王米香 周建華 吳干斌南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院臨床藥學(xué)科，河南 473000；鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，鄭州 45004

阿司匹林目前在臨床中廣泛用于心腦血管病的防治，尤其在經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）后，其與氯吡格雷聯(lián)用成為抗凝治療的基石［1-2］。但是，在實(shí)際的臨床實(shí)踐中，我們發(fā)現(xiàn)患者規(guī)律服用阿司匹林后仍不能達(dá)到預(yù)期的預(yù)防栓塞性疾病的目的，也就是所謂的“阿司匹林抵抗”［3］。隨著近年的研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林抵抗與血小板內(nèi)皮聚集受體1（platelet endothelial aggregation receptor-1，PEAR1）的基因多態(tài)性具有相關(guān)性［4］，因此本課題組擬檢測(cè)河南地區(qū)人群中的PEAR1基因型，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)PEAR1各基因型的分布情況，明確基因型與阿司匹林療效之間的相關(guān)性，以期實(shí)現(xiàn)阿司匹林藥物使用的個(gè)體化，最終達(dá)到預(yù)期的預(yù)防栓塞性疾病的目的，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器與耗材 本試驗(yàn)中主要用到熒光檢測(cè)儀、高速離心機(jī)（離心半徑為16 mm）、醫(yī)用冰箱、DNA純化試劑盒、醫(yī)用乙醇等儀器及設(shè)備，除高速離心機(jī)為德國(guó)進(jìn)口設(shè)備外，其余所用儀器及設(shè)備均為國(guó)產(chǎn)。

1.2 研究對(duì)象 本試驗(yàn)中所涉及到的研究對(duì)象是健康體檢者，統(tǒng)計(jì)時(shí)間為2019年1月至12月。本試驗(yàn)制定了嚴(yán)格的入選標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)，力求入組研究對(duì)象身體健康，無(wú)慢性病。均為河南籍人員，均簽署知情同意書(shū)。入組研究對(duì)象共計(jì)115名，其中男性69名，女性46名，年齡（40.0±3.5）歲，身高（164.9±6.5）cm，體質(zhì)量（62.3±3.4）kg。

1.3 基因型檢測(cè)過(guò)程 按照公司提供的SOP提取DNA，加入相應(yīng)的試劑盒混勻并與涂片結(jié)合，混勻后通過(guò)標(biāo)記寡核苷酸探針對(duì)涂片上的染色體進(jìn)行染色標(biāo)記，并進(jìn)行熒光原位雜交檢測(cè)，進(jìn)而分析染色體核型。通過(guò)熒光檢測(cè)儀檢測(cè)熒光信號(hào)，最終得出基因分型。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 進(jìn)行了Hardy-Weinberg定律的吻合度測(cè)驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，行χ2檢驗(yàn)，正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PEAR1基因分型及其在河南地區(qū)人群中的分布頻率 試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PEAR1（rs12041331）共有3種基因型，即AA、GA和GG型，3種基因型及其在不同河南地區(qū)人群中的各自分布頻率見(jiàn)表1，等位基因頻率在性別間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 PEAR1 3種基因型在不同性別河南人群中的分布頻率[例（%）]

2.2 吻合度測(cè)驗(yàn) 將試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行Hardy-Weinberg定律的吻合度測(cè)驗(yàn)，通過(guò)計(jì)算檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡定律（χ2=1.24，P=0.362）。

3 討 論

阿司匹林通過(guò)不可逆地抑制環(huán)氧合酶1（COX-1）和COX-2，從而減少血栓素A2的生成，進(jìn)而對(duì)血小板聚集產(chǎn)生抑制作用。阿司匹林在臨床中應(yīng)用范圍比較廣。但在臨床中發(fā)現(xiàn)有一部分患者即使規(guī)律服用阿司匹林，仍不能達(dá)到預(yù)期的臨床目的，有研究發(fā)現(xiàn)“阿司匹林抵抗”在人群中的發(fā)生率在5.5%～60.0%之間［3］。阿司匹林抵抗產(chǎn)生的原因很多，諸如患者的依從性差、患者自身的基礎(chǔ)疾病及其病理生理狀況、藥物的相互作用等［1］。隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林抵抗與遺傳因素有很大的關(guān)聯(lián)性：COX-1、COX-2、ABCB1、PEAR1等基因的多態(tài)性與阿司匹林的個(gè)體差異有相關(guān)性［1，5-7］。

目前對(duì)COX-1、COX-2、ABCB1基因多態(tài)性的研究較多，因此我們課題組將PEAR1的基因多態(tài)性作為突破點(diǎn)，擬檢測(cè)河南地區(qū)人群中的PEAR1基因型，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)PEAR1各基因型的分布情況，明確基因型與阿司匹林療效之間的相關(guān)性，以期實(shí)現(xiàn)阿司匹林藥物使用的個(gè)體化的目的。PEAR1是表達(dá)在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上的1型膜蛋白，其磷酸化后，最終會(huì)引起血小板之間不可逆的聚集［7］。國(guó)內(nèi)外研究也表明PEAR1（rs12041331）的基因多態(tài)性與阿司匹林的療效具有相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)具有突變位點(diǎn)的患者在服用阿司匹林藥物進(jìn)行抗血小板治療時(shí)，達(dá)到臨床預(yù)期的實(shí)現(xiàn)率均大為降低［8-10］。PEAR1（rs12041331）的基因型有3種：AA、GA和GG型，其中AA型對(duì)阿司匹林的應(yīng)答差，GA型對(duì)阿司匹林的應(yīng)答不佳，GG型對(duì)阿司匹林的應(yīng)答好［11］。

本試驗(yàn)擬檢測(cè)河南地區(qū)人群中的PEAR1基因型，通過(guò)檢測(cè)健康人群中PEAR1（rs12041331）的基因型，進(jìn)而得出各基因型的分布頻率，從而來(lái)指導(dǎo)阿司匹林的使用，最終達(dá)到個(gè)體化應(yīng)用及降低不良心腦血管事件發(fā)生的概率。通過(guò)入組和剔除標(biāo)準(zhǔn)的制定，將入組人員的一般資料進(jìn)行了篩查，在身高、體質(zhì)量、年齡、性別等方面的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)試驗(yàn)得出PEAR1（rs12041331）的3種基因型為AA、GA和GG型，其分布頻率分別為12.17%、46.09%和41.74%，且其在性別間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所得結(jié)果與國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道的12.00%、48.00%和40.00%基本相近［12］。本試驗(yàn)由于時(shí)間緊迫，納入的研究對(duì)象數(shù)量較少，所研究的指標(biāo)較少，研究結(jié)果有待進(jìn)一步的確認(rèn)。此次試驗(yàn)所得出其在健康人群中的分布頻率后，下一步準(zhǔn)備在心腦血管患者中進(jìn)行試驗(yàn)，并擴(kuò)大樣本量，以多維度的觀察指標(biāo)來(lái)研究二者之間的相關(guān)性，以期以PEAR1（rs12041331）基因型為導(dǎo)向，進(jìn)而來(lái)指導(dǎo)患者阿司匹林的使用，達(dá)到個(gè)體化應(yīng)用的目的。

利益沖突：作者已申明文章無(wú)相關(guān)利益沖突。