林紫蘭，沙小梅，張志斌，夏其樂，孫蕊,4*，王振興

1(西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明，650224)2(江西師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江西 南昌，330022) 3(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 食品科學(xué)研究所，浙江 杭州，310021)4(西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 (西南林業(yè)大學(xué))，云南 昆明，650224)5(西南林業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，云南 昆明，650224)

茅莓(RubusparvifoliusL.)是薔薇科懸鉤子屬植物，又名三月泡、紅梅消，其分布廣泛，資源豐富，頗具觀賞價(jià)值。茅莓的果實(shí)可以食用，酸甜多汁，富含VC、總酸及蛋白質(zhì)等，具有較高的開發(fā)價(jià)值，常被用于釀酒、制醋及飲料中[1-2]。如翟明昌等[3]以茅莓、枸杞為原料制作了一款酸甜可口、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的保健功能果汁飲料。另外，茅莓還可入藥，根據(jù)《中藥大辭典》[4]中記載，茅莓全草可當(dāng)藥物使用，具有清熱涼血、利尿消腫等多種功能功效。

茅莓根是茅莓的根部，是一種民間傳統(tǒng)的中藥材。傳統(tǒng)藥理學(xué)顯示，茅莓根提取物及其萃取組分具有較好的抗炎[5]和抗氧化[6]作用；化學(xué)成分研究表明，茅莓根的主要藥用成分為黃酮類化合物、三萜及三萜皂苷等。如MEI等[7]采用硅膠柱層析法和核磁共振波譜對(duì)茅莓根進(jìn)行提取和鑒定，從中分離得到神經(jīng)酰胺、蒽醌類化合物和三萜類化合物；CAO等[8]通過小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)茅莓總皂苷可以抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的侵襲、遷移和轉(zhuǎn)移，具有一定的抗腫瘤作用。目前，關(guān)于茅莓根的研究主要集中在其化學(xué)成分上，對(duì)茅莓根的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶、乙酰膽堿酯酶酶抑制作用的研究較少?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要是通過抑制體內(nèi)的α-葡萄糖苷酶活性和乙酰膽堿酯酶活性來分別治療糖尿病和阿爾茨海默癥(Alzheimer′s disease,AD)，而研究表明，AD、糖尿病等疾病的發(fā)生可能與人體內(nèi)自由基氧化應(yīng)激反應(yīng)有一定的相關(guān)性[9]。因此，研究茅莓根的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶、乙酰膽堿酯酶酶抑制作用，可為預(yù)防糖尿病和老年癡呆提供一定的參考價(jià)值。

為了進(jìn)一步挖掘茅莓根的食用和藥用價(jià)值，本文以茅莓根的甲醇提取物為研究對(duì)象，分析其總酚、總黃酮含量，并測(cè)定其體外抗氧化活性和對(duì)α-葡萄糖苷酶以及乙酰膽堿酯酶的抑制能力，來評(píng)價(jià)其抗氧化、降血糖和防老年癡呆的潛力，可為茅莓根資源的高效利用和進(jìn)一步開發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試材料于2018年購(gòu)自安徽毫州，經(jīng)西南林業(yè)大學(xué)植物學(xué)教研室戚建華副教授鑒定為茅莓的根部。

1.1.2 主要試劑

α-葡萄糖苷酶、阿卡波糖、加蘭他敏(galanthamine，GLTM)、4-甲基傘形酮-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-methylumbelliferyl-α-D-glucopyranoside，4-MUG)、電鰻乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)、碘化硫代乙酰膽堿(acetylthiocholineiodide，ATCI)、5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)[5，5-dithiobis(2-nitrobenzoicacid)，DTNB]，Sigma-Aldrich公司；奎諾二甲基丙烯酸酯(Trolox)、VC、ABTS、DPPH、2，4，6-三吡啶基三嗪[2，4，6-tris(2-pyridyl)-s-triazine，TPTZ]、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(2，6-di-tert-butyl-4-methylphenol，BHT)，Solarbio公司；過硫酸鉀、甲醇、H2O2、FeSO4、FeCl3、NaOH、CuSO4、K2SO4、濃硫酸、鹽酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 儀器與設(shè)備

SHB-III循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；TGL-10C高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；U410-86超低溫冰箱，艾本德生物儀器有限公司；SYNERGY H1多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)BIOTEK公司；YB-250A高速多功能粉碎機(jī)，永康市速鋒工貿(mào)有限公司；SG5200HDT型超聲波清洗器，上海冠特超聲儀器有限公司。

1.2 樣品的制備

曬干的茅莓根經(jīng)粉碎后過40目篩，取1 g茅莓根粉末，按照料液比1∶20(g∶mL)向粉末中加入體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液，在超聲波為300 W、溫度為50 ℃的條件下提取60 min。將提取物進(jìn)行抽濾，濾渣再重新提取抽濾1次，合并2次濾液，在50 ℃下真空濃縮，用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液定容至10 mL，制得茅莓根粗提物(RubusparvifoliusL.root extract，RRE)[10]。

1.3 有效成分及體外抗氧化活性的測(cè)定

1.3.1 總酚含量測(cè)定

采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定總酚含量[11]。取20 μL 樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入20 μL 0.5 mol/L的福林酚溶液，混合5 min后加入160 μL 75 mg/mL的Na2CO3溶液，避光反應(yīng)25 min后于765 nm下測(cè)定吸光值，以等體積的蒸餾水代替Na2CO3溶液作為對(duì)照組。配制質(zhì)量濃度分別為10、20、40、60、80和100 μg/mL 的沒食子酸溶液，在相同條件下測(cè)定吸光值，并以沒食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為y=0.004 8x+0.019 5(R2=0.997 3)，可根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算RRE中總酚含量，結(jié)果以mg GAE/g表示。

1.3.2 總黃酮含量測(cè)定

參照吳昆明等[12]的方法測(cè)定樣品中的總黃酮含量。取40 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入20 μL 30 mg/mL的Na2NO2溶液，在室溫下放置反應(yīng)6 min后加入20 μL 60 mg/mL的Al(NO3)3溶液，接著室溫下反應(yīng)6 min后再加入140 μL 40 mg/mL的NaOH溶液和60 μL體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液，靜置反應(yīng)15 min后于510 nm下測(cè)定吸光值，以等量體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液分別代替Na2NO2溶液和Al(NO3)3溶液作為對(duì)照組。配制質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 g/L的蘆丁溶液，在相同條件下測(cè)定吸光值，并以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為y=1.003 2x+0.011 2(R2=0.996 9)，可根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算RRE中總黃酮含量，結(jié)果以mg Rutin/g表示。

1.3.3 DPPH自由基清除能力

取100 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入100 μL DPPH溶液充分混合，避光反應(yīng)30 min后在517 nm處測(cè)定其吸光值(As)，以體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液代替樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)的吸光值為Ac，以體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液代替DPPH溶液進(jìn)行反應(yīng)的吸光值為Ab。以VC和BHT為陽性對(duì)照，并按公式(1)計(jì)算樣品的DPPH自由基清除率[11]：

(1)

以不同質(zhì)量濃度(0～0.025 g/L)的Trolox的甲醇溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，以Trolox的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，DPPH自由基清除率為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=4.554 4x-1.276 1(R2=0.993 0)。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的Trolox當(dāng)量，該數(shù)值代表RRE的DPPH自由基清除能力。

1.3.4 ABTS陽離子自由基清除能力

取50 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入200 μL ABTS溶液充分混合，在室溫下避光反應(yīng)6 min后在734 nm處測(cè)定其吸光值(As)，以體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液代替樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)的吸光值為Ac，以體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液代替ABTS溶液進(jìn)行反應(yīng)的吸光值為Ab，以VC和BHT為陽性對(duì)照，并按公式(2)計(jì)算樣品的ABTS陽離子自由基清除率[11]：

(2)

以不同質(zhì)量濃度(0～0.05 g/L)的Trolox的甲醇溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，以Trolox溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，ABTS陽離子自由基清除率為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=1.172 6x+2.247 0(R2=0.996 2)。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的Trolox當(dāng)量，該數(shù)值代表RRE的ABTS陽離子自由基清除能力。

1.3.5 超氧陰離子自由基清除能力

參考陳青青等[13]的方法略作修改，采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定超氧陰離子自由基清除能力。取20 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入240 μL Tris-HCl緩沖液，在25 ℃溫育10 min。之后再加入20 μL 鄰苯三酚溶液，混合振蕩10 s，每隔1 min在325 nm下測(cè)定吸光值(As)，共測(cè)定5 min。以60 mmol/L Tris-HCl緩沖液溶液代替樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)測(cè)定吸光值為Ac，以50 mmol/L Tris-HCl緩沖液代替鄰苯三酚溶液進(jìn)行反應(yīng)測(cè)定吸光值為Ab。以VC和BHT為陽性對(duì)照，并按公式(3)計(jì)算超氧陰離子自由基清除率：

(3)

以不同質(zhì)量濃度(0～500 g/L)的Trolox的甲醇溶液為標(biāo)準(zhǔn)品，以Trolox溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，超氧陰離子自由基清除能力為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=0.126 4x-1.384 6(R2=0.994 5)。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的Trolox當(dāng)量，該數(shù)值代表樣品的超氧陰離子自由基清除能力。

1.3.6 鐵還原能力

參考劉江等[14]的方法略作修改，取30 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入240 μL FRAP溶液(由300 mmol/L pH 3.6的醋酸鈉緩沖液、10 mmol/L TPTZ溶液和20 mmol/L FeCl3組成)充分混合，在37 ℃避光反應(yīng)10 min后在593 nm處測(cè)定吸光值(As)，以體積分?jǐn)?shù)70%的甲醇溶液代替樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)測(cè)定吸光值為Ac，以體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液代替FRAP溶液進(jìn)行反應(yīng)測(cè)定吸光值為Ab，以VC和BHT為陽性對(duì)照，并按公式(4)計(jì)算樣品的鐵還原能力：

(4)

以不同質(zhì)量濃度(0～0.1 g/L)的FeSO4溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，以FeSO4溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=0.004 7x+0.059 3(R2=0.993 1)。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的FeSO4當(dāng)量，該數(shù)值代表RRE的鐵還原能力。

1.4 α-葡萄糖苷酶活性抑制能力

參考LIAO等[15]的方法略作修改，取50 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入20 μL α-葡萄糖苷酶溶液和50 μL 4-MUG充分混勻，37 ℃避光反應(yīng)20 min后加入100 μL 甘氨酸鈉溶液并振蕩30 s終止反應(yīng)，采用熒光分光光度計(jì)測(cè)定其在激發(fā)波長(zhǎng)355 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm處的熒光強(qiáng)度，以阿卡波糖為陽性對(duì)照，結(jié)果以抑制率表示，采用Origin軟件計(jì)算抑制率達(dá)到50%所需要樣品的半抑制質(zhì)量濃度(half maximal inhibitory concentration，IC50)，其中，IC50值越小，則代表α-葡萄糖苷酶活性抑制能力越高。按照公式(5)計(jì)算RRE中的α-葡萄糖苷酶抑制率：

(5)

式中：As是樣品的熒光值；Ac是以樣品溶劑代替樣品的反應(yīng)體系的熒光值(控制組)；Ab是以磷酸鉀緩沖液代替酶液的反應(yīng)體系的熒光值(空白組)。

1.5 乙酰膽堿酯酶活性抑制能力

參考MALAR等[16]的方法略作調(diào)整，取50 μL樣品溶液于96孔酶標(biāo)板，加入90 μL ATCI溶液和DTNB溶液的混合液于30 ℃下溫育10 min，加入20 μL乙酰膽堿酯酶溶液充分混勻后，再加入50 μL磷酸鈉緩沖液振蕩10 s終止反應(yīng)。每隔1 min在405 nm下測(cè)定1次吸光值，共測(cè)5次，每次測(cè)定前振蕩10 s，以加蘭他敏為對(duì)照，結(jié)果以抑制率表示，采用Origin軟件計(jì)算樣品的IC50值，其中，IC50值越小，則代表乙酰膽堿酯酶活性抑制能力越高。根據(jù)公式(6)計(jì)算RRE中的乙酰膽堿酯酶抑制率：

(6)

式中：As是樣品的吸光值；Ac是以樣品溶劑代替樣品的反應(yīng)體系的吸光值(控制組)；Ab是以磷酸鉀緩沖液代替酶液的反應(yīng)體系的吸光值(空白組)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次以上，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。采用Origin 8.6軟件分析和作圖，SPSS 22.0軟件進(jìn)行顯著性分析，P<0.05認(rèn)為樣品間具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 總酚、總黃酮含量

酚類物質(zhì)是植物次生代謝的產(chǎn)物，可有效清除人體內(nèi)過量的自由基，延緩人體衰老，降低慢性疾病發(fā)生。近年來，天然植物多酚以通過清除過多的自由基來保護(hù)人類免受疾病威脅，已經(jīng)成為安全、有效抗氧化劑的新來源[17]。根據(jù)沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出RRE的總酚含量為(446.392±51.707) mg GAE/g，約是其同屬植物華東覆盆子嫩葉的6.4倍[13]，甘扎嘎日果的7.1倍[18]；天然來源的黃酮類化合物具有顯著的生物活性，對(duì)人體具有抗氧化、抗突變、抗癌和保護(hù)血管等功效[19]。根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出RRE的總黃酮含量為(638.337±124.537) mg Rutin/g，約是同屬植物山莓莖皮的22.2倍[20]，華東覆盆子老葉的7.3倍[13]。結(jié)果表明，RRE中含有豐富的酚類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)，可以作為一種新型高抗氧化膳食補(bǔ)充劑。

2.2 體外抗氧化活性

2.2.1 DPPH自由基清除能力

DPPH是一種穩(wěn)定和良好定性的有機(jī)自由基，DPPH的醇溶液會(huì)釋放穩(wěn)定的自由基，在517 nm處有最大強(qiáng)度的吸收峰，故常用于表征樣品抗氧化活性的強(qiáng)弱程度[21]。由圖1可知，RRE的DPPH自由基清除能力[(871.878±89.338) mg Trolox/g]顯著高于VC[(287.707±8.424) mg Trolox/g]和BHT[(87.249±5.837) mg Trolox/g](P<0.05)，表明RRE對(duì)DPPH自由基具有較強(qiáng)的清除能力，呈現(xiàn)出較強(qiáng)的體外抗氧化能力。RRE的DPPH自由基清除能力強(qiáng)于同屬植物覆盆子的甲醇酸相、乙酸乙酯相提取物[22]，具有良好的抗氧化活性。結(jié)合表1的相關(guān)性分析可知，DPPH自由基清除能力與樣品中的總酚和黃酮含量都具有很高的相關(guān)性，可以通過對(duì)RRE的組分進(jìn)行更深入的分析研究，為制作新型天然抗氧化劑提供新思路。

圖1 樣品與對(duì)照物的DPPH自由基清除能力Fig.1 The DPPH radical scavenging ability of sample and control 注：不同小寫字母代表顯著性差異(P<0.05)(下同)

表1 總酚、總黃酮與體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間的相關(guān)性分析Table 1 The correlation analyses between total phenolics, total flavonoids and in vitro antioxidant experiment

2.2.2 ABTS陽離子自由基清除能力

ABTS經(jīng)活性氧氧化會(huì)產(chǎn)生穩(wěn)定的陽離子自由基，呈現(xiàn)出藍(lán)綠色，并在波長(zhǎng)734 nm處有最大吸收峰，如樣品溶液與ABTS陽離子自由基發(fā)生反應(yīng)，使該反應(yīng)體系褪色，則可說明該樣品中某些成分具有ABTS陽離子自由基清除活性，可以反映樣品的抗氧化能力[23]。由圖2可知，清除ABTS陽離子自由基的能力大小依次為VC[(9 583.422±1 376.617)mg Trolox/g]>BHT[(6 042.451±1 298.696)mg Trolox/g]>RRE[(1 177.854±87.024)mg Trolox/g]，雖然低于陽性對(duì)照VC和BHT(P<0.05)，但其清除能力仍強(qiáng)于同屬植物黑果懸鉤子的莖部[24]。與陽性對(duì)照相比，RRE的ABTS陽離子自由基清除能力的結(jié)果與DPPH自由基清除能力的結(jié)果有所差異，原因在于兩者的機(jī)理之間不同[23]，VC和BHT更有利于清除ABTS陽離子自由基。研究表明，植物中的酚類物質(zhì)是清除ABTS陽離子自由基的主要活性成分[25]，結(jié)合表1的相關(guān)性分析，ABTS陽離子自由基清除能力與樣品中總酚含量之間具有很高的相關(guān)性，而RRE中酚類化合物含量豐富，說明RRE具有一定的ABTS陽離子自由基清除能力。

圖2 樣品與對(duì)照物的ABTS陽離子自由基清除能力Fig.2 The ABTS+ radical scavenging ability of sample and control

2.2.3 超氧陰離子自由基清除能力

超氧陰離子自由基可以誘導(dǎo)生物體內(nèi)的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化，當(dāng)生物體內(nèi)超氧陰離子自由基過量時(shí)，會(huì)破壞血腦屏障和使細(xì)胞死亡，增加腦出血的可能，嚴(yán)重地威脅人類健康[26]。所以超氧陰離子自由基清除能力的強(qiáng)弱是評(píng)價(jià)樣品抗氧化能力的一個(gè)重要指標(biāo)。由圖3可知，超氧陰離子自由基清除能力大小依次為VC[(1 513.921±30.717) mg Trolox/g]>RRE[(419.928±54.146) mg Trolox/g]>BHT[(247.193±15.159) mg Trolox/g]。相關(guān)性分析顯示，RRE中超氧陰離子自由基清除能力與總黃酮含量相關(guān)性最高，與總酚含量的相關(guān)性不高。RRE的超氧陰離子自由基清除能力優(yōu)于BHT(P<0.05)，可較好地清除超氧陰離子自由基，表明RRE中某些組分具有開發(fā)為食品抗氧化劑的潛力，可以有效延緩食品氧化。

圖3 樣品與對(duì)照物的超氧陰離子自由基清除能力Fig.3 The superoxide anion radical scavenging ability of sample and control

2.2.4 鐵還原能力

FRAP法是基于氧化還原的比色法，在酸性條件下，F(xiàn)e3+與TPTZ形成Fe3+-TPTZ復(fù)合物，其在還原物質(zhì)的作用下會(huì)被還原為二價(jià)鐵，呈現(xiàn)藍(lán)色，并在593 nm處具有最大吸收峰。因此，在此波長(zhǎng)下進(jìn)行吸光值變化的檢測(cè)，可以反映出樣品鐵還原的能力[27]。由圖4可知，鐵還原能力大小依次為VC[(2 016.666±28.151) mg Trolox/g]>RRE[(1 827.378±222.059) mg Trolox/g]>BHT[(1 243.333±33.664) mg Trolox/g]，RRE的鐵還原能力較強(qiáng)，與VC相比無顯著性差異(P>0.05)，并顯著高于BHT(P<0.05)，相關(guān)性分析也表明，F(xiàn)RAP與樣品中的總酚、總黃酮含量的相關(guān)性均較高，其相關(guān)性系數(shù)分別達(dá)到了0.953和0.997，結(jié)合樣品清除DPPH自由基、ABTS陽離子自由基和超氧陰離子自由基的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出，RRE是一種較好的天然抗氧化資源。

圖4 樣品與對(duì)照物的FRAP能力Fig.4 The FRAP ability of sample and control

2.3 α-葡萄糖苷酶活性抑制能力

治療糖尿病的關(guān)鍵措施是控制并降低患者的血糖含量，主要是通過抑制小腸上α-葡萄糖苷酶的活性，從而降低對(duì)攝入的碳水化合物的消化，延緩人體對(duì)葡萄糖的吸收來治療糖尿病。目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要的α-葡萄糖苷酶抑制劑是阿卡波糖，它對(duì)Ⅱ型糖尿病有確切的療效[28]。通過測(cè)定樣品的α-葡萄糖苷酶活性抑制能力，從而評(píng)估其潛在的抗糖尿病能力。由圖5可知，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，α-葡萄糖苷酶抑制能力與樣品質(zhì)量濃度存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，隨樣品的質(zhì)量濃度的增大而升高，其IC50值為(1.314±0.070) mg/mL，高于糖尿病臨床治療物阿卡波糖的IC50值(0.487±0.098)mg/mL(P<0.05)。但從圖5也可以看出，RRE還是具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制能力，且呈現(xiàn)劑量依賴性，可以對(duì)其活性成分進(jìn)行富集和分離純化，以評(píng)估其單體化合物的α-葡萄糖苷酶抑制能力。

a-α-葡萄糖苷酶清除率；b-IC50值圖5 樣品的α-葡萄糖苷酶抑制能力Fig.5 The α-glucosidase inhibition of sample

2.4 乙酰膽堿酯酶活性抑制能力

AD又被稱為老年癡呆癥，是一種在老年人中常見的進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要的臨床表現(xiàn)有記憶受損和認(rèn)知功能減退，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。發(fā)生AD的關(guān)鍵原因在于患者大腦中神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的缺失，而乙酰膽堿酯酶可催化乙酰膽堿的裂解，使其缺失的速度加快。加蘭他敏是乙酰膽堿酯酶的競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制劑，常被用于臨床治療AD的研究[29]。由圖6可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，RRE的乙酰膽堿酯酶抑制能力與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，并呈現(xiàn)劑量依賴性，RRE的乙酰膽堿酯酶抑制能力的IC50值為(403.347±18.162) μg/mL，同樣也高于加蘭他敏(1.062±0.128) μg/mL(P<0.05)，也遠(yuǎn)高于黃柏、元胡等中草藥乙酸乙酯提取物的295.12、29.09 mg/L[30]。

a-AchE酶清除率；b-IC50值圖6 樣品的AChE抑制能力Fig.6 The AChE inhibition of sample

3 結(jié)論

本研究對(duì)懸鉤子屬茅莓的根部粗提物的有效成分、體外抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶的抑制能力進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，RRE總酚含量為446.392 mg GAE/g，總黃酮含量為638.337 mg Rutin/g。體外抗氧化試驗(yàn)的結(jié)果為DPPH自由基清除能力為871.878 mg Trolox/g，ABTS陽離子自由基清除能力為1 177.854 mg Trolox/g，鐵還原能力為1 827.378 mg FeSO4/g，超氧陰離子自由基清除能力為419.928 mg Trolox/g。RRE的α-葡萄糖苷酶抑制能力的IC50值為1.314 mg/mL，乙酰膽堿酯酶抑制能力的IC50值為403.347 μg/mL。結(jié)果表明，茅莓根具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶和乙酰膽堿酯酶抑制能力，可能與茅莓根體內(nèi)含量豐富的酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)有關(guān)，具有開發(fā)成天然抗氧化劑和降血糖、預(yù)防老年癡呆的藥物的潛力。后續(xù)擬對(duì)RRE進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定等工作，將其運(yùn)用在食品、藥品領(lǐng)域中，對(duì)茅莓根的開發(fā)利用具有重要的意義。