楊韓燕 歐財文 鄭智明 吳新忠

1 玉林市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科 （廣西 玉林 537000）

2 廣東省中醫(yī)院檢驗科 （廣東 廣州 510000）

內(nèi)容提要： 目的：驗證西門子Atellica? UAS800尿沉渣分析儀質(zhì)量性能，以期對醫(yī)學(xué)實驗室尿沉渣分析儀的性能評估提供參考。方法：按中華人民共和國相關(guān)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求，對Atellica? UAS800尿沉渣分析儀的紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行檢測，判斷其重復(fù)性、批間精密度、檢出限、穩(wěn)定性、攜帶污染率、線性范圍。同時以顯微鏡檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計算Atellica? UAS800檢測紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型的識別率和假陰性率。結(jié)果：Atellica? UAS800對紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型的識別率分別為85.3%、86.7%、85.3%，假陰性率分別為0.43%、1.29%、2.79%，其余各項驗證項目也均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。結(jié)論：Atellica? UAS800各項性能達(dá)到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，操作簡單，自動化程度高，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

尿常規(guī)檢驗是臨床工作中最常用的檢查項目之一，對全身特別是泌尿系統(tǒng)疾病的診斷具有重要參考價值[1]。規(guī)范的尿有形成分顯微鏡檢查是保證尿液分析結(jié)果質(zhì)量的基礎(chǔ)，原則上每份尿液標(biāo)本都應(yīng)鏡檢，但實驗室人員有限，工作量大，每天需要及時發(fā)出大量報告，為了提高工作效率和減輕工作負(fù)擔(dān)，尿沉渣分析儀逐漸應(yīng)用于臨床實驗室中，而儀器的性能是否達(dá)到相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，是結(jié)果準(zhǔn)確性的重要保障[2]。為驗證Atellica?UAS800的可靠性，本文根據(jù)國家醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《尿液有形成分分析儀（數(shù)字成像自動識別）》（YY/T0996-2015）[3]，及美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會《定量測量方法的精密度性能評價；批準(zhǔn)指南—第三版》（CLSI-EP5-A3）[4]以及中國合格評定國家認(rèn)可委員會CNASCL02-A002:2018《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在體液學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[5]的要求，對其性能進(jìn)行驗證，現(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本來源：收集廣東省中醫(yī)院2019年10月10日～12月5日門診患者及體檢健康者新鮮尿液1038人份，用一次性塑料尿杯收集樣本，檢測前倒入試管10mL左右，充分混勻后置于測試架上，所有樣本2h內(nèi)完成檢測。

儀器與試劑：德國西門子公司生產(chǎn)一次性計數(shù)池、校準(zhǔn)液1-校準(zhǔn)液4；美國伯樂公司生產(chǎn)尿液有形成分分析質(zhì)控品（低值批號67221，高值批號67222）；對照儀器為德國科寶Auto，德國徠卡DM500光學(xué)顯微鏡，Uric-SCP一次性專用尿沉渣計數(shù)板，普通離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 人工顯微鏡鏡檢方法

鏡檢按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第4版）[6]，取每份均勻混合尿10mL，相對離心力為400×g，離心5min后用吸管吸去上清液9.8mL，將剩余的0.2mL尿沉渣充分混勻，用移液管吸取20μL滴入計數(shù)板，靜置5min后，首先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡計數(shù)10個大方格內(nèi)的有形成分，記錄實驗結(jié)果，所有標(biāo)本均在2h內(nèi)完成。鏡檢由兩名經(jīng)驗豐富的主管檢驗師采用雙盲法進(jìn)行檢測，鏡檢結(jié)果以《尿液有形成分分析儀（數(shù)字成像自動識別）》中制定的值作為陽性標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞＞3個/HPF、白細(xì)胞＞5個/HPF、管型＞1個/LPF[3]。同時通過SPSS25.0軟件中的Kappa檢驗，評估兩者鏡檢結(jié)果一致性。高度一致性時，可取兩者鏡檢結(jié)果均值作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 尿液有形成分分析儀Atellica?UAS800驗證方法

重復(fù)性：使用紅細(xì)胞、白細(xì)胞濃度各為50個/μL和200個/μL的樣本，進(jìn)行20次檢測，記錄結(jié)果，計算CV值。判斷標(biāo)準(zhǔn)參考YY/T0996-2015：濃度為50個/μL時，CV≤25%；濃度為200個/μL時，CV≤15%。

批間精密度：根據(jù)《定量測量方法的精密度性能評價；批準(zhǔn)指南—第三版》（CLSI-EP5-A3）進(jìn)行定量檢測方法的精密度研究，使用伯樂低值和高值質(zhì)控品，每天檢測1次，連續(xù)檢測20d，記錄紅細(xì)胞和白細(xì)胞值，計算SD、均值和CV值。判斷標(biāo)準(zhǔn)：低值CV≤25%，高值CV≤15%。

檢出限：使用濃度水平5個/μL的紅、白細(xì)胞樣品，重復(fù)檢測20次，計算樣本檢測結(jié)果的檢出率（檢測結(jié)果大于0個/μL的次數(shù)與總檢測次數(shù)的比值）。判斷標(biāo)準(zhǔn)：檢出率≥80%。

穩(wěn)定性：使用紅細(xì)胞、白細(xì)胞濃度各為200個/μL的樣本，在開機(jī)預(yù)熱0h，4h，8h這3個時間段，分別進(jìn)行10次重復(fù)測試，計算所有結(jié)果的CV值。判斷標(biāo)準(zhǔn)：CV≤15%。

攜帶污染率：選用高值紅細(xì)胞、白細(xì)胞尿液樣本（在檢測線性范圍內(nèi)）及生理鹽水，先取高值樣本連續(xù)檢測3次，記錄檢測結(jié)果為H1H2H3，再取生理鹽水連續(xù)檢測3次，記錄檢測結(jié)果為L1L2L3。攜帶污染率根據(jù)公式(攜帶污染率(%)=(L1-L3)/(H3-L3)×100%)，計算得到。判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文件YY/T0996-2015：攜帶污染率≤0.05%。

線性范圍：取儀器廠家聲稱的線性范圍上限濃度附近的紅細(xì)胞和白細(xì)胞樣本，將高濃度樣本與基質(zhì)尿按照1:2、1:4、1:16、1:64、1:256的比例進(jìn)行稀釋。每個稀釋度測定3次，取平均值為實測值，以稀釋計算值作為理論值，將實測值與理論值進(jìn)行線性回歸相關(guān)分析。得線性方程Y=aX+b及R2值，與廠商提供的性能參數(shù)相比較，判斷其符合性，相關(guān)系數(shù)R2≥0.95。

識別率：識別率的研究方案是根據(jù)國家醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《尿液有形成分分析儀（數(shù)字成像自動識別）》來進(jìn)行，收集符合要求的新鮮尿液標(biāo)本450份，先在UAS800上完成檢測，再人工顯微鏡鏡檢。以鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，單項結(jié)果與鏡檢結(jié)果的符合率為：紅細(xì)胞識別率≥70%、白細(xì)胞識別率≥80%、管型識別率≥50%。

假陰性率：假陰性率的研究方案是根據(jù)國家醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《尿液有形成分分析儀（數(shù)字成像自動識別）》來進(jìn)行，收集新鮮尿液標(biāo)本466份，對紅細(xì)胞、白細(xì)胞和管型進(jìn)行檢測，同時以人工顯微鏡鏡檢為金標(biāo)準(zhǔn)，計算UAS800檢測結(jié)果的假陰性率，判斷標(biāo)準(zhǔn)：假陰性率≤3%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用Microsoft Excel 2016版本對所有檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行計算和分析，包括平均值、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）、變異系數(shù)（CV）和R值的計算。對兩位主管檢驗師人工鏡檢結(jié)果的一致性評估，采用SPSS25.0軟件中的Kappa檢驗，計算Kappa值。Kappa值分級標(biāo)準(zhǔn)：0.41～0.60中度一致性；0.61～0.80高度一致性；0.81～1幾乎完全一致。

2.結(jié)果

2.1 兩位主管檢驗師顯微鏡檢查技術(shù)評價

計算兩位主管檢驗師鏡檢510份樣本的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型的Kappa值分別為0.777、0.832、0.896，結(jié)果表明，兩者的紅細(xì)胞鏡檢結(jié)果具有高度一致性，白細(xì)胞和管型鏡檢結(jié)果達(dá)到幾乎完全一致性，可取兩者鏡檢結(jié)果的均值，作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 尿沉渣分析儀Atellica? UAS800驗證結(jié)果

2.2.1 重復(fù)性

紅細(xì)胞濃度為50個/μL和200個/μL的CV值分別為15.06%、6.1%；白細(xì)胞濃度為50個/μL和200個/μL的CV值分別為15.1%、5.26%，均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。見表1。

表1. UAS800批內(nèi)精密度測定

2.2.2 批間精密度

紅細(xì)胞低值和高值的CV值分別為6.46%、7.21%；白細(xì)胞低值和高值的CV值分別為17.46%、12.41%；均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。見表2。

表2. UAS800批間精密度測定

2.2.3 檢出限

紅細(xì)胞樣品的檢出率為95%，白細(xì)胞樣品的檢出率為100%，均符合要求。

2.2.4 穩(wěn)定性

紅細(xì)胞和白細(xì)胞樣品3個時間段檢測的CV值分別為8%、8.7%，結(jié)果符合要求。見表3。

表3. UAS800儀器穩(wěn)定性測定

2.2.5 攜帶污染率

根據(jù)攜帶污染率公式計算，紅細(xì)胞、白細(xì)胞的攜帶污染率均為0，小于0.05%，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2.6 線性范圍

經(jīng)測定，紅細(xì)胞的相關(guān)系數(shù)R2為0.9999，回歸方程為Y=0.9992X+3.4357；白細(xì)胞的相關(guān)系數(shù)R2為0.9975，回歸方程為Y=1.0117X-17.802，結(jié)果顯示儀器在該檢測范圍內(nèi)（紅細(xì)胞5～1477個/μL、白細(xì)胞4～822個/μL），線性良好。

2.2.7 識別率

通過與顯微鏡鏡檢結(jié)果進(jìn)行比對，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型的識別率分別為85.3%、86.7%、85.3%，均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。見表4。

表4. UAS800與顯微鏡鏡檢結(jié)果比對(n=150,n)

2.2.8 假陰性率

通過與顯微鏡鏡檢結(jié)果進(jìn)行比對，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、管型的假陰性率分別為0.43%、1.29%、2.79%，均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。見表5。

表5. UAS800與顯微鏡鏡檢結(jié)果比對(n=466,n)

3.討論

本研究顯示，該儀器重復(fù)性良好，紅細(xì)胞和白細(xì)胞具有極低的檢出限和極低的攜帶污染率；在連續(xù)開機(jī)0～8h，具有較高的穩(wěn)定性；批間精密度使用不同濃度的質(zhì)控品進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示各CV值均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求；本研究中所驗證的線性范圍已滿足95%以上臨床標(biāo)本的分析需要，但是仍會有少數(shù)標(biāo)本超出線性范圍，按要求需用適當(dāng)?shù)南♂屢汉头椒ㄟM(jìn)行稀釋后重新測定[8]。然而，在實際工作中，其稀釋后檢測的具體數(shù)值對臨床診治意義已不甚重要，所以無需再對超出線性范圍的樣本進(jìn)行稀釋后測定，直接報告上限即可。另外需要指出的是，尿液中紅細(xì)胞容易受尿素、滲透壓、pH等影響而發(fā)生溶解破裂，而線性范圍的驗證需要做大量稀釋試驗，為保證結(jié)果的穩(wěn)定性，該驗證選擇了經(jīng)過固定的紅細(xì)胞來進(jìn)行實驗。以顯微鏡鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示，該儀器識別率高，假陰性率低，完全符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。同時應(yīng)注意到，管型的假陰性率接近臨界范圍，驗證中也發(fā)現(xiàn)Atellica?UAS800對管型的識別受多種因素的干擾：①儀器有時會把黏液絲、纖維、成團(tuán)聚集細(xì)胞等錯認(rèn)成管型。②儀器充池時僅吸取200μL樣本，取樣量少，有可能導(dǎo)致未能有效獲取管型成分。③儀器是對15張高倍視野圖片進(jìn)行分析計算，而管型鏡檢要求是低倍觀察，有可能漏檢。

顯微鏡鏡檢是形態(tài)學(xué)檢查的金標(biāo)準(zhǔn)[9]。儀器分析和識別細(xì)胞存在一定的局限性，不能完全取代顯微鏡鏡檢。尿液常規(guī)檢查需尿干化學(xué)聯(lián)合尿液有形成分分析，制定適合本實驗室的復(fù)檢規(guī)則，觸發(fā)規(guī)則時進(jìn)行人工顯微鏡鏡檢，才能確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上，本研究通過對Atellica?UAS800尿沉渣分析儀的性能驗證，顯示各項分析參數(shù)的性能均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，可應(yīng)用于臨床實驗室。