劉 靜 趙宏霞 吳華梅 江 利 劉彥霞 韓 克

泰康仙林鼓樓醫(yī)院(南京,210046)

上皮性卵巢癌(EOC)惡性程度較高，對(duì)符合手術(shù)指征的患者及時(shí)手術(shù)切除是延長(zhǎng)生存時(shí)間的最可靠方法[1-2]。但是接受手術(shù)治療患者，術(shù)后生存結(jié)局存在明顯差異，推測(cè)存在某些影響患者治療預(yù)后的關(guān)鍵因素。miR-122-5p已被發(fā)現(xiàn)在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色[3]，且基礎(chǔ)研究[4]指出miR-122-5p可通過(guò)靶向ERCC1而抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)行為，但關(guān)于miR-122-5p與EOC治療預(yù)后的影響研究目前開(kāi)展極少。本文探討EOC組織中miR-122-5p的表達(dá)對(duì)患者病情及治療預(yù)后的影響，為EOC發(fā)病機(jī)制、術(shù)后死亡風(fēng)險(xiǎn)分層、治療方案制定等提供指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年8月-2017年8月在本院接受手術(shù)治療的EOC患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)中病理診斷為EOC，符合國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)、世界衛(wèi)生組織制定的分類分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；②順利完成手術(shù)、無(wú)嚴(yán)重手術(shù)相關(guān)并發(fā)癥；③配合治療、病例資料完整；④本人簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受放化療、激素治療等；②術(shù)前存在嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、其他原發(fā)惡性腫瘤性疾病等可能影響EOC患者治療結(jié)局的其他情況；③拒絕隨訪或者隨訪過(guò)程失聯(lián)病例。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 miR-122-5p測(cè)定

術(shù)中取患者腫瘤組織、癌旁正常組織(距離腫瘤邊緣3cm的正常卵巢組織)標(biāo)本，置液氮罐中凍存。取腫瘤組織、癌旁正常組織標(biāo)本各100mg，液氮碾磨法碾磨成粉末后加入1ml Trizol裂解液，參照說(shuō)明書(shū)步驟提取總RNA。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄RNA獲得cDNA，內(nèi)參為U6。在熒光定量PCR儀上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，引物序列如下：U6上游引物5’-TGCGAACGATGCAAGCTGA-3’，下游引物5’-GCGAATGAGCGTGCGAAG-3’； miR-122-5p上游引物5’-CTAGAGCTAAGCGAGAG-3’，下游引物5’-TGCAAGCTGAGCGGTAAG。反應(yīng)體系包括：引物及探針Mix 1μl、TaqMan 通用混合物溶液10μl、cDNA 1.33μl、無(wú)核酸酶的水7.67μl。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10min、95℃變性15s、60℃復(fù)性60s，上述過(guò)程共計(jì)45個(gè)循環(huán)。2﹣△△Ct法計(jì)算miR-122-5p相對(duì)表達(dá)量。

1.3 病例資料收集及隨訪

查閱所有入組患者的病例資料采集基本人口學(xué)及臨床病理特征信息，包括年齡、組織類型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。術(shù)后24h開(kāi)始隨訪，通過(guò)電話、門(mén)診復(fù)查等方式進(jìn)行，隨訪截止日期為2020年8月1日或該時(shí)間點(diǎn)前患者死亡時(shí)間。記錄患者的總生存時(shí)間(術(shù)后24h至患者死亡時(shí)間)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料

共納入118例，年齡(56.7±12.8)歲(39～77歲)，術(shù)前體質(zhì)指數(shù)(BMI)(23.7±1.9)kg/m2(21～26 kg/m2)。

2.2 miR-122-5p表達(dá)水平與生存結(jié)局及ROC曲線

患者腫瘤組織中miR-122-5p(0.31±0.08)低于癌旁正常組織(0.40±0.11)(P<0.05)。隨訪118例患者，隨訪期內(nèi)死亡49例歸于死亡組，余69例歸于存活組。死亡組腫瘤組織中miR-122-5p(0.26±0.06)低于存活組(0.34±0.11)(P<0.05)，癌旁正常組織中miR-122-5p(0.41±0.08)與存活組(0.40±0.09)無(wú)差異(P>0.05)。ROC曲線顯示，腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)水平預(yù)測(cè)術(shù)后隨訪期死亡的最佳截?cái)嘀禐?.30，AUC為0.808(95%CI 0.738～0.891)，敏感度68.1%、特異度75.5%。見(jiàn)圖1(封三)。

2.3 miR-122-5p表達(dá)水平與預(yù)后生存

根據(jù)ROC曲線最佳截?cái)嘀祵⑺腥虢M的EOC患者分為高表達(dá)組(miR-122-5p>0.30)64例、低表達(dá)組(miR-122-5p≤0.30)54例。高表達(dá)組術(shù)后生存結(jié)局優(yōu)于低表達(dá)組(P<0.05)。見(jiàn)圖2(封三)。

2.4 miR-122-5p表達(dá)水平與臨床病理特征

高表達(dá)組、低表達(dá)組患者的年齡、組織類型、分化程度分布無(wú)差異(P>0.05)，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分布有差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同miR-122-5p表達(dá)水平患者臨床病理特征比較[例(%)]

2.5 影響EOC患者術(shù)后生存多因素Cox回歸分析

以EOC患者術(shù)后生存結(jié)局作為因變量(0=生存，1=死亡)，單因素分析中有差異的指標(biāo)納入多因素Cox回歸分析。發(fā)現(xiàn)，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EOC患者術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 影響EOC患者術(shù)后生存的多因素分析

3 討論

miR-122-5p是一種重要的microRNA類型，其表達(dá)改變可影響下游靶基因及相關(guān)信號(hào)通路的功能變化，進(jìn)而引發(fā)一系列疾病的發(fā)生發(fā)展。已有研究指出miR-122-5p與消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生相關(guān)，如Matsuzaki[5]研究指出miR-122-5p可能通過(guò)影響氧化應(yīng)激參與肝損傷發(fā)生；PEI[6]發(fā)現(xiàn)miR-122-5p在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)并發(fā)揮腫瘤抑制作用。卵巢癌的發(fā)生發(fā)展也涉及較多microRNA，機(jī)體miR-122-5p水平是否對(duì)卵巢癌病情及預(yù)后產(chǎn)生直接影響目前尚無(wú)明確結(jié)論。本文中發(fā)現(xiàn)EOC患者腫瘤組織中存在miR-122-5p異常低表達(dá)，這與苗培田[4]結(jié)論吻合；術(shù)后死亡組患者腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)水平較低，推測(cè)miR-122-5p異?？赡苡绊懥薊OC患者的術(shù)后生存結(jié)局。

本文中經(jīng)ROC曲線，miR-122-5p預(yù)測(cè)EOC患者術(shù)后生存結(jié)局的最佳截?cái)嘀?，并以此?duì)EOC患者分組發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)組術(shù)后生存結(jié)局優(yōu)于低表達(dá)組。提示miR-122-5p低表達(dá)可能對(duì)EOC患者術(shù)后生存情況產(chǎn)生一定負(fù)面影響，但miR-122-5p低表達(dá)產(chǎn)生影響的具體機(jī)制不明，還有待后續(xù)深入研究。

本研究進(jìn)一步探討EOC患者臨床病理特征與腫瘤組織中miR-122-5p表達(dá)關(guān)系發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等與miR-122-5p表達(dá)相關(guān)，主要表現(xiàn)為miR-122-5p低表達(dá)者FIGO分期較高、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等概率更高。提示miR-122-5p表達(dá)減少甚至缺失可能導(dǎo)致EOC患者臨床病理特征不理想、病情較為嚴(yán)重，術(shù)后復(fù)發(fā)及死亡風(fēng)險(xiǎn)增高。分析EOC患者隨訪期死亡的影響因素發(fā)現(xiàn)，miR-122-5p≤0.30、FIGO分期Ⅲ期、深肌層浸潤(rùn)、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均是EOC患者術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。miR-122-5p異常低表達(dá)可能由于解除了對(duì)癌細(xì)胞惡性行為的抑制作用，導(dǎo)致術(shù)后殘留微小腫瘤灶迅速增殖并導(dǎo)致局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[7-9]。腫瘤分期較高、浸潤(rùn)較深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已在諸多國(guó)內(nèi)外研究[10-12]中被明確是惡性腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，本文結(jié)果與其吻合。

綜上所述，在可接受手術(shù)治療的EOC患者中，miR-122-5p低表達(dá)是患者病情嚴(yán)重、術(shù)后生存結(jié)局不佳的重要影響因素。該分析可能為臨床工作在EOC治療方案的選擇等臨床實(shí)踐方面提供一定幫助。