining observation of left knee articular cartilage in the normal group were all normal， the Videman group and the suspension group all showed typical pathological changes of knee osteoarthritis. Compared with the normal group， Pelletier and Mankin scores in the Videman group and the suspension group were significantly increased （P<0.01）， reaching the scoring level of mild to moderate osteoarthritis; there were no statistically significant difference in Pelletier score and Mankin score between the Videman group and the suspension group （P>0.05）. Conclusion The rabbit model of knee osteoarthritis with healthy skin and soft tissue can be successfully established by the method of hanging external fixator with limited immobilization the knee joint to extension position， its modeling effect is consistent with that of traditional Videman modeling method，but the protection ability to the skin soft tissue is stronger than the latter.

〔Keywords〕 knee osteoarthritis; hanging; limited immobilization; animal model; rabbit

骨關(guān)節(jié)炎是一種多因素綜合所致的關(guān)節(jié)退化性疾病，可影響體內(nèi)多關(guān)節(jié)，其中膝關(guān)節(jié)為高發(fā)病關(guān)節(jié)[1]，據(jù)估計(jì)，在60歲以上的成年人中，膝骨關(guān)節(jié)炎的男性發(fā)病率約為10%，女性發(fā)病率約為13%，是老年人口致殘的主要原因之一[2]。膝骨關(guān)節(jié)炎目前無特效治療藥物，其確切致病機(jī)制仍然未知[3-4]，研究[5]發(fā)現(xiàn)炎癥因子與膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。因此，制備合理的動(dòng)物模型是相關(guān)研究深入開展的重要基礎(chǔ)。膝骨關(guān)節(jié)炎造模方法多樣，其中傳統(tǒng)Videman造模法[6]是經(jīng)典的誘導(dǎo)性體外關(guān)節(jié)制動(dòng)動(dòng)物膝骨關(guān)節(jié)炎造模法，該方法不受手術(shù)創(chuàng)傷和關(guān)節(jié)內(nèi)操作的影響，可較好地模擬人類膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展模式[7]，適用于藥物對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型炎癥遞質(zhì)表達(dá)影響的研究[8]。既往研究[9-12]表明傳統(tǒng)Videman造模法通過體外關(guān)節(jié)的完全制動(dòng)可成功制備膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，但實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)其加壓固定的造模方式易致模型動(dòng)物造模側(cè)下肢產(chǎn)生缺血性腫脹等皮膚軟組織損傷，而其產(chǎn)生的炎癥成為傳統(tǒng)Videman造模法誘導(dǎo)的膝骨關(guān)節(jié)炎模型的主要干擾因素[13-15]。因此，運(yùn)用不依賴加壓固定的體外關(guān)節(jié)制動(dòng)造模方式制備皮膚軟組織健康的動(dòng)物膝骨關(guān)節(jié)炎模型十分必要。本研究對(duì)傳統(tǒng)Videman造模法加以改進(jìn)，用懸吊式外固定支具有限制動(dòng)膝關(guān)節(jié)于伸直位的造模方式建立皮膚軟組織健康的動(dòng)物膝骨關(guān)節(jié)炎模型。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選擇6月齡雄性新西蘭大白兔18只，體質(zhì)量（2 750±250） g;由湖南太平洋生物科技有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2020-0005;飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)單位許可證號(hào)：SYXK（湘）2019-0009。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，觀察無異常后按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為正常組、傳統(tǒng)Videman法造模組（簡(jiǎn)稱Videman組）、懸吊固定法造模組（簡(jiǎn)稱懸吊組），每組6只。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審查備案號(hào)：202007070001）。

1.2? 主要實(shí)驗(yàn)材料

高分子繃帶（廣東省揭西縣泰洲醫(yī)療科技有限公司，201600163）;彈性繃帶（浙江安吉縣精誠醫(yī)用繃帶廠，20150001）;高分子繃帶（廣東省揭西縣泰洲醫(yī)療科技有限公司，201600163）;彈性繃帶（浙江安吉縣精誠醫(yī)用繃帶廠，20150001）;醫(yī)用高分子石膏（上海優(yōu)加醫(yī)療用品有限公司，20200403）;透明膠帶（上海晨光文具股份有限公司，AJD97338）;細(xì)鐵絲網(wǎng)（江蘇元井匯有限公司，52775616729）;0.5 mm鐵絲;剪刀;尖嘴鉗。

1.3? 主要實(shí)驗(yàn)試劑

4%多聚甲醛（北京蘭杰柯科技有限公司，批號(hào)BL600A）;10% EDTA脫鈣液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)20200616）;蘇木素伊紅染液套裝（武漢谷歌生物科技有限公司，批號(hào)G1005）;無水乙醇（批號(hào)100092683）、二甲苯（批號(hào)100023418）、鹽酸（批號(hào)10011008）、氨水（批號(hào)10002118）、中性樹膠（批號(hào)10004160）均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.4? 主要實(shí)驗(yàn)器械

脫水機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，JJ-12J）;包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，JB-P5）;病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司，RM2016）;凍臺(tái)（武漢俊杰電子有限公司，JB-L5）;組織攤片機(jī)（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，KD-P）;烤箱（天津市萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司，GFL-230）;載玻片及蓋玻片（江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司，10127105P-G）;正置光學(xué)顯微鏡（日本尼康公司，Nikon Eclipse E100）;成像系統(tǒng)（日本尼康公司，Nikon DS-U3）。

1.5? 動(dòng)物模型的制備

正常組：不做任何處理。

Videman組：?jiǎn)渭儾捎霉苄透叻肿邮嗤耆苿?dòng)兔左膝關(guān)節(jié)于伸直位[6]。

懸吊組：將新西蘭大白兔左膝關(guān)節(jié)短暫固定于伸直位，用皮尺測(cè)量?jī)?nèi)踝關(guān)節(jié)上1.0 cm至大腿內(nèi)側(cè)根部下0.5 cm的直線距離（一號(hào)數(shù)據(jù)），測(cè)量大腿內(nèi)側(cè)根部水平的大腿周長(zhǎng)（二號(hào)數(shù)據(jù)），測(cè)量?jī)?nèi)踝關(guān)節(jié)上1.0 cm處的小腿周長(zhǎng)（三號(hào)數(shù)據(jù)），隨即解除固定;將高分子繃帶塑形成管型，其縱軸長(zhǎng)度為一號(hào)數(shù)據(jù)長(zhǎng)度，上端內(nèi)周長(zhǎng)為二號(hào)數(shù)據(jù)長(zhǎng)度加0.5 cm，下端內(nèi)周長(zhǎng)為三號(hào)數(shù)據(jù)長(zhǎng)度加3.0～4.0 cm;修剪管型高分子繃帶上下緣毛糙部分，并包繞數(shù)層透明膠帶使之光滑、圓鈍;將細(xì)鐵絲網(wǎng)緊密覆蓋管型高分子繃帶外表面，并用多層透明膠帶纏繞固定;制作直徑約為8.0 mm的細(xì)鐵絲環(huán)，使之固定于管型高分子繃帶上緣，取寬5.0 cm，長(zhǎng)30.0 cm的彈性繃帶，將其穿過細(xì)鐵絲環(huán);再次臨時(shí)固定模型兔左下肢于伸直位，將管型高分子繃帶自下而上套入模型兔左下肢，在模型兔大腿根部稍前方用彈性繃帶環(huán)繞軀干打結(jié)，調(diào)整彈性繃帶環(huán)的松緊度使管型高分子繃帶下緣位于踝關(guān)節(jié)上1.0 cm，上緣位于大腿內(nèi)側(cè)根部下0.5 cm，使其左膝關(guān)節(jié)有限制動(dòng)于伸直位。見圖1。

Videman組和懸吊組兔造模支具安裝完成后觀察30 min，如出現(xiàn)肢體遠(yuǎn)端血運(yùn)不良或軀干處彈性繃帶捆綁過緊應(yīng)立刻拆除固定，等血運(yùn)恢復(fù)后重新操作;6周造模期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)有造模支具固定失效，立刻予以重新固定。

1.6? 標(biāo)本取材及處理

造模6周后用空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)兔，解剖暴露兔左膝關(guān)節(jié)，切取股骨頭全層關(guān)節(jié)軟骨，以4%多聚甲醛液固定48 h后，放入10% EDTA脫鈣液中脫鈣處理，脫鈣完成后石蠟包埋，縱行切片，每個(gè)標(biāo)本切3張，間隔100 μm切片，切片厚度為5 μm，將組織切片置于60 ℃恒溫箱中烘烤1 h。依次將切片放入二甲苯Ⅰ20 min、二甲苯Ⅱ20 min、無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min、75%乙醇5 min，自來水洗，蘇木素染色3～5 min，鹽酸水溶液分化，氨水水溶液返藍(lán)，水洗，依次將切片放入85%、95%的梯度乙醇脫水，于伊紅染液中染色5 min;依次將切片放入無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min、無水乙醇Ⅲ5 min、二甲苯Ⅰ5 min、二甲苯Ⅱ5 min透明化處理，中性樹膠封片。最后進(jìn)行顯微鏡鏡檢及圖像采集分析。

1.7? 指標(biāo)觀察與檢測(cè)

1.7.1? 一般觀察? 每日檢查并維護(hù)造模支具防止其固定失效;造模6周時(shí)取下造模支具，觀察兔外觀形態(tài)并拍取照片;觀察統(tǒng)計(jì)3組兔的存活率。

1.7.2? 皮膚軟組織Bates-Jensen傷口評(píng)估工具（the

Bates-Jensen wound assessment tool， BWAT）評(píng)分? 造模6周時(shí)用BWAT[16-17]對(duì)實(shí)驗(yàn)兔皮膚軟組織的健康情況進(jìn)行評(píng)估，BWAT評(píng)分包含13個(gè)項(xiàng)目。BWAT對(duì)9個(gè)特征（壞死組織類型、壞死組織數(shù)量、肉芽組織、上皮化程度、滲液類型、滲液數(shù)量、周圍皮膚顏色、水腫、硬結(jié)）進(jìn)行主觀評(píng)估，評(píng)分等級(jí)為1～5分，其中1分表示該特征健康，5分表示該特性最不健康;其余4個(gè)特征（大小、深度、邊緣、破壞程度）的等級(jí)為0～5分，0分表示“不存在”?？偟梅址秶鸀?～65分，皮膚軟組織受壓病變程度和總分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)性。

1.7.3? 膝關(guān)節(jié)Lequesne MG評(píng)分? 造模6周時(shí)采用 Lequesne MG[18]評(píng)分評(píng)估實(shí)驗(yàn)兔左膝關(guān)節(jié)功能，包括疼痛刺激反應(yīng)（0～3分）、步態(tài)改變（0～3分）、關(guān)節(jié)活動(dòng)（0～3分）、關(guān)節(jié)腫脹（0～2分），總得分范圍為0～11分，膝關(guān)節(jié)功能障礙程度和總分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)性。

1.7.4? 左膝關(guān)節(jié)軟骨大體觀察及Pelletier評(píng)分? 造模6周時(shí)對(duì)解剖完成的兔左膝關(guān)節(jié)標(biāo)本行肉眼下觀察并拍取左股骨髁關(guān)節(jié)面照片。采用Pelletier評(píng)分[19]評(píng)估軟骨損傷情況：（1）0分：關(guān)節(jié)面光整，色澤如常;（2）1分：關(guān)節(jié)面粗糙，有小的裂隙且色澤灰暗;（3）2分：關(guān)節(jié)面糜爛，軟骨缺損深達(dá)軟骨表、中層;（4）3分：關(guān)節(jié)面潰瘍形成，缺損深達(dá)軟骨深層;（5）4分：軟骨剝脫，軟骨下骨暴露。軟骨損傷程度和分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)性。

1.7.5? 左膝關(guān)節(jié)軟骨HE染色觀察? 在200倍光學(xué)顯微鏡下觀察造模6周時(shí)實(shí)驗(yàn)兔左膝關(guān)節(jié)軟骨HE染色標(biāo)本，每張切片選擇3個(gè)視野。

1.7.6? 左膝關(guān)節(jié)軟骨Mankin評(píng)分? 參照Mankin評(píng)分[20]進(jìn)行分?jǐn)?shù)統(tǒng)計(jì)，滿分14分，軟骨退變程度和分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)性。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：正常（0～2分），輕度退變（3～7分），中度退變（8～11分），重度退變（12～14分）。

1.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以“x±s”表示，若滿足正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行兩兩比較;若不滿足正態(tài)性和方差齊性，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis法;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 一般觀察

（1）6周造模期內(nèi)，Videman組有3只兔予以重新固定，原因?yàn)樵炷Ｖ泻笃谕米笙轮∪馕s致加壓固定的管型高分子石膏滑脫及管型高分子石膏被啃咬破壞致固定失效。懸吊組有1只兔予以重新固定，原因?yàn)楣苄透叻肿涌噹н吘壟c彈性繃帶連接處被啃咬破壞致模具脫落。

（2）造模6周時(shí)拆除造模支具，正常組兔左下肢毛發(fā)松軟，左膝關(guān)節(jié)屈伸自如;Videman組兔左下肢毛發(fā)稀疏凌亂，左膝關(guān)節(jié)完全僵直;懸吊組兔左下肢毛發(fā)松軟，左膝關(guān)節(jié)完全僵直。

（3）實(shí)驗(yàn)第6周末正常組、Videman組、懸吊組兔存活率均為100%。

2.2? 皮膚軟組織BWAT評(píng)分

BWAT評(píng)分結(jié)果顯示，正常組為（9.166±0.408）分，Videman組為（12.833±2.483）分，懸吊組為（9.333±0.516）分。與正常組和懸吊組相比，Videman組BWAT評(píng)分較高（P<0.05）;懸吊組與正常組BWAT評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖2。

2.3? 膝關(guān)節(jié)Lequesne MG評(píng)分

Lequesne MG評(píng)分結(jié)果顯示，正常組為（0.000±0.000）分，Videman組為（7.333±0.816）分，懸吊組為（7.500±1.048）分。與正常組相比，Videman組和懸吊組 Lequesne MG評(píng)分均顯著升高（P<0.01）;Videman組與懸吊組 Lequesne MG評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖3。

2.4? 左膝關(guān)節(jié)軟骨大體觀察及Pelletier評(píng)分

造模6周時(shí)Videman組和懸吊組兔左膝股骨內(nèi)側(cè)或外側(cè)髁關(guān)節(jié)面軟骨變薄，色澤灰暗，表面向下凹陷形成潰瘍。正常組兔左膝股骨內(nèi)側(cè)及外側(cè)髁關(guān)節(jié)面光整，軟骨色澤正常。見圖4。

Pelletier評(píng)分結(jié)果顯示，正常組為（0.000±0.000）分，Videman組為（2.500±0.547）分，懸吊組為（2.666±0.516）分。與正常組相比，Videman組與懸吊組Pelletier評(píng)分均顯著升高（P<0.01）;Videman組與懸吊組Pelletier評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖5。

2.5? 左膝關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本HE染色觀察及Mankin評(píng)分

造模6周時(shí)的Videman組和懸吊組兔左膝關(guān)節(jié)軟骨HE染色標(biāo)本可見淺表區(qū)不平整，存在破裂或缺失，表層軟骨細(xì)胞減少，軟骨基質(zhì)及膠原纖維增生，深層軟骨細(xì)胞數(shù)目異常，表現(xiàn)為細(xì)胞簇聚或數(shù)目減少，為典型的骨關(guān)節(jié)炎病理學(xué)改變。正常組兔左膝軟骨HE染色標(biāo)本組織觀察情況正常。見圖6。

Mankin評(píng)分結(jié)果顯示，正常組為（0.666±0.516）分，Videman組為（8.000±1.095）分，懸吊組為（8.166±1.471）分。與正常組相比，Videman組與懸吊組Mankin評(píng)分均顯著升高（P<0.01）;Videman組與懸吊組Mankin評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖7。

3 討論

3.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

兔是骨關(guān)節(jié)炎造模的常用動(dòng)物之一[21]，最近研究[22]結(jié)果表明雌激素可能對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展具有保護(hù)作用，為排除雌激素對(duì)本實(shí)驗(yàn)的干擾，故選用雄性兔作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。由于幼年兔軟骨的自發(fā)愈合特性較強(qiáng)[23]，本實(shí)驗(yàn)選擇6月齡的兔以保證骨骼的成熟[24]。

3.2? 改進(jìn)造模原因

體外關(guān)節(jié)制動(dòng)動(dòng)物膝骨關(guān)節(jié)炎造模法如傳統(tǒng)Videman造模法[25]用管型固定物把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膝關(guān)節(jié)固定于伸直位，經(jīng)過5～6周的完全性體外關(guān)節(jié)制動(dòng)，膝關(guān)節(jié)軟骨的會(huì)發(fā)生與骨關(guān)節(jié)炎臨床病理改變相似的關(guān)節(jié)退變[26]。但實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)Videman法加壓固定的造模方式因管型固定物需與兔造模側(cè)下肢緊密接觸，易致兔皮膚軟組織產(chǎn)生壓迫性損傷，導(dǎo)致其會(huì)陰感染[11]、下肢缺血性腫脹[10，27]、壓瘡[9，12]等，甚至由壓瘡引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征[28]。在膝骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病過程中，關(guān)節(jié)組織會(huì)產(chǎn)生并釋放如白細(xì)胞介素1、白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子等炎性因子，進(jìn)行膝骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的研究需要測(cè)定相關(guān)炎性因子在血漿含量[29-30]，而模型動(dòng)物皮膚軟組織損傷時(shí)也會(huì)導(dǎo)致血漿中白細(xì)胞介素1、白細(xì)胞介素6和腫瘤壞死因子等炎性因子的含量異常[31-32]，故當(dāng)膝骨關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物有皮膚軟組織損傷時(shí)，其血漿中與膝骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制相關(guān)的炎性因子檢測(cè)結(jié)果將出現(xiàn)誤差。由于傳統(tǒng)Videman造模法加壓固定的造模方式有以上不足，因此，本研究對(duì)其加以改進(jìn)，探索以不依賴加壓固定的體外關(guān)節(jié)制動(dòng)造模方式制備皮膚軟組織健康的膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。

3.3? 改進(jìn)優(yōu)勢(shì)分析

（1）不同于傳統(tǒng)Videman造模法加壓固定和完全制動(dòng)的造模方式，本造模法的固定方式為懸吊固定，依靠綁扎在模型兔軀干的彈性繃帶將周徑稍大于兔下肢的管型固定物懸吊在其下肢上，制動(dòng)方式為有限制動(dòng)，通過管型固定物限制兔膝關(guān)節(jié)的屈伸范圍在0°～10°。懸吊固定使整個(gè)外固定支具重量由兔四肢分擔(dān)，不會(huì)出現(xiàn)造模側(cè)下肢負(fù)重過大影響髖部活動(dòng)的現(xiàn)象。有限制動(dòng)的情況下，管型固定物不會(huì)對(duì)動(dòng)物模型造模側(cè)下肢形成環(huán)形加壓，能有效防止壓迫性皮膚軟組織損傷出現(xiàn)。（2）傳統(tǒng)Videman造模法固定支具的制作方式是在體制作，而本造模法為離體制作，固定支具離體制作完成后統(tǒng)一安裝可大幅度縮短不同動(dòng)物個(gè)體之間的造模時(shí)間差。（3）據(jù)統(tǒng)計(jì)，傳統(tǒng)Videman造模法外固定支具的安裝、拆卸耗時(shí)較長(zhǎng)[11]，特別是拆卸，常耗時(shí)數(shù)十分鐘。本造模法安裝調(diào)試過程可控制在5 min內(nèi)，拆卸時(shí)剪斷懸吊帶，向下取出管型固定物，數(shù)秒鐘便能完成;其快速安裝、拆卸的特點(diǎn)使得在大批量造模時(shí)能更頻繁地檢查固定支具覆蓋范圍內(nèi)皮膚軟組織的健康情況，及時(shí)預(yù)防或消除造模導(dǎo)致的不必要損傷。（4）對(duì)比傳統(tǒng)Videman造模法，本造模法拆卸外固支具時(shí)不破壞其管型固定物的完整性，能避免劃傷模型兔皮膚，且整個(gè)造模過程可單人操作，無需麻醉。（5）本造模法兔造模側(cè)下肢與管型固定物間有較大間隙，空氣可通過間隙進(jìn)行流通，其透氣性能優(yōu)于傳統(tǒng)Videman造模法。

綜上所述，通過懸吊式外固定支具有限制動(dòng)膝關(guān)節(jié)于伸直位的造模方式可成功制備皮膚軟組織健康的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，其造模效果與傳統(tǒng)Videman造模法一致，但對(duì)皮膚軟組織的保護(hù)能力強(qiáng)于后者，可能更適用于藥物對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型炎癥遞質(zhì)表達(dá)影響的研究。

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