武玲玲

（遼寧省北票市黑城子動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 122100）

附紅細(xì)胞體感染早在20 世紀(jì)20 年代就被人們發(fā)現(xiàn)，1928年Schilling 和Dingcr 同時(shí)在嚙齒動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了類球狀血蟲體。我國(guó)1981 年首先在家兔中發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體。以后相繼在豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔、犬、貓、兔、猴、駱駝等哺乳物鳥類及人體中證實(shí)感染附紅細(xì)胞體。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)并命名的附紅細(xì)胞體有數(shù)十種，本病已廣泛分布于世界許多國(guó)家和地區(qū)。該病嚴(yán)重威脅著畜牧業(yè)的發(fā)展和人類健康，并呈反范圍擴(kuò)大趨勢(shì)。治療牛附紅細(xì)胞體病的藥物種類繁多，但目前該試驗(yàn)養(yǎng)牛場(chǎng)還未有相關(guān)調(diào)查報(bào)告。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

患病牛50 頭。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

瑞氏染色液、生理鹽水、磺胺間甲嘧啶鈉、鹽酸多西環(huán)素、氟苯尼考注射液、血蟲凈、咪唑苯脲、完全培養(yǎng)基(RPMI-1640 與犢牛血清按8:2 的比例混合而成)、需要在4℃冰箱內(nèi)保存的90%以上感染的抗凝血。

1.2.2.2 藥物濃度的選擇

1.1.3 儀器設(shè)備

注射器、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、微量移液器等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 制作涂片，染色鏡檢

在養(yǎng)牛場(chǎng)采集患病牛耳靜脈血液，在實(shí)驗(yàn)室制成涂片，室溫條件下自然干燥，用甲醇固定3～5min 后滴加瑞氏染色液，并覆蓋涂片上1～3min，然后在滴加與染色液同等計(jì)量的磷酸緩沖液(pH=6.4)，輕輕晃動(dòng)使其與染色液充分混合，5min 左右水洗，干燥后在油鏡下觀察。

1.2.2 藥敏試驗(yàn)

1.2.2.1 體外培養(yǎng)方法

按照7:1 的比例混合完全培養(yǎng)基與抗凝血，裝進(jìn)離心管（50ml）中，再用高壓滅菌的青霉素小瓶進(jìn)行分裝，按照試驗(yàn)要求濃度添加藥物，使混合液體積達(dá)到1ml，將混合液放置在37℃的普通培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

用生理鹽水對(duì)藥物進(jìn)行稀釋（劑量遵照使用說明），按照等差的方法設(shè)置4 組不同的濃度藥物(每組濃度均設(shè)對(duì)照組)，每組液體混合物的總體積均要達(dá)到lml，并使藥物濃度分別達(dá)到所需濃度。即鹽酸多西環(huán)素：8、6、4、2μg/ml；氟苯尼考：4、3、2、1μg/ml；血蟲凈：12、9、6、3μg/ml；咪唑苯脲：4、3、2、1μg/ml；磺胺間甲嘧啶鈉：4、3、2、1μg/ml。每6h 觀察一次涂片，每組需要觀察5 次。

1.2.2.3 判定紅細(xì)胞的感染率

每次分別在4 組液體混合物取5μl 進(jìn)行壓片檢查，利用高倍顯微鏡，每個(gè)壓片觀察5 個(gè)視野，每個(gè)視野觀察20 個(gè)紅細(xì)胞，最后取平均值，作為紅細(xì)胞感染率的樣本。

1.2.3 臨床療效觀察

選擇具有明顯患有附紅細(xì)胞體病的病牛50 頭，并將50 頭病牛隨機(jī)分5 個(gè)組。對(duì)前4 組注射敏感藥物，最后1 組作為空白對(duì)照。檢測(cè)期間，各組采取相同的飼養(yǎng)管理方式，最后判定結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 涂片染色鏡檢

血液涂片經(jīng)瑞氏染色后，感染附紅細(xì)胞體的牛紅細(xì)胞瑞氏染色后紅細(xì)胞失去立體形，形態(tài)各異、大小不一，紅細(xì)胞邊緣不整齊，呈鋸輪狀、星芒狀。在紅細(xì)胞表面有圓形、月牙形、短桿形蟲體，紅細(xì)胞呈淡紫紅色，蟲體可染成淡藍(lán)色，且發(fā)出亮亮的光彩。一般每個(gè)紅細(xì)胞附有蟲體3～4 個(gè)，多者達(dá)10～14個(gè)。用顯微鏡觀察到紅細(xì)胞邊緣有鋸齒狀或星芒狀時(shí)，可確診病牛為陽(yáng)性。

2.2 藥敏試驗(yàn)

2.2.1 鹽酸多西環(huán)素藥敏試驗(yàn)結(jié)果

該鹽酸多西環(huán)素治療牛附紅細(xì)胞體病的使用說明劑量為3～5mg/kg。根據(jù)以上分組試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)鹽酸多西環(huán)培養(yǎng)液的濃度為6μg/ml (實(shí)際治療劑量為6mg/kg) 時(shí)，對(duì)牛附紅細(xì)胞體的抑制和殺死作用最強(qiáng)大。

2.2.2 氟苯尼考藥敏試驗(yàn)結(jié)果

氟苯尼考治療牛附紅細(xì)胞體病的使用說明劑量為0.2ml/kg，根據(jù)以上試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該藥物在體外對(duì)牛附紅細(xì)胞體的抑制和殺死作用不強(qiáng)，牛附紅細(xì)胞體對(duì)氟苯尼考不敏感。

2.2.3 血蟲凈藥敏試驗(yàn)結(jié)果

血蟲凈治療牛附紅細(xì)胞體病的使用說明用量為3～5mg/kg，根據(jù)以上試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該藥物6μg/ml 和12μg/ml 在體外對(duì)牛附紅細(xì)胞體抑制作用和殺死作用差別不大，且對(duì)牛附紅細(xì)胞體的抑制和殺死作用效果最強(qiáng)。

2.2.4 咪唑苯脲藥敏試驗(yàn)結(jié)果

咪唑苯脲治療牛附紅細(xì)胞體病的使用說明劑量為1～2mg/kg，根據(jù)以上試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體外對(duì)牛附紅細(xì)胞體抑制作用和殺死作用差別不大，牛附紅細(xì)胞體均能被殺死。

2.2.5 磺胺間甲嘧啶鈉治療結(jié)果

磺胺間甲嘧啶鈉治療牛附紅細(xì)胞體病的使用說明劑量為0.2ml/kg，根據(jù)以上試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體外對(duì)牛附紅細(xì)胞體抑制和殺死作用差別不大，牛附紅細(xì)胞體可以被殺死。

2.3 臨床療效試驗(yàn)

選擇患有附紅細(xì)胞體病的病牛50 頭，10 頭一組，分成5組。對(duì)前4 組注射敏感藥物，第5 組作為空白對(duì)照。對(duì)1、2、3、4 組持續(xù)給藥5h，用藥劑量分別為每天1 次肌肉注射鹽酸多西環(huán)素，使用劑量6mg/kg；每天1 次肌肉注射血蟲凈，使用劑量3mg/kg；每天1 次肌肉注射咪唑苯脲，使用劑量lmg/kg；每天2 次靜脈注射磺胺間甲嘧啶鈉，使用劑量0.2ml/kg。對(duì)試驗(yàn)牛進(jìn)行為期10d 的臨床觀察，對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物采集血液做血涂片，記錄試驗(yàn)結(jié)果。

2.3.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)血液中是否有附紅細(xì)胞體進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)合臨床癥狀檢查。采取治療后的牛耳靜脈血液進(jìn)行涂片染色鏡檢，觀察紅細(xì)胞形態(tài)、是否有附紅細(xì)胞體存在。如觀察到紅細(xì)胞為球形、盤形或環(huán)形，并且紅細(xì)胞表面及邊緣沒有圓形、月牙形或短桿形的折光性蟲體，則表示附紅細(xì)胞體不存在。臨床癥狀檢查，體溫恢復(fù)到37.5～39.5℃，無貧血和黃疸癥狀，可視黏膜、精神狀況、飲食、排糞正常者為治愈。

2.3.2 藥物的治療效果

由附表可知，治療效果最好的藥物是鹽酸多西環(huán)素，其臨床治愈率為90%，其次是血蟲凈，臨床治愈率為80%，咪唑苯脲的臨床治愈率為70%，磺胺間甲嘧啶鈉的臨床治愈率為50%。

附表 藥物的治療情況

2.4 附紅細(xì)胞體鏡檢的討論

使用涂片染色鏡檢可提高檢出率，在血漿及紅細(xì)胞上觀察到不同形態(tài)的附紅細(xì)胞體為陽(yáng)性。

2.5 藥敏試驗(yàn)的討論

培養(yǎng)條件完全相同的情況下，不同藥物治療該病時(shí)，所使用的接近濃度(mg/kg) 都對(duì)牛附紅細(xì)胞體有抑制作用，但其具有不同的作用效果。所以，在用藥治療牛附紅細(xì)胞體時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感藥物，按療程投藥，才能收到較好的治療效果。

2.6 臨床療效試驗(yàn)討論

治療的4 種藥物中治療效果最好的是鹽酸多西環(huán)素，其次是血蟲凈和咪唑苯脲治療效果，最后是磺胺間甲嘧啶鈉治療效果。鹽酸多西環(huán)素注射液驅(qū)殺牛附紅細(xì)胞體作用明顯好于其他3 種藥物，治療率為90%。在生產(chǎn)實(shí)踐中，懷孕母牛不能用此藥。血蟲凈在治療時(shí)有少數(shù)中毒癥狀，應(yīng)用阿托品、安乃近等緩解；治療妊娠母牛時(shí)個(gè)別會(huì)引起流產(chǎn)。咪唑苯脲可造成少數(shù)牛出現(xiàn)過敏現(xiàn)象，需要用地塞米松進(jìn)行搶救，大多數(shù)都能搶救過來，使用咪唑苯脲治療牛附紅細(xì)胞體病時(shí)應(yīng)多注意過敏反應(yīng)。沒有太大治療效果的是磺胺間甲嘧啶鈉。在牛附紅細(xì)胞體病治療的過程中，除藥物治療外，還需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行補(bǔ)血，增加紅細(xì)胞生長(zhǎng)，提高動(dòng)物免疫力，有效防止繼發(fā)感染等相應(yīng)措施。