余海軍 王茜

摘要 水生動物是一類主要生活于水中的動物類群，其具有種類多樣、分布廣泛、復(fù)雜難辨等特點，但是對于水產(chǎn)動物的物種鑒定長期以來一直困擾著相關(guān)方面的專家和學(xué)者。隨著DNA條形碼技術(shù)的提出，其已被成功地應(yīng)用于水生動物的物種鑒定。整理總結(jié)了國內(nèi)外使用DNA條形碼在水生動物物種鑒定中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞 水生動物;DNA條形碼;物種鑒定;應(yīng)用

中圖分類號 S 917.4? 文獻標(biāo)識碼 A? 文章編號 0517-6611（2021）16-0001-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.16.001?? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Application of DNA Barcoding for Species Identification in Aquatic Animal

YU Hai-jun1，2， WANG Qian2

（1.Center of Animal Husbandry and Fisheries， Bijiang Agriculture and Rural Affairs Bureau， Tongren，Guizhou 554300;2. Key Laboratory of Aquatic-Ecology and Aquaculture of Tianjin， College of Fishery， Tianjin Agricultural University， Tianjin 300384）

Abstract Aquatic animals are a group of animals that mainly live in water， with the characteristics of diverse species，wide distribution， complex and difficult to distinguish. However， the identification of aquatic animal species has long troubled experts and scholars in related fields.With the advancement of DNA barcoding technology， it has been successfully applied to species identification of aquatic animals.This study summarized the application of DNA barcodes in the identification of aquatic animal species at home and abroad.

Key words Aquatic animal;DNA barcodes;Species identification;Application

中國是世界上內(nèi)陸水域面積最大的國家之一，內(nèi)陸水域面積約2 700萬hm2，占土地總面積的2.8%;其中江河面積約為1 200萬hm2，湖泊面積約為800萬hm2，水庫8萬余座。江河、湖泊及水庫等既是漁業(yè)生產(chǎn)的捕撈場所，又是增殖、養(yǎng)殖的基地，內(nèi)陸水域可供漁業(yè)養(yǎng)殖的面積約為560萬hm2，從而構(gòu)成了中國水生動物種質(zhì)資源豐富、魚類棲息環(huán)境多樣、物種多樣性高等一系列特點。由于大量特有魚類資源野生種群瀕危且水產(chǎn)養(yǎng)殖品種繁多，導(dǎo)致水產(chǎn)市場混亂，常出現(xiàn)魚龍混雜、以壞充好的現(xiàn)象[1]。為此，需要一種快速、簡便、高效的鑒定方法，快速定位瀕危物種，并及時采取保護措施。

雖然國內(nèi)有關(guān)水生動物的研究在近年來層出不窮，且不斷得到國外相關(guān)學(xué)者的認(rèn)可，但是較國際研究水平，該類群研究還是相對薄弱，原因在于國內(nèi)形態(tài)學(xué)鑒定的缺陷，而且大多數(shù)傳統(tǒng)分類學(xué)家因年齡等關(guān)系均已退出相關(guān)研究[2]。由于缺乏基礎(chǔ)研究，在相當(dāng)長的時期內(nèi)，國內(nèi)對于水生動物缺乏準(zhǔn)確的種類鑒定能力，同時也作為一種制約因素嚴(yán)重阻礙了與之相關(guān)的水產(chǎn)養(yǎng)殖、漁業(yè)資源、環(huán)境生物學(xué)等其他學(xué)科的研究和發(fā)展。

總而言之，國內(nèi)水生動物研究工作者要面對的工作任重而道遠，還有大量艱苦的基礎(chǔ)研究任務(wù)需要完成，并需要更多的研究人員參與;目的是為生物科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)和環(huán)境科學(xué)等學(xué)科提供有效且可信的科研資料，而且這些研究成果必將有益于中國漁業(yè)資源的合理開發(fā)利用以及為中國和國際水生動物研究的深入交流奠定基礎(chǔ)。為此，筆者在現(xiàn)有文獻的基礎(chǔ)上，對水生動物物種鑒定的研究現(xiàn)狀進行綜述。

1 DNA條形碼簡介

DNA條形碼[3-4]最簡單的定義是從基因組中標(biāo)準(zhǔn)部分提取一個或幾個相對較短的基因序列，用于識別物種。其與形態(tài)學(xué)鑒定相比，優(yōu)勢表現(xiàn)在：不受制于物種雌雄和不同生命階段的影響，不受表型可塑性和遺傳可變性的影響[5];可以鑒定一些群體中的隱存分類單元，并能快速且可靠的識別所有生命形式的物種層次，包括動物、植物、真菌、微生物;因而可利用其對物種進行有效鑒別。DNA條形碼由Hebert于2003年首次提出，提出之后發(fā)展迅速，現(xiàn)已成功用于分類鑒定和生物多樣性評估;在論證物種群落組成、食物鏈和種內(nèi)遺傳變異方面也有所研究[6-8];同時也扮演著生物安全和淡水生態(tài)監(jiān)測中一個不可缺少的角色[9-12]。

在線粒體基因中，細胞色素氧化酶亞單位I（COI）是分子量較大、保守且存在變異的基因[13-15];據(jù)王茜[16]所述，COI基因不適合用于分類階元較高的科、亞科及族間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究，而適用于屬、種及種下階元的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。其次，COI基因易被通用引物擴增，很少有外源基因插入或基因缺失[17]，具有高突變率[18];Hebert等[4]通過分析動物界11門物種超過13 320條序列，結(jié)果支持COI作為DNA條形碼分子標(biāo)記基因。因此Hebert等[19]選取COI基因中658對堿基對（bp）的短DNA序列，作為一個實際化、標(biāo)準(zhǔn)化的動物DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)序列。

2 DNA條形碼在魚類物種鑒定中的應(yīng)用

魚類是一類廣泛分布于全球各種水體中的低等脊椎動物，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的魚類約32 000種。其在水系生態(tài)系統(tǒng)中扮演著不可或缺的角色，世界分布廣泛，品種繁多，只依據(jù)外部形態(tài)特征對其進行準(zhǔn)確鑒別存在一定的難度。近年來，隨著分子生物技術(shù)的不斷發(fā)展，分子系統(tǒng)學(xué)在魚類系統(tǒng)學(xué)領(lǐng)域也得到了廣泛的應(yīng)用，其中DNA條形碼就在魚類的分類鑒定中發(fā)揮著重要作用。柳淑芳等[20]通過DNA條形碼對石首魚科19屬30種進行了系統(tǒng)分類研究，結(jié)果證明了DNA條形碼能有效對石首魚科魚類進行物種鑒定，同時提出了將其用于石首魚科的屬、種分類單元系統(tǒng)發(fā)育的探討。馬春艷等[21]采用COI基因作為DNA條形碼分子標(biāo)記，對棱鳀屬6種魚類進行系統(tǒng)分類研究，結(jié)果證明了DNA條形碼能對棱鳀屬魚類進行有效的物種鑒定。柳淑芳等[22]對鲉形目8科12屬13種進行了DNA條形碼分析，結(jié)果表明DNA條形碼用于鲉科魚類鑒定具有一定的可行性。張稚蘭等[23]基于DNA條形碼技術(shù)對蛇鰻科7屬10種進行了分類鑒定研究，結(jié)果表明DNA條形碼可以有效鑒定蛇鰻科魚類。唐楚林等[24]通過對中國沿海19個地點11種笛鯛屬魚類73個樣本進行DNA條形碼分析，表明DNA條形碼技術(shù)能夠?qū)Φ氧爩俳^大部分魚類進行有效的區(qū)分。賈程豪等[25]對中國大陸近海菖鲉屬魚類新記錄種三色菖鲉（Sebastiscus tertius）進行DNA條形碼研究，結(jié)果顯示該種單獨聚為一支，與形態(tài)學(xué)鑒定其為新記錄種的研究結(jié)果相符。王楠等[26]基于DNA條形碼技術(shù)對17種市區(qū)售鮭科魚進行物種檢測，結(jié)果證實了DNA條形碼技術(shù)可用于鮭科魚類的物種鑒別。劉紅艷等[27]通過對鰍科魚類3亞科18屬61種進行DNA條形碼研究，探討其在鰍科魚類物種鑒定中的有效性，結(jié)果顯示COI條形碼可以鑒定鰍科魚類75.41%的物種。

3 DNA條形碼在甲殼類物種鑒定中的應(yīng)用

甲殼類動物為水生動物的主要類群之一，在淡水中和陸地上均有分布。目前，基于DNA條形碼技術(shù)對甲殼類動物進行物種分類鑒定的研究較為普遍。Bucklin等[28]基于COI基因?qū)?0種磷蝦進行DNA條形碼分析，結(jié)果表明其能夠有效地鑒定磷蝦類物種。Radulovici等[29]對甲殼動物39科60屬87種進行DNA條形碼分析，結(jié)果顯示95%的甲殼類物種能通過DNA條形碼顯著區(qū)分，同時發(fā)現(xiàn)有4個種類的種內(nèi)遺傳距離較高（3.78%～13.60%），推斷可能出現(xiàn)隱種。Costa等[30]采用COI基因?qū)讱游?3目150個物種進行DNA條形碼研究，發(fā)現(xiàn)其條形碼結(jié)果與傳統(tǒng)形態(tài)分類結(jié)果一致，據(jù)此認(rèn)為DNA條形碼可作為甲殼動物物種鑒別的有效手段。白俊等[31]通過對秦嶺山脈地區(qū)華溪蟹屬（Sinopotamon）淡水蟹進行DNA條形碼研究，結(jié)果顯示DNA條形碼能準(zhǔn)確鑒別光澤華溪蟹指名亞種（S.davididavidi）、蘭氏華溪蟹（S.lansi）、長江華溪蟹指名亞種（S.yangtsekiense）、凹肢華溪蟹（S.depressum）和福建華溪蟹（S.fukienense）等物種。王娜泠[32]利用DNA條形碼技術(shù)對浙江沿岸常見的6種蟹類70個個體進行DNA條形碼研究，結(jié)果表明DNA條形碼能夠準(zhǔn)確鑒定研究中的6種蟹類。徐武杰[33]運用DNA條形碼對鄱陽湖流域華溪蟹屬淡水蟹類進行分類鑒定，結(jié)果顯示DNA條形碼可作為華溪蟹屬淡水蟹類物種鑒定的輔助分類工具。原帥[34]使用COI基因?qū)讱游?個類群89個個體進行DNA條形碼研究，結(jié)果證明了DNA條形碼在甲殼綱物種鑒定中具有可行性。

4 DNA條形碼在貝類物種鑒定中的應(yīng)用

貝類屬于軟體動物，世界分布十分廣泛，種類豐富，目前已知有1.1萬余種[35]，許多貝類生物由于外形差異不顯著，且能隨著環(huán)境的誘導(dǎo)而出現(xiàn)趨同進化的現(xiàn)象，從而難以區(qū)別[36]。為此，有些學(xué)者將DNA條形碼技術(shù)應(yīng)用于貝類的分類鑒定。鄒山梅[37]運用DNA條形碼技術(shù)對中國沿海骨螺科17個分類比較混亂的種類進行物種鑒定分析，結(jié)果顯示DNA條形碼技術(shù)能有效區(qū)分所有研究的種類。王琳楠等[38]基于COI基因?qū)χ袊睾５貐^(qū)簾蛤目4科5屬6種進行DNA條形碼研究，研究結(jié)果為將DNA條形碼技術(shù)應(yīng)用于簾蛤目貝類的物種鑒定中提供了一定的依據(jù)。蘇金薈[39]基于COI基因作為DNA條形碼的分子標(biāo)記對中國蚌科14屬41種進行研究，結(jié)果表明將COI基因作為DNA條形碼標(biāo)記有利于中國蚌科的物種鑒定。吳彪等[40]選用COI基因?qū)煾蚰?2種進行DNA條形碼分析，結(jié)果顯示DNA條形碼與物種形態(tài)特征匹配的成功率為87.9%。張曉潔等[41]運用DNA條形碼技術(shù)對中國沿海蜑螺科貝類3屬7種進行物種鑒定研究，結(jié)果顯示種內(nèi)遺傳差異均小于種間遺傳差異，即存在明顯的條形碼間隙，表明DNA條形碼能有效鑒定蜑螺科貝類物種。張國武等[42]利用DNA條形碼技術(shù)對新疆地區(qū)采集的21種淡水貝類進行分類鑒定。

5 DNA條形碼在其他水生動物物種鑒定中的應(yīng)用

在其他水生動物物種鑒定中也有一些關(guān)于DNA條形碼的報道。葉朝陽等[43]基于COI基因?qū)旝M目動物9科26屬45種進行DNA條形碼分析，結(jié)果表明利用條形碼技術(shù)鑒定龜鱉目物種具有可行性。律迎春[44]利用DNA條形碼分析海參群體，發(fā)現(xiàn)海參的種間遺傳距離明顯大于種內(nèi)遺傳距離，表明DNA條形碼能對海參種類進行分類鑒定。張珰妮等[45]以COI基因作為DNA條形碼對北部灣北部的水螅水母類2亞綱5目13科19屬28種進行了有效的物種鑒定。

6 DNA條形碼的不足

DNA條形碼鑒定成功率的高低決定其是否能高效鑒別物種，其鑒定成功率很大程度上取決于DNA條形碼空白區(qū)（DNA barcoding gap）的存在，即種內(nèi)和種間遺傳距離的差異;如果二者存在很大交叉范圍（overlap），則鑒定成功率會降低[46-48]。Hebert等[49]基于對鳥類的研究，提出10倍的平均遺傳距離可以作為最大種內(nèi)變異的閾值，并提議將此閾值作為一個通用標(biāo)準(zhǔn);但已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)DNA條形碼應(yīng)用于同科的不同類群時，其產(chǎn)生的閾值存在較大差異而無法統(tǒng)一[50-51];導(dǎo)致這樣的結(jié)果據(jù)推斷可能與以下原因有關(guān)，即某個種群內(nèi)的物種豐富且遺傳多樣性高[52]，引起種內(nèi)和種間遺傳距離出現(xiàn)重疊[48];或者DNA條形碼空白區(qū)邊界模糊不清[53]。為此，Meier等[54]通過研究提出一個觀點，即物種閾值不應(yīng)該是一個給定的數(shù)值，而應(yīng)根據(jù)不同類群來對其進行合理劃定。綜上所述，在進行DNA條形碼研究時，應(yīng)根據(jù)其研究的類群來分析其閾值，而非人為規(guī)定一個閾值用于界定所有的水生動物。

7 展望

DNA條形碼的問世，推動了物種快速鑒定的可行度。盡管DNA條形碼在新種的鑒定以及隱種的發(fā)現(xiàn)上有顯著優(yōu)勢，但是如果否定物種自身的形態(tài)特征，以及生態(tài)環(huán)境改變而發(fā)生的局部變異等相關(guān)因素，完全依靠條形碼對物種進行鑒定和分類，仍然也會造成很多潛在的問題。此外，用于DNA條形碼的標(biāo)記基因為線粒體基因COI，其具有母性遺傳的特點，如果某些類群中存在隱性基因（Nucler mitochondrial DNAS）[48]，就會導(dǎo)致分子鑒定中出現(xiàn)偏差，從而影響最終的鑒定結(jié)果?？傮w來說，只有將DNA條形碼技術(shù)與形態(tài)學(xué)研究結(jié)合起來，才能對水生動物達到快速、精確、高效、科學(xué)的鑒定。

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