溫日葵 江炎章

貧血是由多種原因引起外周血的血紅蛋白(Hb)濃度、紅細(xì)胞計數(shù)和血細(xì)胞壓積(HCT)低于正常人參考值下限的一種癥狀；一般可分為正常細(xì)胞性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血和大細(xì)胞性貧血。貧血在兒童期是常見病,可使兒童生長發(fā)育減慢甚至智力低下［1］。小細(xì)胞低色素性貧血是因為Hb、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)以及平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)四項檢測結(jié)果同時下降的一種疾病,其中分別以缺鐵性貧血(IDA)和地中海貧血最為常見［2］。缺鐵性貧血是由于體內(nèi)缺乏鐵元素或者是體內(nèi)鐵元素的利用障礙,從而導(dǎo)致人體內(nèi)Hb 的生成不足而出現(xiàn)的貧血,根據(jù)相關(guān)研究提示［3］,我國兒童是缺鐵性貧血的高發(fā)人群,因為兒童處于生長發(fā)育期,體內(nèi)的新陳代謝快,在成長過程中所需的營養(yǎng)物質(zhì)包括鐵元素較成人的要多,所以缺鐵性貧血在我國也是重要防治疾病之一。地中海貧血是一種遺傳性疾病。其因是合成血紅蛋白的珠蛋白鏈減少或缺失導(dǎo)致血紅蛋白結(jié)構(gòu)異常而導(dǎo)致的貧血［4］。為了解本地區(qū)小細(xì)胞低色素性貧血兒童的主要病因,為臨床診斷和治療提供科學(xué)準(zhǔn)確的依據(jù),作者選取2019 年1 月～2020 年10 月期間在本院進行體檢的小細(xì)胞低色素性貧血兒童進行地中海貧血基因和鐵蛋白聯(lián)合檢測,對檢測結(jié)果分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月～2020 年10 月期間60例在本院進行體檢診斷為小細(xì)胞低色素性貧血患兒,小細(xì)胞低色素癥的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：血常規(guī)檢測平均紅細(xì)胞體積<80 fl,平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量<26 pg,平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度<320 g/L。

1.2 儀器 抽EDTA 抗凝血3 ml,采用血常規(guī)分析儀DxH800 檢測血常規(guī)；于干燥管抽3 ml 靜脈血,采用羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀E411 檢測鐵蛋白；抽枸椽酸鹽抗凝血3 ml,采用分子雜交儀檢測地中海貧血基因標(biāo)本。

1.4 檢測原理

1.4.1 鐵蛋白 電化學(xué)發(fā)光雙抗體夾心法。

1.4.2 地中海貧血基因 PCR-反向點雜交法。根據(jù)α 鏈珠蛋白基因(α2和α1)突變區(qū)域序列特點,在序列保守區(qū)設(shè)計3 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標(biāo)記,用于檢測3 種缺失型α-地中海貧血基因突變(-SEA、-α3.7 和-α4.2)；根據(jù)α 鏈珠蛋白基因(α2)突變區(qū)域序列特點,在序列保守區(qū)設(shè)計1 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標(biāo)記用于檢測3 種非缺失型α-地中海貧血基因突變(αCSα、αQSα 和αWSα)；根據(jù)β 鏈珠蛋白基因基因突變區(qū)域序列特點,在序列保守區(qū)設(shè)計2 對高度特異的引物且5′端用生物素進行標(biāo)記,用于檢測17 種β-地中海貧血基因突變(41-42M、-28M、654M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM)。根據(jù)檢測位點堿基差異,按照堿基互補配對原則,設(shè)計特異性識別某種基因型的寡核苷酸探針組合,分別固定在尼龍膜的特定位置上,制成檢測膜條。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴增產(chǎn)物與探針通過分子雜交反應(yīng)及顯色反應(yīng),觀察檢測膜條上各位點信號的有無(信號為藍(lán)色斑點),判斷該探針是否與PCR 產(chǎn)物雜交,從而確定待檢樣品基因型。

1.5 觀察指標(biāo) 分析小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因以及小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型。

2 結(jié)果

2.1 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因分析 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒單純地中海貧血有35 例,陽性率為58.3%,單純?nèi)辫F性貧血有12 例,陽性率為20.0%,地中海貧血合并缺鐵性貧血有9 例,陽性率為15.0%,其他類型有4 例,陽性率為6.7%。見表1。

表1 60 例小細(xì)胞低色素性貧血患兒病因分析(n,%)

2.2 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒(單純地中海貧血35 例,地中海貧血合并缺鐵性貧血9 例),其中主要基因型：α-地中海貧血有32 例,主要基因型為αα/--SEA,有26 例(59.1%)；β-地中海貧血有12 例,主要基因型為41-42M/N,有5 例(11.4%)。見表2。

表2 44 例小細(xì)胞低色素性地中海貧血患兒基因型分析(n,%)

3 討論

缺鐵性貧血和地中海貧血的血常規(guī)結(jié)果常常相似,兩者都為小細(xì)胞低色素貧血,且臨床上患兒較為多見。地中海貧血又名海洋性貧血,因為最初發(fā)患者多為地中海沿岸民族的原因。本病是因為遺傳的珠蛋白基因缺失,使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈合成缺如或不足所導(dǎo)致的貧血。臨床上常見分為α-地中海貧血和β-地中海貧血,其中α-地中海貧血可分為輕型α-地中海貧血：又包括靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型,靜止型僅有輕度α 鏈合成減少,α/β 鏈合成比約為0.9,一般無臨床癥狀；標(biāo)準(zhǔn)型有輕度貧血或紅細(xì)胞形態(tài)異常,α/β 鏈合成比約為0.6。中間型α-地中海貧血又稱為血紅蛋白H 病,因為缺失3 個α 基因,臨床上表現(xiàn)為輕度或中度貧血,伴有肝脾腫大、黃疸。重型α-地貧又稱為胎兒水腫綜合征,因為缺失4 個α 基因,無α 鏈合成,胎兒容易造成死胎或流產(chǎn)。β-地貧也可分輕型β 地貧,β 鏈與α 鏈比率為0.5,一般其他臨床無臨床癥狀和貧血；重型β 地貧的β 與α 兩鏈比率為0～0.3,一般有貧血、黃疸、肝脾腫大等臨床癥狀,患兒易發(fā)生感染和出血,常常會合并發(fā)生心肌炎、膽結(jié)石、下肢潰瘍性損害,容易夭折；中間型β 地貧嚴(yán)重程度介于輕型和重型之間［6-8］。地貧是人類單基因遺傳病發(fā)病率最高的其中一種,夫妻雙方如果都是輕型地中海貧血患者,都可能生出中型或重型的地中海貧血患兒［9］。根據(jù)相關(guān)研究所示,我國α 地中海貧血者的基因型普遍以--SEA、-α3.7 和-α4.2 位點缺失多見［10］。孕婦如果懷有重型地貧胎兒,很可能會發(fā)生胎兒死于宮內(nèi),或早產(chǎn)或流產(chǎn)［8］,重型地中海貧血患兒需終生輸血,中間型地貧患者多無勞動力或勞動力下降［11］,所以減少中、重型地中海貧血患兒的出生會減輕家庭的不少負(fù)擔(dān)。

缺鐵性貧血是體內(nèi)一種慢性漸進性缺鐵的發(fā)展結(jié)果。缺鐵性貧血早期一般為正常細(xì)胞性貧血,表現(xiàn)為輕度貧血,隨著病程的進展,體內(nèi)貯存鐵慢慢消耗殆盡,紅細(xì)胞和血紅蛋白會進一步下降,出現(xiàn)明顯的小細(xì)胞低色素性貧血,呈典型的缺鐵性貧血［12］。缺鐵性貧血臨床癥狀表現(xiàn)為部分患者可出現(xiàn)異食癖,患兒會出現(xiàn)生長發(fā)育遲緩、易激動、注意力不集中、智力低下［13］,指甲缺乏光澤、脆薄、易裂,出現(xiàn)口腔炎和舌炎,還有少部分患者會有輕度的脾腫大。從上述的缺鐵性貧血癥狀和危害可知,缺鐵性貧血的防治在兒童中也不容輕視。

本研究顯示,本地區(qū)小細(xì)胞低色素性貧血兒童其中單純地中海貧血基因攜帶率為58.0%,以α 地中海貧血為主,其中以αα/--SEA 基因型為主；單純?nèi)辫F性貧血占20%,地中海貧血合并缺鐵性貧血占15.0%,可見缺鐵性貧血的兒童比例也不低。地中海貧血在我國廣東(地中海貧血陽性率11.07%)、廣西、四川多見［14］,且云浮處于廣東省經(jīng)濟欠發(fā)達(dá)地區(qū),有很大部分人們的生活質(zhì)量和意識不高,兒童期的小細(xì)胞低色素性貧血情況不被重視,會對兒童的成長造成不可逆的傷害,因此營養(yǎng)性貧血如缺鐵性貧血等也不容忽視［15］。地中海貧血患者體內(nèi)紅細(xì)胞的生存期比正常人紅細(xì)胞要短,在患者體內(nèi)呈慢性溶血狀態(tài),地貧患者體內(nèi)鐵元素含量是超標(biāo)的,需要進行排鐵的治療,以前的舊觀點認(rèn)為,體查地中海貧血基因確診是地中海貧血患者后,一般都不做鐵蛋白的檢查,認(rèn)為該患者不會缺鐵的。其實結(jié)果不然,因為很多兒童生長快,所需的營養(yǎng)物質(zhì)多,還因為有不少兒童會偏食,營養(yǎng)不均衡,同樣會導(dǎo)致缺鐵的。

綜上所述,小細(xì)胞低色素性貧血會對患兒的生長發(fā)育和生活學(xué)習(xí)造成這么多的危害,通過地中海貧血基因和鐵蛋白的同時檢測,幫助臨床找出小細(xì)胞低色素性貧血兒童的正確病因,對癥治療,讓祖國的花朵有一個健康快樂的童年。