張慧蕓 張省委 韓冉

急性上呼吸道感染(acute upper respiratory infection，AURI)是鼻腔、咽、喉急性炎癥的一個(gè)概稱，發(fā)病率在急性傳染病中占首位[1]。在發(fā)展中國家所有急性死亡病例中因急性上呼吸道感染導(dǎo)致的死亡占75%，其中80%以上的病例感染源自于病毒感染[2]。據(jù)報(bào)道，急性上呼吸道感染是學(xué)齡前兒童(0～7歲)死亡的第二大主因，成為威脅全球范圍內(nèi)兒童健康的主要原因[3]。目前國內(nèi)外醫(yī)務(wù)人員對急性呼吸道病毒感染的研究主要集中在住院患兒中，對門診就診的患兒研究相對較少[4]。因此，本研究對468例AURI患兒9種常見呼吸道病毒病原體，即甲型呼吸道合胞病毒(spiratory syncytial virus a，RSVA)、乙型呼吸道合胞病毒(spiratory syncytial virus b，RSVB)、腺病毒(denovirus，ADV)、鼻病毒(human rhinovirus，RH)、甲型流感病毒(nfluenza virus a，F(xiàn)luA)、乙型流感病毒(nfluenza virus b，F(xiàn)luB)、冠狀病毒229E(onavirus，COV-229E)、腸道病毒(enterovirus，EV)、副流感病毒1～3型(Parainfluenzavirus，hPIVs)的感染現(xiàn)狀進(jìn)行回顧性分析，旨在探討我市兒童急性上呼吸道感染的病毒病原體構(gòu)成及其流行特征，并分析呼吸道感染的病毒病原學(xué)在不同人群、不同年齡、不同氣候等因素中的差異[5]。為急性上呼吸道病毒感染早期快速、準(zhǔn)確的診斷在實(shí)驗(yàn)室檢查治療上提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 調(diào)查對象 選取2018年1月至2019年1月北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院門診就診的0～7歲的AURI患兒468例，其中男259例，女209例；年齡(4.95±1.21)歲。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》(第7版)[6]中關(guān)于急性上呼吸道感染的診斷依據(jù)；(2)急性就診，病程<3 d；(3)均有不同程度的發(fā)熱；(4)就診原因?yàn)椋簢娞?、流涕、咳嗽、咽痛等，部分患兒伴有咽部充血、淋巴結(jié)腫大、扁桃體腫大等；(5)肺部聽診無啰音，胸片檢查正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并心肝腎等重大疾病者；(2)拒絕本次研究者。

1.3 方法 對門診就診的468例AURI患兒的鼻咽拭子采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法行呼吸道病毒檢測實(shí)驗(yàn)。首先應(yīng)用德國Qiagen公司生產(chǎn)的Qube核酸提取儀與核酸提取試劑盒Rneasy Mini Kitcat 74014對呼吸道病毒核酸進(jìn)行提??；其次應(yīng)用美國thermo公司生產(chǎn)的擴(kuò)增儀與江蘇默樂生物公司生產(chǎn)的多重核酸呼吸道病毒核酸檢測試劑盒對呼吸道病毒核酸進(jìn)行檢測。檢測9種病毒包括：RSVA、RSVB、ADV、RH、FluA、FluB、COV-229E、EV、hPIVs。循環(huán)條件、反應(yīng)體系、結(jié)果判斷讀均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 單一與多種病原體感染情況 468例學(xué)齡前兒童AURI患兒總陽性數(shù)為267例，總陽性率為57.05%。單一感染陽性例數(shù)230例，陽性率為49.15%；多種感染陽性例數(shù)37例，陽性率為7.90%，未檢測到3種以上病毒混合感染。見表1。

表1 AURI患兒急性上呼吸道單一與多種病原體感染情況 n=468

2.2 不同性別陽性檢出結(jié)果分析 男患兒陽性檢出率64.48%明顯高于女患兒(47.85%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同性別陽性檢出結(jié)果分析

2.3 不同年齡陽性檢出結(jié)果分析 陽性檢出率由高到低依次為4～7歲(占61.68%)、1～3歲(占59.56%)、<1歲(占39.47%)，不同病原體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且<1歲RSVA陽性檢出率最高，1～3歲EV陽性檢出率最高，4～7歲FluA陽性檢出率最高，且在各個(gè)年齡段均有FluA檢出。見表3。

2.4 不同季節(jié)陽性檢出結(jié)果分析 不同季節(jié)病毒總陽性檢出率由高到低依次為夏季、秋季、冬季、春季，不同病原體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。春季、夏季、秋季均以EV為主，陽性率依次為25.30%、36.00%、39.03%，以秋季最高；冬季以FluA為主，陽性率為36.84%。EV、FluA在不同季節(jié)陽性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同季節(jié)陽性檢出結(jié)果分析 n=468

2.5 不同月份陽性檢出結(jié)果分析 上呼吸道總檢出率無差異(P>0.05)，但不同月份檢出的病毒種類不同，1月份FluA含量最多(61例)，9月份EV含量最多(27例)。EV基本每個(gè)月份都出現(xiàn)。見表5。

表5 不同月份陽性檢出結(jié)果分析 n=468

3 討論

因兒童免疫系統(tǒng)及呼吸道系統(tǒng)生理結(jié)構(gòu)尚不完善，極易發(fā)生急性呼吸道感染，病原體主要以病毒為主[7]。臨床檢測病毒感染的方法常見的有：免疫熒光法、血清實(shí)驗(yàn)室診斷、病毒培養(yǎng)、分子生物學(xué)方法。Lokida等[8]報(bào)道，免疫熒光法與血清實(shí)驗(yàn)室診斷敏感度、特異度差；Hematian[9]報(bào)道，病毒培養(yǎng)需要很長的時(shí)間而無法滿足快速診斷的臨床需求；而分子生物學(xué)方法因操作簡單、快速與準(zhǔn)確的特點(diǎn)而受到越來越高醫(yī)務(wù)工作者的關(guān)注與推廣。分子生物學(xué)方法包括：RT-PCR、PCR、熒光定量PCR技術(shù)與多重PCR技術(shù)。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測9種呼吸道感染病毒病原體，為急性上呼吸道病毒感染早期快速、準(zhǔn)確的診斷提供了依據(jù)。

本研究468例學(xué)齡前兒童AURI患兒總陽性數(shù)為267例，總陽性率為57.05%。與喬靜等[10]報(bào)道的AURI患兒總陽性率為57.8%，但與舒靜等[11]報(bào)道的59.3%、齊英等[12]報(bào)道的62.1%不一致，可能與環(huán)境、氣候、地域有關(guān)。本研究單一感染陽性率為49.3%，高于林健生等[13]報(bào)道的30.96%，可能與不同研究對象及研究方法有關(guān)。本研究混合感染陽性率7.8%，但低于林健生等[13]報(bào)道的4.57%，可能與地域及研究方法有關(guān)。本研究檢出率結(jié)果可以看出，我市學(xué)齡前兒童急性上呼吸道感染的病毒病原體主要以FluA、ADV、EV為主。未檢測到3種以上病毒混合感染。由表2結(jié)果可知，男患兒陽性檢出率明顯高于女患兒，與林健生等報(bào)道不一致，可能與研究樣本量小有關(guān)。表3結(jié)果可以看出，隨著年齡的增長，陽性檢出率呈升高趨勢，其中<1歲RSVA陽性檢出率最高，1～3歲EV陽性檢出率最高，4～7歲FluA陽性檢出率最高。這與Góes等[14]報(bào)道的各年齡組病毒陽性檢出不完全一致，可能與方法因素有關(guān)。由表4可知，病毒病原體與季節(jié)變化有著密切的聯(lián)系。秋季以EV最高，冬季以FluA為主，與Wen 等[15]報(bào)道基本相似，而且發(fā)現(xiàn)ADV、RH病毒在四季均有檢出，基本呈散發(fā)，無明顯季節(jié)差異。由表5可知，1月份FluA含量最多，9月份EV含量最多。這提示不同月份檢出的病毒種類不同。本研究雖在一定程度上反映了我市學(xué)齡前兒童急性上呼吸道感染病原譜的現(xiàn)狀及流行特征，但也存在著不足，樣本量小，來源單一，檢測病毒病原體方法單一，觀察的時(shí)間短，所以日后應(yīng)進(jìn)行多中心大樣本，多方法，長時(shí)間的流行病學(xué)研究調(diào)查，使我市的急性上呼吸道感染的流行情況更為準(zhǔn)確與可靠。

綜上所述，本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)FluA是學(xué)齡前兒童誘發(fā)急性上呼吸道感染的主要病毒病原體，女性患兒檢出率高于男性患兒，發(fā)病年齡主要集中在4～7歲，冬季以FluA為主，秋季以EV為主。