趙建鵬

（河南省三門(mén)峽市靈寶市第一人民醫(yī)院 靈寶472500）

乳腺癌作為一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，主要見(jiàn)于女性，我國(guó)北方的發(fā)病率多于南方。該病的病因包括飲酒、空氣污染、遺傳、吸煙等因素。近些年來(lái)，雖然治療水平取得了長(zhǎng)足進(jìn)步，但乳腺癌5年生存率仍無(wú)顯著提高。究其原因主要是因?yàn)槭中g(shù)以及化療后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致了乳腺癌的治療失敗，尤其處于進(jìn)展期的患者更容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)的現(xiàn)象。在進(jìn)行根治術(shù)后，大約有一半患者因?yàn)榘l(fā)生轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)而死亡[1]。因此想要延長(zhǎng)患者的生存期及改善患者的預(yù)后，就需要在促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)機(jī)制方面進(jìn)行著重研究?，F(xiàn)代研究表明，腫瘤細(xì)胞的增殖最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的形成，其發(fā)生和發(fā)展會(huì)涉及多環(huán)節(jié)、多中心以及多通路[2]。目前，腫瘤組織學(xué)分類(lèi)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、原發(fā)腫瘤大小等為傳統(tǒng)上判斷乳腺癌病情的臨床指標(biāo)，但其具有異形的局限性，無(wú)法滿(mǎn)足對(duì)患者預(yù)后判斷的要求[3]。P53是目前研究最為深入的抑癌基因，由393個(gè)氨基酸構(gòu)成，按結(jié)構(gòu)及功能分成轉(zhuǎn)錄激活區(qū)、序列特異性DNA結(jié)合區(qū)、C端寡聚化區(qū)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)，通常情況下上述任何區(qū)域的異常都可導(dǎo)致P53功能失活和細(xì)胞的惡變[4]。本研究采用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)入選病例的乳腺癌組織和癌旁正常組織中P53的表達(dá)情況，并結(jié)合乳腺癌患者主要的臨床病理特征與隨訪(fǎng)參數(shù)，探討乳腺癌P53表達(dá)與預(yù)后生存時(shí)間的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年8月～2019年4月收治的乳腺癌患者120例為研究對(duì)象，患者年齡28～77歲，平均（56.12±3.25）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床診斷為Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者；可進(jìn)行免疫組化研究并保存完好的腫瘤原發(fā)灶蠟塊患者；隨訪(fǎng)資料能夠完整搜集患者；對(duì)本研究知情，自愿參與并簽署知情同意書(shū)患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重臟器損傷者；術(shù)前經(jīng)過(guò)治療患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化法檢測(cè)患者病灶組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本中P53表達(dá)情況。取所有患者的病灶組織標(biāo)本（觀察組）與癌旁組織標(biāo)本（對(duì)照組），組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，于濃度梯度酒精中脫水，二甲苯中浸潤(rùn)觀察組織塊至透明為止。用石蠟Ⅰ（＜60℃，1 h）浸潤(rùn)、石蠟Ⅱ（60℃，2 h）包埋后制成石蠟組織塊，用石蠟切片機(jī)采用5μm厚度連續(xù)切片，常規(guī)制片、封片。試劑來(lái)源：所用試劑P53一抗（兔抗人多克隆抗體）購(gòu)于美國(guó)ProteinTech Group,Inc公司，免疫組化通用試劑盒和顯色劑購(gòu)于武漢博士德生物技術(shù)有限公司，其他常規(guī)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。P53一抗最佳的抗體滴度為1:100，每批染色均設(shè)立對(duì)照組，以PBS代替一抗為陰性空白對(duì)照，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野（×400），對(duì)癌細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，同時(shí)統(tǒng)計(jì)表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，并觀察顯色度。陽(yáng)性強(qiáng)度采用半定量法，按陽(yáng)性細(xì)胞占癌細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)評(píng)分，結(jié)果觀察采用盲法。

1.3 觀察指標(biāo) 患者的隨訪(fǎng)時(shí)間截止到2020年1月1日，記錄患者的生存時(shí)間和生存率，同時(shí)調(diào)查患者的臨床病理特征，包括臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分化、發(fā)病位置、腫瘤大小等。統(tǒng)計(jì)兩組病灶組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本中P53表達(dá)情況。分析P53表達(dá)陽(yáng)性與患者年齡、發(fā)病部位、腫瘤大小、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，預(yù)后生存時(shí)間與P53表達(dá)、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，分析患者預(yù)后生存時(shí)間的影響因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以%表示，行χ2檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析對(duì)各指標(biāo)間相關(guān)性進(jìn)行分析，影響因素采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比 觀察組P53表達(dá)陽(yáng)性率為10.00%，顯著低于對(duì)照組的72.50%（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

2.2 不同病理特征乳腺癌患者的P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比 在觀察組中，年齡≥54歲與年齡＜54歲、發(fā)病位置左側(cè)與發(fā)病位置右側(cè)、腫瘤直徑≥4 cm與腫瘤直徑＜4 cm患者P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；組織學(xué)高/中分化與低分化、臨床分期Ⅰ期與Ⅱ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同病理特征乳腺癌患者的P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比

2.3 隨訪(fǎng)情況 所有患者隨訪(fǎng)時(shí)間截至2020年1月1日，生存105例，死亡15例，生存率為87.50%，平均生存時(shí)間為（23.21±0.24）個(gè)月。

2.4 預(yù)后生存時(shí)間與臨床特征、P53表達(dá)的相關(guān)性分析 在觀察組中，Spearman相關(guān)分析顯示，預(yù)后生存時(shí)間與P53表達(dá)、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都存在相關(guān)性（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 乳腺癌患者預(yù)后生存時(shí)間與臨床特征、P53表達(dá)的相關(guān)性分析（n=120）

2.5 預(yù)后生存時(shí)間影響因素分析 此次分析的因變量為預(yù)后生存時(shí)間，自變量選擇P53表達(dá)（陽(yáng)性=1，陰性=0）、臨床分期（Ⅰ期=1，Ⅱ期=0）、組織學(xué)分化（低分化=1，高/中分化=0）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（是=1，否=0）等。Logistic回歸分析顯示，影響預(yù)后生存時(shí)間的重要因素包括P53表達(dá)、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 影響乳腺癌患者預(yù)后生存時(shí)間的多因素分析（n=120）

3 討論

乳腺癌在臨床上較為常見(jiàn)，屬于惡性腫瘤之一?；颊呤中g(shù)之后，可能會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，這是一個(gè)多步驟且多因素的病理過(guò)程，具有一定的復(fù)雜性。腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)與不同的作用因素相關(guān)，同時(shí)也存在多種不同的基因參與。乳腺癌具有相對(duì)較長(zhǎng)的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，其原因?yàn)榧?xì)胞非正常增殖，在增殖過(guò)程較快時(shí)，腫瘤的局部組織會(huì)發(fā)生缺氧并產(chǎn)生一種供能與耗能之間的不平衡狀態(tài)。

P53在胃癌、食管癌、白血病、肺癌等人類(lèi)多種惡性腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)或缺失，而這種表達(dá)下調(diào)或缺失的現(xiàn)象是由于mRNA表達(dá)減少或穩(wěn)定性下降有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組的P53表達(dá)陽(yáng)性率為10.00%，顯著低于對(duì)照組的72.50%（P＜0.05）。在觀察組中，年齡≥54歲與年齡＜54歲，發(fā)病位置左側(cè)與發(fā)病位置右側(cè)，腫瘤直徑≥4 cm與腫瘤直徑＜4 cm患者P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；組織學(xué)高/中分化與低分化，臨床分期Ⅰ期與Ⅱ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者P53表達(dá)陽(yáng)性率對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在P53基因的抗腫瘤機(jī)制中，P53可引起G0/G1期和G2/M期阻滯；P53與參與DNA合成，修復(fù)及凋亡的蛋白結(jié)合，形成蛋白復(fù)合體調(diào)節(jié)凋亡的發(fā)生。當(dāng)前也有研究顯示，P53具有抑制腫瘤分化與浸潤(rùn)發(fā)展的作用，也可抑制腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。乳腺癌細(xì)胞的增殖是一個(gè)抑癌基因失活、癌基因激活的過(guò)程，已有研究顯示P53在病理狀態(tài)下，其表達(dá)會(huì)被抑制，這能夠?qū)?xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解進(jìn)行調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)方式可以是直接調(diào)節(jié)，也可以是間接調(diào)節(jié)，從而參與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)過(guò)程，從而對(duì)乳腺癌患者的病理特征發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。此外，研究還表明在接受了化療的乳腺癌患者中，細(xì)胞核內(nèi)P53蛋白的積聚與局部治療失敗有強(qiáng)相關(guān)性，P53的表達(dá)水平還可幫助預(yù)測(cè)乳腺癌化療的耐藥性[5]。

本研究所有患者隨訪(fǎng)時(shí)間截至2020年1月1日，生存105例，死亡15例，生存率為87.50%，平均生存時(shí)間為（23.21±0.24）個(gè)月；Spearman相關(guān)分析顯示，預(yù)后生存時(shí)間與P53表達(dá)、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都存在相關(guān)性（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，影響預(yù)后生存時(shí)間的重要因素包括P53表達(dá)、臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等（P＜0.05）。從機(jī)制上分析，P53作為一種潛在的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在人類(lèi)不同腫瘤中，水平存在差異[6]。若P53發(fā)生一定的變化，能夠通過(guò)微管促使形成癌細(xì)胞染色體非整倍性，這在腫瘤發(fā)展方面具有一定促進(jìn)作用。P53表達(dá)下降還可以進(jìn)一步通過(guò)調(diào)控并加強(qiáng)MMP-13蛋白在癌組織中的過(guò)表達(dá)或激活，增強(qiáng)了癌細(xì)胞破壞和降解周?chē)?xì)胞外基質(zhì)以及基底膜的能力，更加有助于促進(jìn)癌組織的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[7]。

綜上所述，乳腺癌患者P53呈現(xiàn)表達(dá)較低的情況，與患者的臨床分期、組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等存在顯著的相關(guān)性，也會(huì)對(duì)預(yù)后生存時(shí)間的重要因素產(chǎn)生影響。