楊玉婷，劉云華，劉玉紅，黃志芳，陳 燕，易進(jìn)海*

1成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都 611137；2四川省中醫(yī)藥科學(xué)院 中藥材品質(zhì)及創(chuàng)新中藥研究四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 610041

川芎為傘形科藁本屬植物L(fēng)igusticumchuanxiongHort. 的干燥根莖，其味辛、微苦、性溫，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛等功效，被譽(yù)為“血中之氣藥”，用于胸痹心痛，跌撲腫痛，月經(jīng)不調(diào)，癥瘕腹痛，風(fēng)濕痹痛等癥[1]。川芎揮發(fā)油(川芎油)是川芎的重要有效組分之一，主要有效成分為藁本內(nèi)酯，具有很強(qiáng)的解痙、平喘、鎮(zhèn)靜等作用[2]，臨床上治療偏頭痛和缺血性腦血管疾病等有效[3,4]。但藁本內(nèi)酯的化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易發(fā)生脫氫、氧化、水解、降解等多種異構(gòu)化反應(yīng)[5]，此外，川芎油水溶性低及口服生物利用度較差，極大地限制了其在臨床上的應(yīng)用。為解決川芎油穩(wěn)定性及溶解度的問(wèn)題，已報(bào)道的制劑方法有：軟膠囊、滴丸、鼻腔噴霧劑、微乳、環(huán)糊精包合等[3,6]。環(huán)糊精包合是一種常用的制劑手段，羥丙基-β-環(huán)糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrin，HP-β-CD)是應(yīng)用最廣泛的環(huán)糊精衍生物之一，也是FDA第一個(gè)批準(zhǔn)可供注射的β-環(huán)糊精(β-cyclodextrin，β-CD)衍生物[7]。HP-β-CD是由β-CD與環(huán)氧丙烷縮合得到的親水性衍生物，由于β-CD的羥丙基化破壞了其分子內(nèi)氫鍵，HP-β-CD水溶性顯著提高(75% W/W)，同時(shí)又保留了β-CD的包合能力，極大地?cái)U(kuò)寬了母體β-CD的應(yīng)用范圍，具有提高藥物的溶解度、穩(wěn)定性和生物利用度，降低藥物的刺激性或毒性等作用[8]。

目前中藥揮發(fā)油的包合材料大多選用β-CD，一般采用飽和水溶液法制備包合物[6,9]，但收率較低且水溶性差。采用高水溶性的HP-β-CD制備包合物，收率高且水溶性好，常規(guī)制備方法有水溶液法、研磨法和超聲法，該3種方法均在水相中進(jìn)行，需攪拌、研磨或超聲處理，效率低且不易干燥[10-12]。Ao等[13]以無(wú)水乙醇為溶劑，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器制備川芎油HP-β-CD包合物，用旋轉(zhuǎn)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的攪拌工序，但無(wú)水乙醇和旋轉(zhuǎn)工序難以應(yīng)用于工業(yè)化大生產(chǎn)。其次，該研究采用乙酸乙酯回流提取川芎油，以得到的川芎油重量計(jì)算包合率，需要的包合物量大，且提取不完全，精準(zhǔn)度差。此外，該研究未對(duì)包合物進(jìn)行表征、溶解度及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)基于大生產(chǎn)的可行性和實(shí)用性，擬以85～95%乙醇為溶劑，采用單相法制備川芎油HP-β-CD包合物，無(wú)需攪拌、研磨等工序，直接回收濃縮干燥，該方法簡(jiǎn)便易操作，且收率和包合率高；研究確定了包合物提取和洗脫方法，采用HPLC準(zhǔn)確測(cè)定包合率，正交試驗(yàn)法優(yōu)化包合工藝，對(duì)包合物進(jìn)行表征、溶解度和穩(wěn)定性考察，為川芎油制劑的生產(chǎn)應(yīng)用提供參考。

1 儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；KQ-300E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司)；Apreo S型掃描電鏡(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；Cary 600 FTIR光譜儀(美國(guó)Agilent公司)；ZKF035型電熱真空干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司)；SOP型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；Milli-Q Integral 3型超純水機(jī)(美國(guó)Millipore 公司)；DNP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；IKA C-MAG HS7型加熱磁力攪拌器(德國(guó)IKA公司)；SoRVALL ST16R高速離心機(jī)(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；ZD-85型氣浴恒溫振蕩器(常州國(guó)宇儀器制造有限公司)。

川芎油(實(shí)驗(yàn)室自制，藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A的含量分別為50.30%和16.77%)；HP-β-CD(批號(hào)：HP20200313，山東濱州智源生物科技有限公司)；對(duì)照品丁苯酞(批號(hào)：101035-201903，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；無(wú)水乙醇(分析純，成都市科龍化工試劑廠)；甲醇(分析純，成都市科龍化工試劑廠)；石油醚(沸程：60～90 ℃，分析純，成都市科龍化工試劑廠)；甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司)；水(超純水，Milli-Q Integral 3超純水機(jī)制得)。

2 方法與結(jié)果

2.1 包合物的制備

2.1.1 HP-β-CD包合物的制備

稱(chēng)取HP-β-CD適量，溶于適量95%乙醇中，按規(guī)定比例加入川芎油，混合均勻后，70 ℃減壓回收乙醇、干燥。研磨、過(guò)80目篩，得淡黃色包合物粉末。

2.1.2 HP-β-CD物理混合物的制備

稱(chēng)取HP-β-CD適量于研缽中，緩慢加入適量川芎油，輕輕研勻，得淡黃色物理混合物粉末。

2.2 含量測(cè)定

采用本課題組建立報(bào)道的方法[14]，以丁苯酞為對(duì)照品，一測(cè)多評(píng)法測(cè)定川芎油中藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的含量，藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A對(duì)丁苯酞的校正因子分別為0.226 3、0.490 7。

2.2.1 色譜條件[14]

采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(52∶48)；柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量5 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品溶液(A)、川芎油HP-β-CD包合物(B)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substance (A) and Chuanxiong Rhizoma volatile oil-HP-β-CD inclusion complex (B)注：1.洋川芎內(nèi)酯A；2.丁苯酞；3.藁本內(nèi)酯。Note: 1.Senkyunolide A;2.Butylphthalide;3.Ligustilide.

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取丁苯酞對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含204.8 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

取包合物粉末約0.1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 包合率的測(cè)定

包合率為衡量包合效果的主要指標(biāo)，包合率越高，揮發(fā)油被包合的效果越好。若要準(zhǔn)確地測(cè)定包合率，需要選擇測(cè)定包合物總藥量的提取溶劑和未包合藥量的洗脫溶劑。本實(shí)驗(yàn)以川芎油中主要成分藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的包合率之和為評(píng)價(jià)指標(biāo)，根據(jù)藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A在川芎油中的含量，兩種成分包合率的權(quán)重系數(shù)分別為0.75、0.25。對(duì)包合率測(cè)定中幾種常用的溶劑進(jìn)行考察篩選，確定了準(zhǔn)確測(cè)定包合率的方法。

藁本內(nèi)酯包合率Y1=

(1)

洋川芎內(nèi)酯A包合率Y2=

(2)

包合率=Y1×0.75+Y2×0.25

(3)

2.3.1 包合物提取溶劑的考察

參考文獻(xiàn)方法[13,15]，包合物常采用無(wú)水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、水蒸氣蒸餾等提取其藥物成分。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，為確保包合物中藥物成分提取完全，需選用極性大的提取溶劑。按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作，保持其他條件不變，分別考察70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇和甲醇對(duì)包合物的提取效果，同法回流提取。結(jié)果見(jiàn)表1，各溶劑、超聲和回流提取效果均無(wú)明顯差異，RSD均小于1%，綜合考慮簡(jiǎn)便性和經(jīng)濟(jì)實(shí)用性，選擇70%乙醇作為包合物的提取溶劑。

表1 不同溶劑超聲和回流提取結(jié)果(n=3)Table 1 Ultrasonic and reflux extraction results by using different solvent (n=3)

2.3.2 包合物洗脫溶劑的考察

參考文獻(xiàn)方法[6,15,16]，未包合物的洗滌常使用石油醚、環(huán)己烷、乙酸乙酯、乙醇、蒸餾水等。洗脫溶劑需將包合物中未包合的藥物充分洗滌，且不使包合物脫包。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，石油醚極性小，能溶解川芎油，且不使包合物脫包，故采用石油醚對(duì)未包合物進(jìn)行洗脫，并對(duì)洗脫次數(shù)進(jìn)行考察。

取包合物粉末約0.1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加入石油醚25 mL，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，濾過(guò)，濾渣用石油醚洗滌3次，每次3 mL，濾液和洗液合并，40 ℃減壓回收石油醚，精密加入95%乙醇10 mL，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。濾渣再次加入石油醚25 mL，同上操作4次。結(jié)果見(jiàn)表2，第3次和第4次提取藥量極低，故采取石油醚超聲提取兩次測(cè)定未包合藥量。

表2 石油醚不同洗脫次數(shù)提取結(jié)果Table 2 Extraction results of petroleum ether with different elution

綜上所述，確定包合率的測(cè)定方法：按“2.2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)得包合物總藥量；再按“2.3.2”項(xiàng)下方法操作，石油醚提取兩次，測(cè)得未包合藥量。按公式(1)、(2)、(3)計(jì)算包合率。

2.4 制備方法篩選

文獻(xiàn)報(bào)道HP-β-CD包合揮發(fā)油的常見(jiàn)方法主要有水溶液法、研磨法和單相法[10-12]，故對(duì)該3種方法進(jìn)行考察，篩選出較為合適的包合物制備方法。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，水溶液法在滴加川芎油時(shí)，于邊超聲邊攪拌的情況下包合率更高，故將水溶液法改進(jìn)為水溶液超聲攪拌法。

2.4.1 水溶液超聲攪拌法

按川芎油和HP-β-CD的質(zhì)量比為1∶10，稱(chēng)取HP-β-CD溶于2倍蒸餾水中，于邊超聲邊攪拌的條件下，將川芎油(用等量95%乙醇稀釋)緩慢滴加至HP-β-CD水溶液中，混合均勻，磁力攪拌2 h(溫度30 ℃，攪拌速度750 rpm)，分別于70 ℃減壓回收、干燥。平行制備3份，平均包合率為84.54%±0.34%。

2.4.2 研磨法[11]

按川芎油和HP-β-CD的質(zhì)量比為1∶10，稱(chēng)取HP-β-CD于研缽中，加入少量水研磨至面糊狀，緩慢滴加川芎油(用等量95%乙醇稀釋)，繼續(xù)研磨45 min，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，70 ℃減壓干燥。平行制備3份，平均包合率為88.37%±1.58%。

2.4.3 單相法[12]

按川芎油和HP-β-CD的質(zhì)量比為1∶10，稱(chēng)取HP-β-CD溶于2倍95%乙醇中，將川芎油滴加至HP-β-CD乙醇溶液中，混合均勻，分別于70 ℃減壓回收、干燥。平行制備3份，平均包合率為91.17%±0.21%。

根據(jù)以上結(jié)果，單相法制備的包合物的包合率最高，且方法簡(jiǎn)便易操作，故選擇單相法制備川芎油HP-β-CD包合物。

2.5 單因素考察

2.5.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)

按“2.4.3”項(xiàng)下方法，保持其他條件不變，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、85%、90%、95%、100%對(duì)包合率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，包合物包合率增加，綜合考慮包合率和成本效益，選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)85%、90%、95%進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.5.2 投料比

按“2.4.3”項(xiàng)下方法，保持其他條件不變，考察川芎油與HP-β-CD的質(zhì)量比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶15對(duì)包合率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2，隨著投料比的增加，包合物包合率增加，綜合考慮包合率和輔料用量，選擇投料比1∶6、1∶8、1∶10進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.5.3 HP-β-CD與乙醇的質(zhì)量體積比

按“2.4.3”項(xiàng)下方法，保持其他條件不變，考察HP-β-CD與乙醇的質(zhì)量體積比為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5對(duì)包合率的影響。結(jié)果見(jiàn)圖2，隨著HP-β-CD與乙醇的質(zhì)量體積比的增加，包合物包合率增加的幅度較小，綜合考慮包合率和成本效益，選擇HP-β-CD與乙醇的質(zhì)量體積比1∶1、1∶3、1∶5進(jìn)行正交試驗(yàn)。

圖2 不同因素對(duì)包合率的影響Fig.2 The influence of different factors on the inclusion rate

2.6 正交設(shè)計(jì)優(yōu)選包合工藝

考察因素為乙醇體積分?jǐn)?shù)、川芎油與HP-β-CD的質(zhì)量比、HP-β-CD與乙醇的質(zhì)量體積比，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，以包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

表3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Design and results of orthogonal test

表4 方差分析Table 4 Analysis of variance

由直觀分析可知，各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響大小為A>B>C。方差分析結(jié)果表明，A因素存在極顯著性差異(P<0.01)，為最重要影響因素；B因素存在顯著性差異(P<0.05)，為主要影響因素；C因素?zé)o顯著性差異，為次要影響因素。綜合考慮成本與效益，確定最佳制備工藝為A3B3C2，即乙醇體積分?jǐn)?shù)95%，油∶HP-β-CD(g/g)為1∶10，HP-β-CD∶乙醇(g/mL)為1∶3。

按優(yōu)選的包合工藝制備3批包合物，包合率分別為92.17%、92.62%、92.23%，平均包合率為92.34%，RSD為0.26%，結(jié)果重現(xiàn)性好，該工藝穩(wěn)定可行。

2.7 川芎油包合物的表征

2.7.1 掃描電鏡觀察(SEM)

分別取HP-β-CD、川芎油HP-β-CD物理混合物和川芎油HP-β-CD包合物適量，經(jīng)導(dǎo)電膠粘樣、噴金鍍膜后，觀察其形貌特征。由圖3可知，HP-β-CD呈中空?qǐng)A球狀，物理混合物中川芎油呈小顆粒分散在HP-β-CD的表面及四周，而包合物中川芎油成分分子進(jìn)入到HP-β-CD分子空腔內(nèi)，使HP-β-CD發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，轉(zhuǎn)呈棱狀，表明包合物形成。

圖3 樣品SEM圖(×500)Fig.3 SEM image of samples (×500) 注：A.HP-β-CD；B.川芎揮發(fā)油HP-β-CD物理混合物；C.川芎揮發(fā)油HP-β-CD包合物。Note: A.HP-β-CD;B.Chuanxiong Rhizoma volatile oil-HP-β-CD physical mixture;C.Chuanxiong Rhizoma volatile oil-HP-β-CD inclusion complex.

2.7.2 紅外光譜分析(IR)

分別稱(chēng)取川芎油、HP-β-CD、川芎油HP-β-CD物理混合物和川芎油HP-β-CD包合物適量，其中川芎油采用KBr涂片法，其余采用KBr壓片法，分辨率4 cm-1，光譜范圍4 000 ～400 cm-1全譜掃描，結(jié)果見(jiàn)圖4。川芎油的紅外圖譜(A)于1 761 cm-1出現(xiàn)羰基特征峰，為川芎油中內(nèi)酯類(lèi)成分；HP-β-CD(B)在3 395 cm-1處出現(xiàn)多締合體羥基的伸縮振動(dòng)；物理混合物(C)中羰基吸收峰(1 762 cm-1)明顯存在；包合物(D)中羰基吸收峰消失，羥基吸收峰位移至3 412 cm-1，可能與川芎油成分分子進(jìn)入到HP-β-CD分子空腔中，破壞了其分子內(nèi)氫鍵有關(guān)[17]，使得締合羥基向高頻移動(dòng)。以上波數(shù)變化說(shuō)明包合物已形成。

圖4 樣品IR圖Fig.4 IR image of samples 注：A.川芎油；B.HP-β-CD；C.川芎揮發(fā)油HP-β-CD物理混合物；D.川芎揮發(fā)油HP-β-CD包合物。Note: A.Chuanxiong Rhizoma volatile oil;B.HP-β-CD;C.Chuanxiong Rhizoma volatile oil-HP-β-CD physical mixture;D.Chuanxiong Rhizoma volatile oil-HP-β-CD inclusion complex.

2.8 川芎油HP-β-CD包合物的性能研究

2.8.1 相溶解度法

稱(chēng)取適量HP-β-CD，加蒸餾水分別配制為0、10、20、30、40、50、60 mmol/L的溶液各10 mL，分別加入過(guò)量川芎油，于35 ℃,120 rpm氣浴恒溫振蕩器振搖48 h。待溶液平衡，常溫條件下12 000 rpm離心10 min，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以HP-β-CD濃度X(mmol/L)為橫坐標(biāo)，藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的濃度Y(mmol/L)為縱坐標(biāo)作圖，繪制相溶解度曲線，見(jiàn)圖5。對(duì)曲線進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。根據(jù)Higuchi和Connors提出的理論[18]，按公式(4)、(5)計(jì)算增溶倍數(shù)和平衡常數(shù)K，增溶倍數(shù)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同濃度HP-β-CD對(duì)川芎油中藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的增溶倍數(shù)(T=35 ℃)Table 5 The solubilization multiples of different concentrations of HP-β-CD onLigustilide and Senkyunolide A in Chuanxiong volatile oil (T=35 ℃)

圖5 川芎油HP-β-CD相溶解度圖Fig.5 Chuanxiong Rhizoma oil HP-β-CD phase solubility diagram

由相溶解度曲線判斷，在試驗(yàn)選取的濃度范圍內(nèi)，藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A濃度隨著HP-β-CD濃度呈線性增長(zhǎng)，包合類(lèi)型為AL型，可形成摩爾比為1∶1的可溶性包合物，得到的回歸方程分別為Y= 0.137 8X+ 0.531 1(R2= 0.997 1)，Y= 0.078 7X+ 0.519 5(R2= 0.994 3)。包合物中藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的平衡常數(shù)K分別為300.93、164.42，說(shuō)明形成的包合物較穩(wěn)定，HP-β-CD對(duì)川芎油有較好的包合效果。在試驗(yàn)選取的濃度范圍內(nèi)，藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的最大增溶倍數(shù)可達(dá)15.57、10.80。

(4)

(5)

式中S為川芎油在HP-β-CD溶液中的溶解度，S0為川芎油在水中的飽和溶解度。

2.8.2 加速熱穩(wěn)定性試驗(yàn)

川芎油在儲(chǔ)存過(guò)程中不穩(wěn)定，溫度、氧氣、pH和光照均對(duì)其穩(wěn)定性有影響，溫度為主要影響因素[19,20]。故對(duì)包合物的熱穩(wěn)定性進(jìn)行考察。

分別稱(chēng)取適量川芎油、HP-β-CD物理混合物和HP-β-CD包合物于密閉潔凈容器中，攤成≤5 mm厚的薄層。置于60 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，考察10天，于第0、5、10天取樣，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算樣品與第0天的相對(duì)保留率。結(jié)果見(jiàn)表6，HP-β-CD包合物相比物理混合物和川芎油的穩(wěn)定性有顯著性改善。

表6 川芎油包合物熱穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 6 Thermal stability test results of Chuanxiong Rhizoma oil inclusion complex

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用單相法進(jìn)行包合，川芎油一次性加入HP-β-CD的乙醇溶液中，且無(wú)需研磨、攪拌或超聲處理，直接減壓回收、干燥即得包合物。該方法簡(jiǎn)便、實(shí)用、收率高，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。

藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A尚無(wú)法定的含量測(cè)定用對(duì)照品，且不穩(wěn)定，對(duì)照品純度標(biāo)定和保存困難，故本課題組前期建立了以丁苯酞為對(duì)照品，一測(cè)多評(píng)法測(cè)定川芎油中藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的含量，該方法簡(jiǎn)便可行[14]。本文對(duì)含量測(cè)定方法學(xué)進(jìn)行了考察，專(zhuān)屬性、線性、精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性等符合定量分析的要求。

關(guān)于包合率的測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道一般以洗滌后的包合物測(cè)得的藥物量除以實(shí)際投入量為包合率。洗滌操作常在制備包合物過(guò)程中用水或有機(jī)溶劑淋洗抽濾后的濾餅，或采用有機(jī)溶劑萃取包合物溶液[6,9,10,16]，二者均會(huì)使包合物脫包，測(cè)得包合率偏低。此外，另有文獻(xiàn)報(bào)道采用水蒸氣蒸餾法[9,10,12,16]提取包合物中的揮發(fā)油，該方法揮發(fā)油定量提取不完全，導(dǎo)致測(cè)得包合率偏低，且重現(xiàn)性差。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)比較研究，采用極性大的70%乙醇提取測(cè)定包合物總藥量，再以極性小的石油醚提取測(cè)定未包合藥量，包合物總藥量減去未包合藥量即為真實(shí)的包合物藥量，該方法能更準(zhǔn)確地測(cè)定包合率。

HP-β-CD相溶解度曲線在一定濃度范圍內(nèi)呈線性增長(zhǎng)，藁本內(nèi)酯斜率大于洋川芎內(nèi)酯A，表明HP-β-CD對(duì)藁本內(nèi)酯的增溶效果更好。此外，本實(shí)驗(yàn)對(duì)川芎油β-CD包合物也進(jìn)行了相溶解度的考察，在相同的試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，其相溶解度曲線呈非線性增長(zhǎng)，藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的增溶倍數(shù)分別為2.36、2.95，遠(yuǎn)低于HP-β-CD，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，表明HP-β-CD包合物具有明顯的優(yōu)勢(shì)。川芎油HP-β-CD包合物的生物利用度及藥理學(xué)活性等有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。