林勇

（福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350101）

凝集素具有免疫調(diào)節(jié)和抑制腫瘤生長的作用，同時(shí)還參與生物體內(nèi)的一些關(guān)鍵生理過程，是研究生物體內(nèi)分化和分子識(shí)別等生理生化在生命規(guī)律重要功能作用，已成為生物研究的熱點(diǎn)之一[1-4]。

從凝集素的研究來看，其顯著地抑制人乳腺癌細(xì)胞、人眼成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞的增殖，并且這些抑制是可逆的而且其細(xì)胞學(xué)毒性不明顯[5-9]，這些特殊的活性使其在未來可能成為治療腫瘤和組織增生的新型藥物。凝集素促進(jìn)菌種菌絲分化扭結(jié)的情況的研究卻很少，國內(nèi)外對(duì)于食用菌凝集素的研究多在其分離純化與其部分的理化性質(zhì)上進(jìn)行[10-13]，對(duì)其實(shí)際應(yīng)用于菌種自身的研究較少，對(duì)凝集素作用于不同菌種的菌絲分化的則少有研究。主要的研究則針對(duì)的是從食用菌提取的凝集素混合促進(jìn)劑并滴加在不同種菌種上所產(chǎn)生的促進(jìn)菌絲分化的扭結(jié)情況，目的是為了在食用菌凝集素菌絲扭結(jié)劑的促進(jìn)下可以讓菌種提前出菇，從而縮短真姬菇商品化時(shí)間和成本降低[13-16]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

正常袋栽長滿菌絲的真姬菇菌袋。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 凝集素的分離純化

參照張迪、林勇等分離純化方法[11]，獲得各峰值的凝血活性，然后對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥，收集得到雙孢蘑菇2796凝集素純品。

1.2.2 食用菌培養(yǎng)基的制備

固體瓊脂PDA培養(yǎng)基，其冷卻至一定溫度（不能讓其凝固）后開始在超凈臺(tái)上倒入PDA，然后等液體凝固后開始接種。

1.2.3 菌種接種

在真姬菇菌袋接入真姬菇菌絲菌塊（長×寬：5 cm×1 cm，2條，接種過程要全程保持不染菌），放在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲布滿整袋后，噴灑不同濃度（0、1、3、5、7、9 g/L重復(fù)，5次，即5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，1個(gè)對(duì)照空白組）的凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑，同時(shí)繼續(xù)放在培養(yǎng)室中黑暗培養(yǎng)10 d左右，然后將培養(yǎng)皿分別轉(zhuǎn)移到10～15 ℃條件下，在不同的光源、不同CO2濃度培養(yǎng)料含水量、80%濕度繼續(xù)培養(yǎng)，觀察結(jié)果，每隔3 d拍1次照片記錄過程。

2.1 凝集素促進(jìn)劑處理真姬菇菌絲扭結(jié)的影響

由圖1可知，通過食用菌凝集素促進(jìn)劑處理的真姬菇經(jīng)過20 d的觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿在濃度為5 mg/L有出現(xiàn)有扭結(jié)的跡象，菌絲有顏色加深和菌絲加粗的現(xiàn)象，也就說明有一定的促進(jìn)扭結(jié)轉(zhuǎn)色的情況發(fā)生。

圖1 真姬菇菌絲的顯微觀察

2.2 食用凝集素促進(jìn)劑真姬菇栽培工藝對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

2.2.1 培養(yǎng)溫度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

溫度試驗(yàn)結(jié)果表明食用凝集素真姬菇的菌絲生長溫度范圍為10～15 ℃，適宜生長溫度為13 ℃。

2.2.2 培養(yǎng)料含水量對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

含水量試驗(yàn)結(jié)果：真姬菇的菌袋生長含水量范圍為50%～65%，適宜生長含水量為60%。

表1 食用菌凝集素栽培真姬菇溫度試驗(yàn)結(jié)果

表2 食用凝集素栽培真姬菇培養(yǎng)料含水量影響

表3 pH值對(duì)食用凝集素栽培真姬菇的影響

表4 不同光源對(duì)真姬菇的菌袋生長的試驗(yàn)結(jié)果

表5 真姬菇菌袋在紫光不同強(qiáng)度下的試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 酸堿度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

酸堿度試驗(yàn)表明食用凝集素栽培真姬菇pH值范圍為4～9，適宜生長栽培料pH值為6～7。

2.2.4 不同光源同種強(qiáng)度下對(duì)食用凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

不同光源在15 lux條件下試驗(yàn)結(jié)果表明，紫光、綠光比其他光更適合真姬菇，紫光更適合菌絲扭結(jié)。

2.2.5 紫光源不同強(qiáng)度對(duì)食用凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

紫光源在5、10、15、20 lux強(qiáng)度下，食用菌凝集素栽培真姬菇試驗(yàn)結(jié)果表明，15～20 lux條件下，每個(gè)菌袋的扭結(jié)數(shù)量明顯多于其它。

2.2.6 不同CO2濃度對(duì)食用菌凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

不同CO2濃度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）下的試驗(yàn)結(jié)果表明，CO2濃度0.5%、1.0%時(shí)每個(gè)菌袋的扭結(jié)數(shù)量高于1.5%、2.0%，說明CO2濃度0.5%、1.0%更適合其生長，出菇數(shù)量比較均勻。

表6 不同CO2濃度時(shí)真姬菇的菌袋生長的試驗(yàn)結(jié)果

2.2.7 食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑的綜合因素對(duì)真姬菇菌袋的影響

通過食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑對(duì)真姬菇菌絲平板的菌絲扭結(jié)的營養(yǎng)的研究，發(fā)現(xiàn)總共2組6個(gè)重復(fù)中5 g/L以上濃度的凝集素處理點(diǎn)均出現(xiàn)了菌絲扭結(jié)點(diǎn)，6塊平皿中累計(jì)出現(xiàn)了21個(gè)菌絲扭結(jié)點(diǎn)，1 g/L濃度處理點(diǎn)均未出現(xiàn)扭結(jié)點(diǎn)，3 g/L濃度的處理點(diǎn)只有50%出現(xiàn)了扭結(jié)點(diǎn)，且扭結(jié)點(diǎn)較??；5、7、9 g/L處理點(diǎn)出現(xiàn)的扭結(jié)原基大小均衡，未表現(xiàn)出明顯差異。生產(chǎn)應(yīng)用上將5 g/L的雙孢蘑菇凝集素噴劑，待菌包開袋后噴灑于袋口菌絲表面，經(jīng)處理后可加快菌絲扭結(jié)，進(jìn)而縮短向子實(shí)體轉(zhuǎn)化時(shí)間3～5 d，產(chǎn)量與未噴灑制劑的無顯著差異。

由表7可以看出，在開袋時(shí)噴灑食用菌凝集素可以明顯縮短真姬菇扭結(jié)時(shí)間，從而縮短生長時(shí)間。在濃度為1～5 g/L時(shí)，隨著食用菌凝集素濃度的增加真姬菇生長時(shí)間縮短，但當(dāng)食用菌凝集素再增加時(shí)，真姬菇生長時(shí)間縮短達(dá)穩(wěn)定水平，縮短時(shí)間不明顯。

表7 食用菌凝集素對(duì)真姬菇生長時(shí)間的影響

從表8中可以看出，噴灑食用菌凝集素對(duì)真姬菇產(chǎn)量沒有明顯影響，不會(huì)造成產(chǎn)量下降。因此，在真姬菇開袋時(shí)噴灑食用菌凝集素有助于真姬菇菌絲扭結(jié)，縮短生長時(shí)間，并且最佳的食用菌凝集素噴灑濃度為5 g/L。真姬菇開袋時(shí)噴灑5 g/L食用菌凝集素可以縮短生長時(shí)間3～4 d。

表8 食用菌凝集素（5 g/L）對(duì)真姬菇菌袋產(chǎn)量的試驗(yàn)結(jié)果（每個(gè)菌袋）

3 討論與結(jié)論

⑴ 凝集素(lectin)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的免疫調(diào)節(jié)以及抑制病毒增殖方面得以應(yīng)用，還參與生物體內(nèi)的一些關(guān)鍵生理過程,且與食用真菌的菌絲發(fā)育和形態(tài)生長發(fā)育息息相關(guān)[12-16]。

⑵本實(shí)驗(yàn)探討食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑對(duì)真姬菇工廠化生產(chǎn)的影響，研究不同的溫度、培養(yǎng)料含水量、酸堿度、不同光源、不同CO2濃度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響。機(jī)理研究還待進(jìn)步深入。