高嘉昕， 俞丹， 劉煥章*

(1. 中國科學院水生生物研究所，中國科學院水生生物多樣性與保護重點實驗室，武漢430072； 2. 中國科學院大學，北京100049)

長期以來的分類混亂讓人們忽視了大鱗馬口魚這一物種的存在，因此目前針對大鱗馬口魚的研究甚少，僅王雪(2019)對赤水河的大鱗馬口魚進行過資源狀況、遺傳多樣性及種群結構方面的研究。大鱗馬口魚主要棲息于水流較急、底質為卵石或砂石的淺灘河段，是山區(qū)溪河中重要的物種，在棲居的河段通常具有較大的種群數(shù)量，具有重要的生態(tài)價值、觀賞價值和一定的漁業(yè)價值。同時，大鱗馬口魚分布局限于長江中上游地區(qū)，對于探討馬口魚類的物種分化以及生物地理學過程具有重要的意義。

本題源于教材，考查拋物線定義．學生若應用拋物線的定義，則可避免繁瑣計算，簡潔明快地解決問題．定義體現(xiàn)了數(shù)學的本質，本題通過對拋物線定義的考查，讓學生體會數(shù)學本質的簡單美．如果考生能夠運用定義及參數(shù)的幾何意義，結合圖形，則可通過心算得到答案．這樣的設計體現(xiàn)了“多想少算”的命題理念.

近年來，線粒體DNA被大量應用于分子系統(tǒng)學研究，成為具有代表性的分子標記之一。線粒體細胞色素b(cytb)基因不僅能有效評估物種和種群的遺傳多樣性，同時也能敏銳地檢測出潛在的種群遺傳分化問題(俞丹等，2019)。本研究選取長江中上游干流以及幾條主要支流的13個大鱗馬口魚地理種群，對其cytb基因進行擴增并測序，分析不同地理種群的遺傳多樣性、種群分化，并對其譜系地理學過程進行探討，以期為大鱗馬口魚的遺傳資源現(xiàn)狀及保護工作提供科學依據(jù)，并探討地質環(huán)境變化對其種群歷史動態(tài)的影響。

1 材料和方法

1.1 樣本采集

共選用414尾大鱗馬口魚樣本進行分析，其中，新采集樣本359尾，體長37.90～125.58 mm；其余55尾為本實驗室早年采集樣本，其序列已上傳至GenBank(Wangetal.，2019)。樣本采自河南省三門峽市盧氏縣、重慶市城口縣、湖北省恩施市宣恩縣等13個采樣點，涉及長江上游干流及漢江、清江、沅江等9條支流(表1；圖1)。所有樣本均用95%乙醇固定，保存于中國科學院水生生物研究所淡水魚類博物館。選取馬口魚Opsariichthysbidens和成都馬口魚Opsariichthyschengtui作為外類群，其中，馬口魚為自測序列，采自湘江，成都馬口魚序列來自GenBank(登錄號：KT725244)。

表1 大鱗馬口魚的樣本采集信息及遺傳多樣性信息Table 1 Information of sample locations, sample size and genetic diversity for Opsariichthys macrolepis

1.2 基因組DNA的提取、PCR擴增及測序

本研究中整體及絕大多數(shù)大鱗馬口魚種群均表現(xiàn)出h>0.5且π>0.5%，符合Grant和Bowen(1998)提出的h和π均較高的模式。大鱗馬口魚是其生境中常見的小型魚類，通常具有較龐大且穩(wěn)定的種群，而規(guī)模較大的群體往往擁有更高的遺傳多樣性(Frankham，1996)。這種現(xiàn)象也有可能是不同種群間發(fā)生二次接觸的結果。二次接觸造成遺傳多樣性增加的案例在海洋魚類(Bay & Caley，2011)、植物(Netteletal.，2008；Havrdováetal.，2015)中均有報道過。

1.3 序列處理及分析

DNA序列的比對使用Clustal X(Thompsonetal.，1997)，使用默認的參數(shù)設置，并在SEAVIEW(Galtieretal.，1996)中輔以手工校正。使用MEGA 7.0 (Kumaretal.，2016)分析序列中各堿基含量及變異情況，采用Kimura雙參數(shù)模型計算轉換/顛換比率與遺傳距離，并根據(jù)群體間的遺傳距離利用鄰接法(Neighbor-joining)構建聚類關系樹。

對大鱗馬口魚79個單倍型進行分化時間的估算(圖2)。結果顯示，大鱗馬口魚樣本的最近共同祖先存在于1.34 Ma(95%HPD：1.03～1.70 Ma)，這也是譜系A和B分化的時間。譜系A內部2個亞譜系約在1.10 Ma(95%HPD：0.79～1.46 Ma)開始分化；譜系B內部亞譜系的最近共同祖先存在于距今約1.04 Ma(95%HPD：0.76～1.37 Ma)，幾個主要亞譜系分化的時間在0.19～0.74 Ma之間。

在jModeltest 2.1.10(Darribaetal.，2012)中使用BIC準則選擇最適合的核苷酸替換模型為GTR+I+G。系統(tǒng)發(fā)育分析采用最大似然法(Maximum Likelihood，ML)和貝葉斯推斷(Bayesian Inferences，BI)。ML法在PhyML(Guindonetal.，2010)中進行，系統(tǒng)樹各分支的置信度均采用1 000次自展分析(Bootstrap analysis)重復檢測；BI法在MrBayes 3.2(Ronquistetal.，2012)中進行，馬爾科夫鏈蒙特卡洛方法(Markov Chain Monte Carlo，MCMC)設置4條鏈運行200萬代，每1 000代進行1次抽樣，獨立運行2次。

今《全宋文》收有陳景沂文兩篇，一是《全芳備祖序》，另一是《招隱寺玉蕊花記》，出《全芳備祖》前集卷六，見《全宋文》卷七九三○、第343冊第292-293頁，題目均為編者所加。由于所據(jù)版本的缺陷，兩文與我們校點整理所得都有個別字詞出入，此依其題，全文羅列如下。

在BEAST 1.10(Suchardetal.，2018)中估算分化時間，由于缺乏馬口魚類的化石信息，故采用嚴格分子鐘模型，MCMC運行1 000萬代，在TreeAnnotator中生成最大譜系置信樹(Maximum Clade Credibility Tree，MCC tree)，估算結果取平均值及95%最高后驗概率密度區(qū)間(95% highest posterior density interval，95%HPD)，cytb基因平均替代率采用1%每百萬年(Zhangetal.，2008)。

各種群之間遺傳距離在0.001～0.025之間(表2)，其中，清江與黑水河種群的遺傳距離最大，為0.025；石阡河與綦江種群間的最小，為0.001。利用遺傳距離構建大鱗馬口魚13個地理種群的NJ樹(圖3)，結果顯示所有種群聚為2個大分支，漢江支流老鶴河與任河種群聚為一支后再與清江種群聚類，其他長江上游及沅江上游的種群聚為另外一個大分支，與單倍型的分化非常一致。

在Arlequin 3.5(Excoffier & Lischer，2010)中利用分子方差分析(analysis of molecular variance，AMOVA)估算種群遺傳結構和地理群體遺傳變異的分布，計算種群間遺傳分化指數(shù)(genetic differentiation index,FST)。為獲得不同地理種群的最佳分組模式，在SAMOVA 2.0中進行空間分子方差分析(spatial analysis of molecular variance，SAMOVA)(Dupanloupetal.，2002)。對兩兩種群間的FST和地理距離進行Mantel檢驗，通過Google Earth計算任意2個采樣點間的直線距離，并進行對數(shù)變換；在R中利用vegan數(shù)據(jù)包(Oksanenetal.，2008)計算相關系數(shù)r及其置信區(qū)間。遺傳分化指數(shù)可在一定程度上指示種群間基因流和遺傳漂變的程度，是反映群體演化歷史的重要參數(shù)。FST值為0～0.05說明亞群不存在分化,為0.05～0.15時則存在中度分化,為0.15～0.25時存在高度分化(Wright，1965)。

在采訪中，他常常爽朗地大笑著，說起他們每到一處，就四處打聽哪里有帶花紋帶文字的石頭，拎著墨汁就去了。因為在某單位廁所里拓漢畫石像時間太久，挨了如廁人的罵。他們被那些精美的線條、圖案所感染，根本意識不到時間的流逝、也忘記了環(huán)境的香臭。人家罵得火冒三丈，他們拓得心滿意足：你們上你們的廁所，我們拓我們的拓片，互不影響互不影響。

在Arlequin 3.5(Tajima,1989)中進行種群擴張檢驗，計算錯配分布值、Tajima’sD和Fu’sFS值，并通過公式τ=2ut估算種群擴張發(fā)生時間(t為種群擴張以來的時間，u為序列的變異速率；u=2μk，μ為基因序列的突變率，k為分析序列的堿基數(shù)，擴張時間T=t×世代時間)，進化速率采用1%每百萬年。在BEAST 1.10中進行推測種群歷史動態(tài)的貝葉斯天際線(Bayesian skyline plot，BSP)分析，在Tracer 1.4(Rambaut & Drummond，2007)中構圖。

2 結果

2.1 cyt b基因序列變異分析

共得到414條大鱗馬口魚的cytb基因序列，比對后得到序列全長1 140 bp，包含1 030個保守位點和110個變異位點，變異位點中包含86個簡約信息位點。所有cytb序列的轉換和顛換均未達到飽和，轉換數(shù)明顯大于顛換數(shù)，平均轉換/顛換比為8.53。所有序列的堿基含量平均值為：T=29.9%、C=29.1%、A=24.2%、G=16.8%，其中A+T含量(54.1%)高于G+C(45.9%)，這與其他魚類線粒體基因A、T含量高，G、C含量低的特點相似，同時表現(xiàn)出強烈的低G含量的堿基組成偏向性。

2.2 單倍型多樣性和核苷酸多樣性

在414條cytb基因序列中共檢測到79個單倍型，整體單倍型多樣性為0.930 1±0.006 1，核苷酸多樣性為0.129 421±0.064 299。不同地理種群的單倍型多樣性和核苷酸多樣性見表1。從單倍型分布來看，老鶴河(LH，采樣點1)與任河(RH，采樣點2)種群有共享單倍型Hap1、Hap5和Hap10；前河(QH，采樣點3)、郁江(YJ，采樣點6)、石阡河(SQ，采樣點8)、綦江(QJ，采樣點9)、赤水河(CS，采樣點10)、金沙江(JS，采樣點11)和青衣江(QY，采樣點12)有共享單倍型Hap24；郁江(YJ，采樣點6)、石阡河(SQ，采樣點8)和赤水河(CS，采樣點10)有共享單倍型Hap41；赤水河(CS，采樣點10)和石阡河(SQ，采樣點8)有共享單倍型Hap48；赤水河(CS，采樣點10)和金沙江(JS，采樣點11)有共享單倍型Hap62；金沙江(JS，采樣點11)和青衣江(QY，采樣點12)有共享單倍型Hap67和Hap71。每個種群都有一定數(shù)量的特有單倍型，特有單倍型共70個。

2.3 單倍型的分化

2011-2015年臺灣對大陸林產品貿易包括木材及其制品、竹和其他林產品；其中木材及其制品是最重要的產品，其貿易總值在對大陸林產品貿易總值中所占的比重最大且遠高于竹和其他林產品；近五年，竹和其他林產品貿易的總值變化很小(見圖4)。

2.4 譜系分化時間

遺傳多樣性是生物多樣性的基礎，是物種長期生存和演化的前提，也是評估生物資源現(xiàn)狀的重要參數(shù)。單倍型多樣性(h)和核苷酸多樣性(π)是衡量一個物種群體DNA變異程度的重要指標。使用DnaSP 6.12(Rozasetal.，2017)統(tǒng)計種群單倍型多樣性及核苷酸多樣性信息，并生成單倍型序列。

Mantel檢驗表明，大鱗馬口魚種群之間遺傳分化程度與地理距離不存在顯著相關性(r=0.297 6，P=0.069 79)，說明距離隔離模型無法很好地解釋當前大鱗馬口魚種群遺傳格局的成因。可以發(fā)現(xiàn)，本研究中部分種群地理距離較近，如任河和前河種群，清江和酉水、郁江種群，但是種群間遺傳分化程度卻較高；綦江與石阡河、赤水河種群地理距離較遠，但卻不存在種群分化。這說明地理距離并非影響大鱗馬口魚遺傳格局形成的主要因素。

2.5 種群間遺傳分化與種群遺傳結構

對大鱗馬口魚13個種群進行分子方差分析(AMOVA)，結果顯示遺傳變異主要來源于種群間(84.5%，P<0.01)；進一步對種群間進行比較分析，結果顯示兩兩群體之間的FST范圍為-0.016 24～0.998 27，除老鶴河和任河、赤水河和綦江、石阡河和綦江種群外，其他種群之間FST值均大于0.05(0.200 15～0.998 27，P<0.01)，其中，清江種群和其他種群之間的FST值最大(0.918 59～0.998 27，P<0.01)。

旅游體驗發(fā)生在旅游世界當中，是旅游者在順序的經歷了不同的旅游情境之后所獲得的主觀情感。對于旅游者來說，旅游體驗仿佛是觀看和參與一次次的戲劇演出，就像是發(fā)生在一個個具體的舞臺空間、經歷著一幕幕舞臺場景的表演過程[2]。

利用ML法和BI法構建大鱗馬口魚79個單倍型的系統(tǒng)發(fā)育樹(圖2)。結果顯示，2種方法得到的系統(tǒng)樹拓撲結構基本一致，所有單倍型可分為2個明顯的譜系：譜系A和B。其中，譜系A中的單倍型來自老鶴河、任河和清江種群；譜系B中的單倍型來自前河、酉水和郁江等其他10個種群。譜系A包含2個亞譜系，來自漢江(老鶴河、任河)和清江的單倍型各形成1個單系，其中，漢江2個支流種群組成的分支中單倍型彼此混雜；譜系B中包含多個亞譜系，其中，多數(shù)種群的單倍型彼此混雜，沒有一定的地理格局。各譜系內部支持率普遍較低，且存在多歧分支。

表2 大鱗馬口魚13個種群的遺傳分化指數(shù)(下三角)和遺傳距離(上三角)Table 2 Genetic differentiation indices (lower left) and pairwise genetic distances (upper right) among 13 populations of Opsariichthys macrolepis

為進一步探究大鱗馬口魚種群的遺傳結構，對所有大鱗馬口魚種群進行空間分子方差分析(SAMOVA)，假定具有最大組間變異(FCT值)的劃分方案為最符合自然的群體結構模式。結果顯示當所有種群劃分為3個組，即老鶴河和任河為一組，清江為一組，其他種群為一組時，得到的FCT值(0.743 247)最大，同時這樣劃分也同利用NJ法基于遺傳距離構建的不同地理種群的聚類關系相吻合，說明該劃分可能是最符合自然的群體結構模式。

2.6 種群歷史動態(tài)分析

Tajima’sD檢驗顯示，任河、石阡河種群檢驗結果為顯著的負值，檢測到了種群擴張；而其他種群均符合中性進化的假設，未檢測到種群擴張。Fu’sFS檢驗顯示除清江、酉水、石阡河種群外，其他種群均未檢測到種群擴張。SSD檢驗結果顯示，除前河、長江忠縣段、綦江種群以外，其他種群均檢測到種群擴張；而Hri檢驗結果顯示，除長江忠縣段種群以外，其他種群均檢測到種群擴張；根據(jù)1%每百萬年的突變速率，推算出大鱗馬口魚不同地理種群發(fā)生擴張的時間為0.005～0.236 Ma(表3)。對所有種群進行BSP分析，得到了有效種群大小隨溯祖時間變化的動態(tài)曲線(圖4)。其中，清江、酉水、長江忠縣段及黑水河種群在近期處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)，沒有明顯的種群擴張或收縮；青衣江種群在0.04 Ma左右開始擴張；前河、赤水河種群于0.02 Ma左右發(fā)生了擴張；任河、郁江、石阡河種群大致于0.01 Ma開始擴張；老鶴河、綦江、金沙江宜賓段種群分別于0.02 Ma、0.02 Ma、0.01 Ma左右經歷了種群收縮。由所有個體組成的種群于0.08 Ma以來開始快速擴張，隨后處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)。

表3 大鱗馬口魚13個種群的中性檢驗和錯配分析Table 3 Neutrality tests and mismatch distribution values for 13 populations of Opsariichthys macrolepis

3 討論

3.1 長江中上游干支流大鱗馬口魚的遺傳多樣性

本研究中大鱗馬口魚不同種群間的遺傳分化指數(shù)范圍為-0.016 24～0.998 27，除老鶴河和任河，赤水河和綦江、石阡河和綦江種群不存在種群分化外，其他種群均存在不同程度的分化，說明本研究中大部分大鱗馬口魚種群間缺乏基因交流。這可能與大鱗馬口魚作為一種產沉粘性卵的小型山溪定居型魚類，主動擴散能力較弱有關，且研究采用的多數(shù)樣本來源于采樣河流上游或源頭的小支流，各群體之間距離較遠或有山脈等地理屏障阻隔，限制了其擴散或交流。值得注意的是，老鶴河與任河群體，綦江和赤水河、石阡河群體雖相隔較遠，卻不存在種群分化。推測可能存在近期的地質構造事件，造成了水系的改道或河流襲奪事件的發(fā)生，并導致了魚類的交流。同時，Mantel檢驗也表明，大鱗馬口魚群體之間的遺傳分化程度與地理距離沒有顯著相關性，這進一步說明了地理距離并不是影響大鱗馬口魚遺傳格局形成的主要因素。

Grant和Bowen(1998)依據(jù)32種海洋魚類的線粒體單倍型多樣性和核苷酸多樣性，推測了種群演化歷史的4種模式：當h和π均較低(h<0.5，π<0.5%)時，種群可能經歷了瓶頸效應或奠基者效應；當h較高(h>0.5)而π較低(π<0.5%)時，種群可能正在經歷瓶頸效應后的快速擴張；當h較低(h<0.5)而π較高(π>0.5%)時，可能由于彼此隔離的種群發(fā)生了二次接觸，或大而穩(wěn)定的群體正經歷強烈的種群瓶頸；當h和π均較高(h>0.5，π>0.5%)時，則可能由于種群大而穩(wěn)定并擁有較長的演化歷史，亦或是發(fā)生了二次接觸。

那個男人漲紅了脖子追在后面。等來到房中，沒有事可做，那個男人像猿猴一般，袒露出多毛的胸膛，去用厚手掌閂門去了！而后他開始解他的褲子，最后他叫金枝：

采用高鹽法(Aljanabi & Martinez，1997)進行基因組DNA的提取。cytb基因擴增和測序引物為L14724(5’-GACTTGAAAAACCACCGTTG-3’)和H15915(5’-CTCCGATCTCCGGATTACAAGAC-3’)。PCR反應總體積30 μL，包括：10×Buffer 3 μL，dNTPs 1.5 μL(10 mmol·L-1)，引物各1 μL(10 μmol·L-1)，TaqDNA聚合酶0.5 U。擴增程序為：94 ℃ 5 min；94 ℃ 45 s，54 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，35個循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，送上海生工生物公司完成純化和序列測定。

3.2 長江中上游干支流大鱗馬口魚的種群遺傳分化

李站長沉吟片刻，說，罰五萬！何澤說，太高了吧？這樹頂多價值五萬。李站長撲哧一聲笑了，說何澤呀何澤，你騙別人也不能騙我這個林學科班生，你那棵金彈子樹少說樹齡也在兩百年之上，當前的市價若低于了二十萬，我把腦殼割下來給你當夜壺。

3.3 長江中上游干支流大鱗馬口魚的譜系生物地理學過程

譜系生物地理學主要依據(jù)基因譜系的空間分布，來推測近緣種間或同種種群間譜系發(fā)生過程及其歷史(Avise，2000)。從大鱗馬口魚的譜系分化情況來看，所有單倍型分化為A和B 2個主要的譜系，其中,譜系A包含老鶴河、任河和清江的單倍型，譜系B包含前河、酉水、郁江等其他幾個種群的單倍型。從地理空間分布來看，譜系A、B的分化體現(xiàn)著東-西譜系分化格局：譜系A的采樣點處于相對較東部的位置，涉及長江中游支流漢江、清江；而譜系B則處于相對較西部的位置，主要涉及長江上游干支流。應用分子鐘理論估計2個譜系的分化大致發(fā)生在早更新世(1.34 Ma，95%HPD：1.03～1.70 Ma)，在這一時期青藏高原劇烈隆起(李吉均，方小敏，1998)。高原的進一步抬升使西高東低的地勢格局更為顯著，而大鱗馬口魚作為一種主動擴散能力不強的小型魚類，可能更容易受到構造運動及水系變動的影響，形成目前的地理分布格局。

值得注意的是，酉水雖隸屬于長江中游沅江水系，但卻與其他上游種群聚類在譜系B中。酉水等分布較東部的采樣點位處我國第二、三級階梯的過渡地帶，這一區(qū)域可能擁有較為復雜的地質歷史和地質環(huán)境，較活躍的地質構造事件可能導致了水系的襲奪變遷，使種群間的交流更加頻繁。從遺傳距離來看，酉水同烏江水系的關系更近，推測由于水系的變遷，酉水上游可能與烏江水系上游曾經存在某種聯(lián)系，從而造成現(xiàn)今這種地理分布格局的形成。

本研究中部分種群地理距離較近，如任河和前河種群，清江和酉水、郁江種群，但是它們分別屬于不同的水系，而且單倍型也屬于不同的譜系：任河與清江屬于譜系A，前河與郁江、酉水屬于譜系B。除前河(17尾)、郁江(26尾)以外，其他地點的樣本數(shù)量均≥30尾，但是沒有譜系A和B的混雜。同時，在這么多的地點中都表現(xiàn)為沒有譜系A和譜系B的混雜。從統(tǒng)計學的理解上說明譜系A和譜系B在目前的地點均不存在混雜。其原因可能是譜系A和譜系B較早出現(xiàn)分化(～1.34 Ma)，此后就沒有再次接觸，從而形成了目前的地理種群結構。這種譜系分化格局與地理空間分布基本一致，即譜系A主要分布在較東部的位置，譜系B主要分布在較西部的位置。

從譜系內部來看，譜系A中2個亞譜系的分化代表了不同水系地理種群的分化，結合其分化時間(～1.10 Ma)，推測這次分化事件同樣受到了這一時期構造運動的影響。譜系B中亞譜系的分化時間為0.19～1.04 Ma，其單倍型多數(shù)沒有按照地理分布聚類，且共享單倍型廣泛存在，同時多數(shù)種群具有較高的單倍型多樣性和核苷酸多樣性水平，這意味著地質事件可能造成不同地理種群間的分化和交流，特別是這一時期經歷了中更新世氣候轉型期(Mid-Pleistocene transition，0.8～1.2 Ma)，冰期-間冰期的更替周期縮短(Chalketal.，2017)，更加頻繁的水位、氣候波動可能造成不同種群間的隔離或再度交流。已有研究表明，青藏高原的隆升和更新世氣候動蕩對淡水魚類的遺傳分化具有重要影響(Gaoetal.，2012；Apriletal.，2013；劉思情等，2013；Chenetal.，2018)。據(jù)此推測，青藏高原的劇烈隆升以及隨之而來的氣候環(huán)境改變在大鱗馬口魚譜系地理格局的形成中起到了關鍵作用。

3.4 長江中上游干支流大鱗馬口魚的種群歷史動態(tài)

Tajima’sD和Fu’sFS是2種常用于推測種群歷史動態(tài)的檢驗，通常以檢驗結果呈顯著負值作為種群擴張的標志。相對而言，F(xiàn)u’sFS檢驗對種群擴張更加敏感(Fu & Li，1993)。本研究中除任河、清江、石阡河和酉水種群外，其他種群的中性檢驗均沒有檢測到種群擴張，但是不顯著的SSD和Hri檢驗結果表示不能拒絕種群擴張模型，并估算出不同地理種群發(fā)生擴張的時間為0.005～0.236 Ma。中性檢驗和錯配分析結果的不一致可能意味著大鱗馬口魚種群歷史相對復雜。

經驗反饋業(yè)務平臺用來實現(xiàn)各類經驗反饋信息的綜合管理，從經驗反饋數(shù)據(jù)的錄入、收集到分析處理、分析評價的完整流程化管理，實現(xiàn)經驗反饋信息及處理流程的規(guī)范化和自動化，實現(xiàn)經驗反饋工作和流程的標準化運作和歸一化管理，增加經驗反饋信息的時效性，確保經驗信息得到有效利用和管理。

大鱗馬口魚各地理種群的歷史動態(tài)隨時間變化的BSP圖顯示，多數(shù)種群在近期經歷了一定程度的擴張。其中青衣江種群擴張時間最早，約0.04 Ma；前河、赤水河種群大致在0.02 Ma擴張；任河、郁江、石阡河種群擴張稍晚，大致在0.01 Ma?？梢园l(fā)現(xiàn)，除前河、赤水河種群外，其他種群擴張的時間剛好與歷史上的暖期或間冰期的時間相對應(崔久之等，2011)。同樣可以觀察到，老鶴河和綦江種群均于0.02 Ma左右經歷了種群收縮，這一時期剛好處于末次冰期；而金沙江宜賓段種群在末次冰期后卻發(fā)生了種群收縮，推測可能與末次冰期后的一次降溫事件有關(新仙女木事件，0.011 7～0.012 9 Ma)。據(jù)此推測，更新世的冰期更迭可能對大鱗馬口魚的種群歷史動態(tài)產生一定影響。

小兒先心病的臨床發(fā)生率較高，約占先天性畸形的28%，患兒常出現(xiàn)反復呼吸道感染、生長發(fā)育受限和消瘦等癥狀，嚴重時可導致缺氧、休克甚至死亡。先心病患兒年齡相對較小，疾病耐受力差，在治療過程中常出現(xiàn)不配合等情況，一定程度上影響治療及預后。

3.5 長江中上游大鱗馬口魚的保護建議

大鱗馬口魚通常是其棲居河段的優(yōu)勢種(王雪，2019)，也是水生生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，對維系整個系統(tǒng)結構的完整和功能的正常發(fā)揮起到了重要作用。本研究結果顯示，長江中上游干流和部分支流的大鱗馬口魚種群整體遺傳多樣性較高，種質資源情況比較健康；老鶴河、任河和清江種群與其他種群遺傳分化較大，為了防止遺傳資源的喪失，在遺傳資源保護管理中應作為進化顯著單元予以關注和保護。

致謝：感謝中國科學院水生生物研究所的劉飛、常濤、胡華明在樣本采集方面提供的幫助；感謝陳重光先生和衛(wèi)叔楊先生提供部分樣本；感謝中國科學院水生生物研究所的王雪、楊萍、唐瑞在實驗及數(shù)據(jù)分析方面提供的幫助。