◎ 趙 飛

（遼寧省檢驗檢測認證中心，遼寧 沈陽 110000）

測量不確定度評定是按照實際檢測過程和相關(guān)信息對檢測結(jié)果的分散性進行評估的一種方式[1]。測量不確定度可以客觀的評價檢測數(shù)據(jù)，尤其是當檢測數(shù)據(jù)處于臨界值時，進行不確定度評定可以保障檢測結(jié)果的準確性[2]。

玉米赤霉烯酮，又稱F-2毒素，是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物[3-4]。玉米赤霉烯酮易污染玉米、小麥等谷物，尤其是當這些谷物儲存不當時更易被污染[5]。它對神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、腎臟等有毒害作用。因此本文嚴格按照《食品安全國家標準 食品中玉米赤霉烯酮的測定》（GB 5009.209—2016）[6]操作，對其檢測結(jié)果的不確定度進行評估，為實驗室出具的玉米赤霉烯酮檢測結(jié)果的準確性提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 Infinity液相色譜儀（美國安捷倫公司）、ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，0.5 μm，美國安捷倫公司）、BSA224S-CW電子天平（德國賽多利斯公司）、GM200高速粉碎機（德國萊馳公司）、FJ300-SH均質(zhì)器（德國IKA公司）、TTL-DCII氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）、X1R高速冷凍離心機（德國Thermo公司）。

乙腈、甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水，均為一級水；玉米赤霉烯酮標準物質(zhì)（濃度為100.2 μg·mL-1，ROMER公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配制

準確吸取1.0 mL玉米赤霉烯酮標準溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋配制成濃度為1.02 μg·mL-1的標準儲備液，-18 ℃避光保存。用70%乙腈溶液將上述標準儲備液稀釋成系列標準溶液，濃度分別為10 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、75 ng·mL-1和100 ng·mL-1，標準系列溶液臨用現(xiàn)配。

1.2.2 液相色譜參考條件

色 譜 柱：ZORBAX SB-C18色 譜 柱（4.6 mm×150 mm，0.5 μm）；流動相：乙腈∶水=70∶30（v/v）；流速：0.7 mL·min-1；柱溫：30 ℃；激發(fā)波長：274 nm；發(fā)射波長：440 nm；進樣體積：100 μL。

1.2.3 樣品前處理

稱取40 g試樣（精確至0.1 g）于均質(zhì)杯中，加入4 g氯化鈉、100 mL提取液，高速攪拌提取2 min，過濾。移取10 mL濾液于40 mL水中，經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾至澄清；準確移取10 mL上述濾液至免疫親和柱上，直至有部分空氣進入，用5 mL水淋洗柱子一次，再準確加入1.5 mL甲醇洗脫，流速為1滴/s。收集洗脫液于玻璃試管中，55 ℃下氮氣吹干，用1.0 mL流動相溶解殘渣，過膜待測。

1.2.4 數(shù)學模型的建立

樣品中玉米赤霉烯酮的含量按式（1）計算。

式中，ω-樣品中玉米赤霉烯酮的含量，μg·kg-1；ρ-由標準曲線得出的樣品溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，ng·mL-1；ρ0-空白溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，ng·mL-1；V-樣品定容體積，mL；c-系數(shù)；A-試樣溶液中玉米赤霉烯酮的色譜峰面積；AS-標準溶液中玉米赤霉烯酮的色譜峰面積；m-稱樣量，g；P-加標樣品回收率。

2 標準不確定度分量的評定

2.1 標準品引入的不確定度ur(s)

2.1.1 標準品純度引入的不確定度ur(c1)

通過查看玉米赤霉烯酮的標準物質(zhì)證書，得到該標準品相對不確定度U=0.2%，k=2，則其相對標準不確定度為：

2.1.2 標準儲備液配制引入的不確定度ur(c2)

標準儲備液配制中用到1 mL的A級單標線吸量管、10 mL容量瓶，允許誤差分別為±0.008 mL、±0.020 mL，按照均勻分布考慮，取則吸量管和容量瓶引入的不確定度為：

標準溶液配制室的溫度通?？刂圃冢?0±5）℃，20 ℃下乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10-3℃-1，由實驗室溫度變化引起體積變化的相對標準不確定度為：

綜上，標準儲備液配制過程引入的不確定度為：

2.1.3 標準工作液配制引入的不確定度ur(c3)

標準曲線配制過程中各分量的相對合成標準不確定度見表1。

表1 標準曲線配制過程引入的不確定度表

根據(jù)各分量，標準曲線配制過程引入的相對標準不確定度為：

2.1.4 標準曲線擬合引入的不確定度ur(c4)

本方法對濃度依次為10 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、75 ng·mL-1和100 ng·mL-1的玉米赤霉烯酮標準溶液進行測定，以玉米赤霉烯酮標準溶液的濃度為橫坐標，以響應值峰面積為縱坐標進行線性擬合，校準曲線方程見表2，并對陰性樣品加標進行6次平行測定，測得結(jié)果分別為52.0 ng·mL-1、52.6 ng·mL-1、53.2 ng·mL-1、53.3 ng·mL-1、53.0 ng·mL-1和52.8 ng·mL-1，平均值為52.8 ng·mL-1，由標準曲線引入的不確定度可由式（2）計算。

表2 碘化鉀飽和溶液的放置時間對測定結(jié)果的影響表

表2 玉米赤霉烯酮校準曲線表

式中，ur(c4)-曲線擬合引入的不確定度；S(A)-標準溶液待測物質(zhì)信號殘差的標準差；b-校準曲線的斜率；p-樣品溶液檢測次數(shù)（6次）；n-標準溶液的測定次數(shù)（5次）；c0-校準曲線校正后待測樣品中玉米赤霉烯酮濃度的平均值，ng·mL-1；ci-標準曲線各點玉米赤霉烯酮濃度理論值，ng·mL-1；標準曲線各點玉米赤霉烯酮濃度的平均值，ng·mL-1。

其中，S(A)可按公式（3）計算。

式中，n-校準曲線的點數(shù)；Ai-標準溶液各濃度點的峰面積；A-根據(jù)標準曲線算出的理論峰面積。

由校準曲線擬合引入的相對標準不確定度為ur(c4)=0.001 88。

綜上，標準物質(zhì)引入的相對標準不確定度計算為：

2.2 樣品稱量引入的不確定度ur(m)

采用分度為0.1 g的天平稱量待測樣品，該天平在0～50 g稱量范圍內(nèi)的最大允許誤差為±0.05 g，樣品稱量過程引入的相對不確定度為：

2.3 樣品前處理引入的不確定度ur(V)

樣品前處理過程中采用100 mL量筒，其容量允差為±1.0 mL，在（20±5）℃條件下，由此引入的相對標準不確定度為：

移取10 mL提取液的濾液，并加入40 mL水稀釋混勻，10 mL單標線吸量管和50 mL刻度吸量管的容量允差為±0.020 mL、±0.10 mL，稀釋過程引入的相對標準不確定度為：

準確移取10 mL濾液至免疫親和柱上凈化，最后用1.0 mL流動相復溶，10 mL和1 mL單標線吸量管的容量允差為±0.020 mL、±0.007 mL，稀釋過程引入的相對標準不確定度為：

該過程引入的相對合成標準不確定度為：

2.4 重復性引入的不確定度ur(R)

開展加標實驗，添加量為70.0 μg·kg-1，測定值分別為65.0 μg·kg-1、65.7 μg·kg-1、66.5 μg·kg-1、66.6 μg·kg-1、66.2 μg·kg-1和66.0 μg·kg-1，平均值為66.0 μg·kg-1。按照A類評定，應用貝塞爾公式計算，待測物的實際標準偏差為0.590，其相對標準不確定度為：

2.5 回收率引入的不確定度ur(P)

向不含玉米赤霉烯酮的小麥粉中加標，添加量為70.0 μg·kg-1，通過前處理并檢測計算，得回收率分別為92.9%、93.9%、95.0%、95.1%、94.6%和94.3%，平均值為94.3%，按照A類評定應用貝塞爾公式計算待測物的實際標準偏差為0.843%，其標準不確定度為：

用t來檢驗確定平均回收率是否與1有顯著差異，當n=6，自由度為5時，在置信概率為95%時，t0.95(5)=2.571，該回收率下即t＞2.571，需要用回收率對結(jié)果進行修正。回收率引入的相對標準不確定度為：

3 合成不確定度

采用本方法檢測小麥粉中玉米赤霉烯酮的相對標準不確定度為：

玉米赤霉烯酮的合成標準不確定度為：

4 擴展不確定度的計算和檢測結(jié)果的表示

在95%置信概率下，擴展因子k=2，則采用本方法檢測小麥粉中玉米赤霉烯酮的擴展不確定度為U95=k×ur(x)=3.60 μg·kg-1，小麥粉中玉米赤霉烯酮的檢測結(jié)果表示為（66.0±3.60）μg·kg-1；k=2。

5 結(jié)論

采用食品安全國家標準方法測定小麥粉中玉米赤霉烯酮含量，對檢測結(jié)果的不確定度進行評定。通過評定，該實驗中標準曲線配制過程引入的不確定度貢獻最大。因此，在實驗室采用該方法開展玉米赤霉烯酮檢測時，要注意選用合適的量具，并定期開展檢定校準，嚴格控制標準溶液配制室溫度，切實減小不確定度分量，保證檢測數(shù)據(jù)的科學性和合理性。