曹蓉蓉，王文金，嚴(yán)筱楠，朱艷華

（榆林市藥品檢驗(yàn)所，陜西榆林 719000）

麻杏止咳糖漿收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第二十冊(cè)［1］，是由麻黃、苦杏仁、甘草（炙）、石膏等4 味藥材加工制成的復(fù)方制劑。麻黃作為麻杏止咳糖漿中的主藥，有宣肺、解表之功效，與石膏相配，既能平喘，又能瀉熱；苦杏仁降肺氣，助麻黃清肺平喘；甘草具有益氣中和、生津止渴作用［2］。麻杏止咳糖漿現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有麻黃(鹽酸麻黃堿)薄層色譜鑒別法，沒(méi)有其它指標(biāo)性成分的質(zhì)控方法，不利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。目前有人［3–6］使用高效液相色譜法測(cè)定麻黃止咳糖漿中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷等單一成分或幾種有效成分的研究，但對(duì)指標(biāo)成分進(jìn)行定量測(cè)定，或?qū)ζ渌煞诌M(jìn)行定性鑒別的研究鮮有報(bào)道。筆者在文獻(xiàn)［3–17］方法的基礎(chǔ)上，建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定麻杏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種成分，并采用薄層色譜法定性鑒別甘草，為麻杏止咳糖漿的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260型，配DAD檢測(cè)器，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司。

電子天平：（1）BP190S型，感量為0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；（2）MS205DU型，感量為0.01 mg，梅特勒–托利多儀器（上海）有限公司。

超聲波清洗器：AS11000398型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司。

自動(dòng)純水蒸餾器：LHP–18–2型，重慶力德高端水處理設(shè)備研發(fā)有限公司。

硅膠G板：美國(guó)Merck公司。

麻杏止咳糖漿樣品：批號(hào)分別為1806001、1806002、1806003，陜西德?？抵扑幱邢薰?。

甘草陰性樣品：陜西德福康制藥有限公司。

麻黃、苦杏仁陰性樣品：陜西德福康制藥有限公司。

鹽酸麻黃堿對(duì)照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為100%，批號(hào)為171241–201809，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為99.8%，批號(hào)為171237–201510，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

苦杏仁苷對(duì)照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為88.2%，批號(hào)為110820–201808，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甘草酸單胺鹽對(duì)照品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為96.2%，批號(hào)為110731–202021，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甘草對(duì)照藥材：批號(hào)為120904–201620，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈：色譜純，德國(guó)西格瑪奧德里奇有限公司。

磷酸：優(yōu)級(jí)純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 混合對(duì)照品溶液配制

取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷各10.00 mg于同一50 mL容量瓶中，用色譜流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線，搖勻，即得各組分質(zhì)量濃度均為0.20 mg／mL的混合對(duì)照品溶液。

1.3 色譜條件

色 譜 柱：Phenyl-Ether柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈–0.02 mol／L磷酸溶液（含0.2%的三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）(體積比為5∶95），流量為1.0 mL／min；進(jìn)樣體積：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；理論板數(shù)：按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

1.4 樣品處理

精密量取麻杏止咳糖漿樣品10 mL于50 mL容量瓶中，加入色譜流動(dòng)相30 mL，超聲45 min，加入色譜流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線，搖勻，微孔濾膜濾過(guò)，作為樣品溶液。

1.5 陰性樣品處理辦法

按照麻杏止咳糖漿處方工藝和處方量，制備未加甘草的對(duì)照樣品和未加麻黃、苦杏仁的陰性樣品，按樣品溶液的制備方法分別制成不含甘草、麻黃、苦杏仁的陰性樣品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 麻杏止咳糖漿中甘草成分的鑒別

參照中國(guó)藥典2015年版一部［7］中的提取方法和展開(kāi)條件，原方法加熱提取時(shí)間較長(zhǎng)，提取次數(shù)較多，造成試劑用量大、耗時(shí)長(zhǎng)，故本試驗(yàn)通過(guò)使用不同提取溶劑，將加熱回流改為超聲提取，減少正丁醇提取次數(shù)，建立和優(yōu)化的薄層色譜預(yù)處理方法，操作更加簡(jiǎn)便。具體方法：分別取3個(gè)批號(hào)的麻杏止咳糖漿20 mL，加乙醚40 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，棄去醚液，向藥渣中加入甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，將濾液蒸干，向殘?jiān)屑铀?0 mL使之溶解，用正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，棄去洗滌液，將正丁醇提取液蒸干，向殘?jiān)屑尤爰状? mL使之溶解，作為樣品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取甘草酸單銨鹽對(duì)照品，用甲醇溶解并稀釋，制成質(zhì)量濃度為2 mg／mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015年版通則0502），吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于用1%氫氧化鈉溶液制備的同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯–甲酸–冰乙酸–水（體積比為15∶1∶1∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置于紫外光燈（365 nm）下檢視。樣品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置顯示相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照樣品在此位置則沒(méi)有斑點(diǎn)。該方法色譜斑點(diǎn)清晰、專屬性較強(qiáng)，可作為本品中甘草的鑒別。

2.2 定量分析

2.2.1 色譜柱

參考中國(guó)藥典中麻黃含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)參考文獻(xiàn)［7–9］，分別考察了ZORBAX Eclipse XDB–C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Phenyl-Ether色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）兩種色譜柱。試驗(yàn)結(jié)果表明：在同樣使用乙腈和0.02 mol／L磷酸溶液（含0.2%的三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）的流動(dòng)相體系之下，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種成分在Phenyl-Ether色譜柱中可達(dá)到最佳分離效果，故本試驗(yàn)使用Phenyl-Ether色譜柱。

2.2.2 色譜流動(dòng)相

分別采用不同體積比的甲醇–水、乙腈–水為流動(dòng)相對(duì)樣品進(jìn)行分離，分離度均不能滿足要求。參考文獻(xiàn)［4，13，17］，分別選擇乙晴–0.1%磷酸溶液（體積比為8∶92）、甲醇–水–乙酸（體積比為70∶28∶2）、乙腈–甲醇–0.1%磷酸溶液(體積比為4.5∶9∶86.5)、乙腈–0.02 mol／L磷酸（含0.2%的三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（體積比為5∶95）4種流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，采用第4種流動(dòng)相時(shí)，加入三乙胺使色譜峰形得到改善，拖尾減少，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種成分色譜峰得到良好分離，分離度大于1.5，且保留時(shí)間適中，基線平穩(wěn)，陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾峰出現(xiàn)。故選擇乙腈–0.02 mol／L磷酸溶液（含0.2%的三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0） （體積比為5∶95）為色譜流動(dòng)相。

2.2.3 提取溶劑

鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種有效成分在不同溶劑內(nèi)溶解性有很大的不同。分別以0.1%磷酸［3］、甲醇［4］、氨–乙醚［5］、鹽酸–甲醇［12］，70%甲醇［16］、無(wú)水乙醇、色譜流動(dòng)相為提取溶劑，對(duì)麻杏止咳糖漿樣品進(jìn)行提取試驗(yàn)，結(jié)果表明，采用色譜流動(dòng)相提取樣品時(shí)，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種成分色譜峰與相鄰峰可完全分離，且提取率較高，因此選擇色譜流動(dòng)相為提取溶劑。

2.2.4 樣品處理方法

利用色譜流動(dòng)相作為提取溶劑，分別采取超聲15、30、45、60 min，加熱回流30、60、90 min，超聲30 min加回流30 min和不處理等方式進(jìn)行樣品處理試驗(yàn)，經(jīng)含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，超聲提取45 min后提取含量較高且不再增大，且超聲提取方式比加熱回流操作簡(jiǎn)單，提取時(shí)間更短，故選擇超聲提取45 min。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷對(duì)照品溶液，麻杏止咳糖漿樣品溶液，及甘草、麻黃、苦杏仁的陰性樣品溶液各適量，按1.3色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，各色譜峰分離良好，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算大于3 000，陰性樣品在鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷對(duì)照品相應(yīng)色譜峰位置未檢出色譜峰。表明本方法系統(tǒng)適用性及專屬性均良好。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 樣品、對(duì)照品、陰性樣品溶液色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取1.2所配制的混合對(duì)照品溶液5、10、15、20、25、30 μL，在1.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣質(zhì)量（X，μg）為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)色譜峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷的線性方程分別為Y=242.76X+25.63 3，Y=256.39X+12.727，Y=103.34X–19.34，線 性 相 關(guān) 系數(shù)分別為0.999 9、0.999 6、0.999 2，線性范圍分別為1.056～6.336 μg，1.003～6.018 μg，0.889～5.334 μg。

2.5 方法精密度

取同一批號(hào)麻杏止咳糖漿樣品6份（批號(hào)：1806001），按1.4方法制備成樣品溶液，在1.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果列于表1。由表1可知，樣品中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.5%、1.8%、1.6%，表明本方法重復(fù)性精密度良好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取新制備的麻杏止咳糖漿樣品溶液（批號(hào)：1806001），于溶液配制后0、2、4、6、8 h按照本方法測(cè)定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿和苦杏仁苷，記錄色譜峰面積，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果列于表2。由表2可知，樣品溶液配制8 h內(nèi)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿和苦杏仁苷測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.1%、2.0%、1.6%，表明溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

取10 mL麻杏止咳糖漿樣品（批號(hào)：1806001），按照本法測(cè)得鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷的含量，加入適量對(duì)照品溶液，按照1.4方法處理后再次測(cè)定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果列于表3。

表3 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿和苦杏仁苷的回收率分別100.7%、98.5%、104.4%，表明本方法準(zhǔn)確度較高。

3 結(jié)語(yǔ)

建立了麻杏止咳糖漿中甘草的定性鑒別方法及鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷3種成分的定量檢測(cè)方法，建立的方法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確，可為麻杏止咳糖漿的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。