廖建良，蔡敏玲

（惠州學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，廣東 惠州 516007）

多穗石柯（Lithocarpus polystachyus（Wall.）Re?hd.）別名多穗柯、甜葉子樹、甘茶、胖稠等，系殼斗科石柯屬常綠喬木.廣東羅浮山酥繆村野生多穗石柯，其根、葉、果實均可入藥，其葉泡水味道甘甜可口，兼具茶、糖、藥三種功能，常作清熱解毒和安神降壓之品，被村民拿來當(dāng)茶飲用，又稱羅浮山甜茶.民間認(rèn)為羅浮山甜茶有益于人們身體健康，不僅能生津止渴，而且對人體有很好的藥理作用和保健功能［1-8］，也被羅浮山村民稱為長壽茶.多穗石柯分株、分根及種子繁殖方式，但這三種繁殖方式由于受到材料和季節(jié)時間的制約，很難短時間獲得大量苗木.植物生長調(diào)節(jié)劑在枝條扦插和組織培養(yǎng)方面的研究已經(jīng)有相關(guān)報道，組織培養(yǎng)可以在短時間內(nèi)獲得大量健康苗木，且具有繁殖系數(shù)高、成本低、速度快等特點，因此在推廣培養(yǎng)品種、迅速滿足市場需求等方面具有重要意義［9-19］.本研究通過不同植物生長調(diào)節(jié)劑、不同基質(zhì)對多穗石柯枝條扦插和組織培養(yǎng)的繁殖影響，探討多穗石柯扦插栽培及組織培養(yǎng)技術(shù)，以期解決目前羅浮山多穗石柯育苗繁殖中存在的問題.

1 材料與方法

1.1 研究材料

多穗石柯扦插枝條取自羅浮山基地，組織培養(yǎng)試驗以多穗石柯帶芽幼莖的一年扦插枝條為材料.

1.2 儀器與試劑

植物生長調(diào)節(jié)劑有6-BA、NAA、ABT生根粉，MS培養(yǎng)基粉（不含瓊脂和蔗糖）、瓊脂粉、蔗糖，75%酒精、0.1%氯化汞.

光照恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺，立式高壓蒸汽滅菌鍋，電子天平秤，培養(yǎng)瓶、錐形瓶、容量瓶、燒杯等玻璃儀器，鑷子，剪刀，扦插培養(yǎng)袋等.

1.3 研究方法

1.3.1 扦插試驗設(shè)計

扦插枝條處理：將從羅浮山采集回來的新鮮健壯半木質(zhì)化嫩枝條剪截成長10 cm插穗，保留2~3個無損傷的側(cè)芽和2~3片成熟葉片，上端平口，下端45度斜口，切口平滑且沒有撕裂，生根粉溶液處理前先用1%高錳酸鉀溶液浸泡消毒10 h.

生根粉試驗：用50、100、150、200、250 mg/L生根粉溶液濃度分別浸泡處理好的枝條下端切口16 h，清水對照，每處理50根枝條，重復(fù)三次；將處理后的枝條扦插于黃心土基質(zhì)的培養(yǎng)袋苗床中，在陰天或傍晚進(jìn)行，定期噴50%多菌靈可濕性粉劑1000倍液各50 mL.

扦插管理：將處理后的枝條扦插于苗床中，扦插深度為3-5 cm，行間距8 cm，枝條間距6 cm，扦插后澆水濕潤，在所有的培養(yǎng)袋苗床上蓋上白色塑料薄膜，再在其上1.6 m左右架上一層遮蔭網(wǎng)，每天噴水，保持濕潤.

指標(biāo)測定：生根率=扦插枝條生根數(shù)/總扦插枝條數(shù)×100%；5個月后調(diào)查扦插枝條生根率，一年后從各濃度的生根粉溶液試驗處理中隨機選取10株扦插苗，對其鮮重、葉子數(shù)、生根數(shù)、根長、苗高進(jìn)行統(tǒng)計和分析.

基質(zhì)試驗：根據(jù)不同生根粉濃度實驗結(jié)果，用濃度為150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡處理好的插穗16 h，利用黃心土、營養(yǎng)土（主要成分為泥炭土、椰糠、珍珠巖）、河沙3種原料按照不同體積百分比配制成扦插基質(zhì)（如表1），共計3個處理，每個處理50根枝條，每個重復(fù)3次，共450根枝條.

表1 扦插基質(zhì)配比

1.3.2 組織培養(yǎng)試驗設(shè)計

材料處理：從生長健康旺盛、無病無蟲害的一年生扦插苗上剪下0.5~1.0 cm的帶有1~2個腋芽的莖段，再從莖段上離葉柄基部約0.5 cm處把葉子剪下，將帶芽莖段放于洗衣粉液中，用軟毛刷將表面洗刷干凈，置于流水下沖洗1 h，換清水浸泡5 min，繼續(xù)用流水沖洗1 h后，用蒸餾水沖洗，將材料置于消毒好的培養(yǎng)皿中，放入超凈工作臺.

消毒處理：在無菌的超凈工作臺上用75%的酒精浸泡接種材料30 s進(jìn)行消毒，用無菌水清洗3次，再用0.1%的氯化汞溶液浸泡10 min進(jìn)行滅菌，最后用無菌水沖洗3 min，重復(fù)4~5次；接種時，將處理后的材料插入不添加植物生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基（以MS為基本成分，4.75 g MS培養(yǎng)基粉添加30 g蔗糖和9 g瓊脂粉配制成）中，每瓶接種一個莖段.

誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)：將消毒處理后的莖段接種于分別添加了0.5、1.0、1.5 mg/L 6-BA，0.3、0.6、0.9 mg/L NAA的濃度的單獨培養(yǎng)基和不同濃度混合的組合培養(yǎng)基中，每瓶接種一個莖段，每個處理各接種10瓶，重復(fù)3次；接種完放置于25℃光照恒溫培養(yǎng)箱中，25 d后統(tǒng)計誘導(dǎo)出芽效果，根據(jù)出芽數(shù)和生長勢選擇最佳生長調(diào)節(jié)劑組合.

1.3.3 數(shù)據(jù)處理

運用Excel和SPSS20.0軟件對各項實驗結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析，并用Duncan多重比較法按P＜0.05進(jìn)行顯著性檢驗.

2 結(jié)果與分析

2.1 扦插試驗結(jié)果與分析

2.1.1 不同濃度ABT生根粉對多穗石柯扦插生根率的影響

由表2可見，沒有使用ABT生根粉溶液浸泡的多穗石柯扦插生根率最低；用50 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡，多穗石柯的扦插生根率達(dá)79.65%，隨著濃度升高，生根率逐漸提高；在使用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡后，生根率達(dá)到最高，而此后濃度越高，扦插生根率反而越低；即影響扦插生根率的生根粉溶液濃度順序為：150 mg/L＞200 mg/L＞100 mg/L＞250 mg/L＞50 mg/L.因此，使用濃度為150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡后，多穗石柯扦插生根率達(dá)到最高.

表2 不同濃度ABT生根粉溶液對多穗石柯扦插生根率影響

2.1.2 不同濃度ABT生根粉對多穗石柯扦插一年生苗生長情況

由表3可見，多穗石柯扦插枝條在使用ABT生根粉溶液浸泡后的扦插苗的鮮重、葉片數(shù)、生根數(shù)、根長、苗高普遍比沒有用生根粉溶液浸泡的數(shù)值高，且從各項指標(biāo)看出，濃度為150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡的扦插苗生長情況是最好的，生長勢普遍較好.

表3 多穗石柯扦插一年苗生長情況

2.1.3 不同基質(zhì)、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡處理對多穗石柯扦插的生根率影響

由表4可見，不同基質(zhì)、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡處理對多穗石柯扦插生根率的影響.實驗表明：處理1中，多穗石柯的扦插生根率比其它兩個處理效果較好，具有約91.23%的平均生根率；而處理2的生根率次之，平均生根率率為80.54%；處理3的生根率最低，平均生根率為30.70%.因此，在基質(zhì)為70%的黃心土和30%的營養(yǎng)土，經(jīng)150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡處理的多穗石柯扦插生根率最高.

表4 不同基質(zhì)、150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡處理對多穗石柯扦插的生根率影響

2.2 不同配比的植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA、NAA對多穗石柯組織培養(yǎng)影響

由表5可知，單獨使用6-BA或NAA的多穗石柯組織培養(yǎng)的效果很差，誘導(dǎo)出芽數(shù)極少，且生長趨勢差；其中，從處理2~4看出隨著6-BA濃度提高，出芽數(shù)也增長，而在不同濃度NAA中，隨著濃度提高，出芽數(shù)并沒有增長；混合不同濃度6-BA、NAA的培養(yǎng)基中，出芽數(shù)相對較多，且芽的生長趨勢相對較好，其中，處理12即添加1.0 mg/L 6-BA和0.6 mg/L NAA的組織培養(yǎng)的出芽數(shù)最高，且生長趨勢最好.

表5 不同配比的植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA、NAA對多穗石柯組織培養(yǎng)影響

（續(xù)表5）

3 結(jié)論與討論

3.1 扦插繁殖試驗

3.1.1 用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡有利于扦插繁殖

在ABT生根粉溶液浸泡多穗石柯扦插枝條試驗中，通過數(shù)據(jù)分析可以看出：用ABT生根粉溶液浸泡扦插多穗石柯枝條比清水浸泡的生根率高，即ABT生根粉的處理能促進(jìn)枝條生根，對該扦插效果作用明顯；其中，使用150 mg/L的生根粉溶液浸泡16 h的枝條的生根率最高，但與陳金艷等［12］結(jié)果有差異；本研究建議，惠州地區(qū)多穗石柯的扦插栽培，采用150 mg/L的ABT生根粉溶液浸泡16 h后再進(jìn)行扦插，這樣有利于提高其扦插繁殖效率.

3.1.2 70%黃心土和30%營養(yǎng)土的基質(zhì)與生長調(diào)節(jié)劑組合更有利于多穗石柯扦插

實驗表明：不同生長基質(zhì)對多穗石柯扦插的生根率有影響，100%黃心土或100%河沙的基質(zhì)扦插生根率都比用70%黃心土和30%營養(yǎng)土做基質(zhì)的低，且河沙基質(zhì)生根率最低，即單純的河沙不適宜做多穗石柯扦插繁殖的基質(zhì)；雖然100%黃心土的扦插生根率不低，但相對來說，加入30%的營養(yǎng)土?xí)兄谇げ宸敝?所以，惠州地區(qū)栽培多穗石柯時建議用30%的營養(yǎng)土和70%的黃心土作基質(zhì)，用150 mg/L的ABT生根粉溶液對處理好的多穗石柯扦插枝條進(jìn)行16 h的浸泡后進(jìn)行扦插繁殖，這樣可增強多穗石柯扦插繁殖的生根效果.

3.2 誘導(dǎo)出芽最佳培養(yǎng)基

添加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA、NAA的組織培養(yǎng)試驗結(jié)果表明，混合兩種植物生長調(diào)節(jié)劑可以很好地促進(jìn)誘導(dǎo)出芽數(shù)，其中，誘導(dǎo)出芽數(shù)最多且芽生長情況較好的最佳生長調(diào)節(jié)劑配比是1.0 mg/L的6-BA和0.6 mg/L的NAA.所以，在植物組織培養(yǎng)中促進(jìn)多穗石柯莖段誘導(dǎo)出芽，建議使用的最佳組合培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基+1.0 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA.