庾建中 王靜儀 袁泳锨 黃梓慧 何建芳 李妤玲 梁遠(yuǎn)秋

乳腺癌(breast cancer)是起源于乳腺上皮的一種惡性腫瘤［1］。隨著近幾年其發(fā)病率的不斷上升已成為女性群體中發(fā)病率最高的腫瘤,且死亡率也居高不下,嚴(yán)重威脅著女性的身心健康［2］。目前,臨床對(duì)于乳腺癌治療方案的選擇和預(yù)后評(píng)估大多取決于乳腺癌的分子分型,包括LuminalA、LuminalB、HER-2 過(guò)表達(dá)型以及三陰性乳腺癌等亞型［3］。近年來(lái),隨著臨床治療方案的不斷更新,大部分非三陰性乳腺癌均獲得了較為理想的治療效果,但在三陰性乳腺癌的治療中,其臨床效果往往較差,嚴(yán)重影響著患者的生存與預(yù)后［4］。因此,為三陰性乳腺癌患者尋找更為有效的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物及新的治療靶點(diǎn)已成為臨床關(guān)注的重要課題。據(jù)相關(guān)研究顯示,在三陰性乳腺癌患者的腫瘤組織及淋巴細(xì)胞中存在高表達(dá)的PD-L1［5］,對(duì)此,本文就PD-L1 在不同分子分型乳腺癌中的表達(dá)及其與病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析,以期為乳腺癌患者的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015 年1 月～2017 年12 月收治的115 例乳腺癌患者作為觀察組,其中三陰性乳腺癌45 例、非三陰性乳腺癌70 例；另選取同期40 例非乳腺癌患者作為對(duì)照組。兩組患者的乳腺樣本均經(jīng)手術(shù)切除病理證實(shí)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 觀察組 ①組織學(xué)分型均為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；②樣本信息完整；③在手術(shù)標(biāo)本獲取前未接受過(guò)靶向藥物治療；④有足夠的組織標(biāo)本可以用于免疫組織化學(xué)染色。

1.2.2 對(duì)照組 ①組織學(xué)分型均為良性病變(乳腺增生病、乳腺纖維腺瘤等)；②樣本信息完整；③有足夠的組織標(biāo)本可用于免疫組織化學(xué)染色。

1.3 檢測(cè)方法 采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)PD-L1蛋白的表達(dá)：通過(guò)石蠟包埋將樣本制成切片(4 μm),烤干后給予抗原修復(fù)、脫臘、沖洗,隨后滴加相應(yīng)抗體,并于陰性對(duì)照上滴加PBS 緩沖液,放入孵育盒內(nèi),室溫孵育50 min 后,按順序?qū)⑶衅饛埐捎肞BS 緩沖液進(jìn)行沖洗,并插回玻片架,隨后逐一滴加二抗,于孵育盒中室溫孵育30 min。完畢后,將切片逐一取出,滴加已配好的DAB 顯色液,顯色2～5 min 后通過(guò)顯微鏡適時(shí)終止顯色,沖洗后給予蘇木素染液復(fù)染1 min,隨后進(jìn)行脫水、透明、封片,在顯微鏡下進(jìn)行閱片。

依據(jù)多個(gè)視野范圍中的顯色細(xì)胞占比及其染色深淺進(jìn)行分級(jí)計(jì)分判斷：①顯色細(xì)胞占比：0 分：<5%；1 分：5%～25%；2 分：26%～50%；3 分：51%～75%；4 分：>75%。②染色深淺：0 分：無(wú)顯色；1 分：淺黃色；2 分：棕色；3 分：深褐色。若顯色細(xì)胞占比與染色深淺計(jì)分乘積>1,則表示陽(yáng)性,若≤1 則表示陰性［6］。

1.4 觀察指標(biāo) ①比較兩組患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)情況；②比較不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1表達(dá)情況；③比較不同分子分型乳腺癌患者的生存率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)情況比較 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,觀察組三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率為35.6%(16/45),非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率為18.6%(14/70),對(duì)照組患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)為0。兩組患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中,三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率高于非三陰性乳腺癌患者及對(duì)照組,非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)情況比較(n,%)

2.2 不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1 表達(dá)情況比較 不同分子分型、PR 表達(dá)狀態(tài)、陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)、TNM 分期乳腺癌患者的PD-L1 表達(dá)情況比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同年齡、腫瘤大小、ER表達(dá)狀態(tài)乳腺癌患者的PD-L1 表達(dá)情況比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理特征乳腺癌患者的PD-L1 表達(dá)情況比較(n)

2.3 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。非三陰性乳腺癌LuminalA 型患者的生存率高于三陰性乳腺癌患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較(n,%)

3 討論

PD-L1 是程序性死亡蛋白-1(PD-1)的重要配體之一［7］,可結(jié)合細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)及 B/T-淋巴細(xì)胞衰減因子(BTLA)等介導(dǎo)對(duì)免疫系統(tǒng)表達(dá)抑制信號(hào),具有抑制T 淋巴細(xì)胞活性、下調(diào)免疫應(yīng)答等的作用,已成為免疫檢查的重要部分［8-10］。通常情況下,PD-L1 多表達(dá)于腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)的巨噬細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞中,可與PD-1 產(chǎn)生相互作用,以此抑制CD8+T 細(xì)胞的效應(yīng)及功能［11］。據(jù)相關(guān)報(bào)道顯示,PD-L1 在腫瘤組織中的過(guò)度表達(dá)往往可導(dǎo)致不良的預(yù)后效果,PD-1/PD-L1 這一信號(hào)通路的激活可促使腫瘤出現(xiàn)免疫逃逸的現(xiàn)象,從而引起遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的情況出現(xiàn)［12-14］。因此,通過(guò)PD-1/PD-L1 信號(hào)通路的阻斷,可有效促使腫瘤繼續(xù)處于T 細(xì)胞的免疫監(jiān)視中,繼而殺滅腫瘤細(xì)胞,從而保證機(jī)體免疫系統(tǒng)的長(zhǎng)久穩(wěn)定［15,16］。目前,多項(xiàng)臨床研究顯示,針對(duì)PD-L1高表達(dá)的惡性腫瘤,采用阻斷PD-1/PD-L1 通路抑制劑進(jìn)行治療具有確切的臨床療效［17］。因此,通過(guò)腫瘤組織中PD-L1 表達(dá)的檢測(cè),利用PD-1/PD-L1 通路阻斷這一治療方式對(duì)乳腺癌等腫瘤疾病的臨床治療具有積極的應(yīng)用價(jià)值［18］。

本研究對(duì)PD-L1 在不同分型乳腺癌中的表達(dá)及其與病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行了探究,結(jié)果顯示：三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率高于非三陰性乳腺癌患者及對(duì)照組,非三陰性乳腺癌患者的PD-L1 陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同分子分型、PR 表達(dá)狀態(tài)、陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)、TNM 分期乳腺癌患者的PD-L1 表達(dá)情況比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同分子分型乳腺癌患者的生存率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。非三陰性乳腺癌LuminalA 型患者的生存率95.7%高于三陰性乳腺癌患者的71.1%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述,PD-L1 在不同分子分型乳腺癌中的表達(dá)存在明顯的差異,其中三陰性乳腺癌中的PD-L1 表達(dá)率最高；且PD-L1 的表達(dá)與乳腺癌患者的分子分型、PR 表達(dá)狀態(tài)、陽(yáng)性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)以及TNM 分期有關(guān)。臨床可將此作為乳腺癌治療的參考,為乳腺癌患者,尤其是目前缺乏后續(xù)治療手段的三陰性乳腺癌患者尋找更為可靠的療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物及治療方法。