王健明,王兆剛,劉 杰,譚善峰,張維頡,李春建

（1臨沂市人民醫(yī)院，山東臨沂276000;2山東第一醫(yī)科大學(xué)<山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院>研究生處，山東泰安271016；3山東醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，山東臨沂276003）

微管蛋白是一種由50 kDaα和β亞基組成的異二聚體蛋白，由于它在細(xì)胞分裂中的關(guān)鍵作用，靶向真核細(xì)胞的微管系統(tǒng)成為開發(fā)抗癌藥物的一個新方向，如微管不穩(wěn)定劑長春新堿，已廣泛應(yīng)用于臨床各種癌癥的治療。CombretastatinA-4（CA-4）對微管蛋白聚合有很強(qiáng)的抑制作用，已有多項(xiàng)研究證實(shí)CA-4對多種人類癌細(xì)胞株具有細(xì)胞毒性作用，但其水溶性較差[1-2]。YK-3-250是以CA-4為母體結(jié)構(gòu)，用硼酸基取代B環(huán)羥基的一種CA-4類似物[3]。本研究通過觀察YK-3-250對人前列腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的影響，研究將其用于前列腺癌化療的可能性?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動物：無特殊病原體（SPF）級BALB/C雄性裸鼠（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司），4～5周齡，體重（20±2）g；LNCaP細(xì)胞株（上海中國科學(xué)院細(xì)胞庫）；RPMI-1640培養(yǎng)基（自美國Gibco公司）；胎牛血清（FBS）和胰蛋白酶（杭州四季青公司）；CA-4類似物YK-3-250（美國喬治梅森大學(xué)罕見病藥物發(fā)現(xiàn)中心）。

1.2 方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及裸鼠前列腺癌移植瘤模型的構(gòu)建：LNCaP細(xì)胞使用含10%FBS、1%青霉素-鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2的條件下采用貼壁細(xì)胞培養(yǎng),2～3 d換液一次，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞傳代,取對數(shù)生長期貼壁生長細(xì)胞,用PBS液重懸后,離心收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至5×107個/mL。采用裸鼠右前背部皮下接種細(xì)胞懸液0.1 mL,標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)，觀察裸鼠腫瘤生長情況。

1.2.2分組給藥 待腫瘤體積約100 mm3時，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)?zāi)[瘤體積無顯著性差異(P＞0.05)。篩選裸鼠，隨機(jī)分為對照組和治療組（A組和B組），每組6只。A組和B組分別腹腔注射YK-3-250溶液15 mg/kg、30 mg/kg，每周兩次，共4周；對照組腹腔注射磷酸鹽緩沖液（PBS）,每周兩次，共4周。停藥次日，裸鼠用

3.5 %水合氯醛（10 mL/g）麻醉，脫頸處死，剝離腫瘤組織備用。

1.2.3腫瘤組織體積及瘤體質(zhì)量 用游標(biāo)卡尺隔3天測量一次腫瘤長度、寬度，計(jì)算腫瘤組織體積。試驗(yàn)結(jié)束剝離的腫瘤組織進(jìn)行稱重(WT),計(jì)算抑瘤率,抑瘤率=(1-WT治療組/WT對照組）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時間各組裸鼠移植瘤體積比較 試驗(yàn)期間各組瘤塊持續(xù)生長，多為圓形或橢圓形。干預(yù)4周，各組裸鼠藥物耐受性好，未出現(xiàn)死亡情況。治療開始8 d后各組開始顯出差異，治療組腫瘤生長速度明顯較對照組緩慢，且B組更慢。見表1。

2.2 三組裸鼠移植瘤體積、瘤體重量和抑瘤率比較裸鼠干預(yù)4周后，治療組移植瘤體積和瘤體重量與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；B組移植瘤體積、瘤體重量低于A組，抑瘤率高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1不同時間點(diǎn)移植瘤體積變化比較（±s）

表1不同時間點(diǎn)移植瘤體積變化比較（±s）

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表2三組移植瘤體積、瘤體重量及抑瘤率比較（±s）

表2三組移植瘤體積、瘤體重量及抑瘤率比較（±s）

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3 討論

前列腺癌（prostate cancer,PCa）是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率在男性所有惡性腫瘤中位居第二。近年來受我國人口老齡化、飲食結(jié)構(gòu)改變等因素影響,其發(fā)病率呈明顯上升趨勢，且初診時多數(shù)已屬中晚期，經(jīng)過中位時間18～24個月的內(nèi)分泌治療后，幾乎所有的患者都進(jìn)展為去勢抵抗前列腺癌（castration resistant prostate cancer,CRPC）[4],化療則是此階段重要治療方法之一?？捎糜贑RPC治療的化療藥物較少，多西他賽是mCRPC的一線化療方案，多西他賽耐藥后可選擇卡巴他賽作為二線化療。但是多西他賽耐藥細(xì)胞對卡巴他賽具有交叉耐藥性，因而削減了卡巴他賽的有效率[5-7]。CA-4是由Pettit及其同事在南非灌木矮柳樹（Combretumcaffrum）的樹皮中分離的一種順式二苯乙烯類天然產(chǎn)物，是其植物中分離出的所有結(jié)構(gòu)中細(xì)胞毒性最強(qiáng)的一種化合物[1]。它既是一種微管蛋白聚合抑制劑，也是一種血管阻斷劑，能夠利用腫瘤組織與正常組織內(nèi)皮細(xì)胞的生理差異，選擇性地抑制腫瘤微管蛋白活性，改變其內(nèi)皮細(xì)胞的骨架結(jié)構(gòu)與形態(tài)，增強(qiáng)其血管滲透性、擾亂血流，從而引起腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致繼發(fā)性腫瘤細(xì)胞死亡。但由于其水溶較差，易形成熱力學(xué)上更穩(wěn)定、但活性更弱的反式CA-4異構(gòu)體，限制了其臨床應(yīng)用[2，8]。為此，多項(xiàng)研究通過設(shè)計(jì)新的CA-4類似物，改善了CA-4的水溶性，并成功在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中觀察到對多種腫瘤的抑制效應(yīng)。YK-3-250是以CA-4為母體結(jié)構(gòu)，B環(huán)羥基以硼酸基取代后得到的類似物，改善了CA-4的水溶性，且細(xì)胞毒性和抗微管蛋白聚合活性均加強(qiáng)。通過對YK-3-250在LNCaP細(xì)胞裸鼠移植瘤模型體內(nèi)進(jìn)行研究，證實(shí)了YK-3-250對人前列腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長有顯著抑制作用，且表現(xiàn)出計(jì)量依賴性，說明YK-3-250有望成為前列腺癌化療的可選方案，但是其體內(nèi)抗腫瘤作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。