徐俊 侯玉潔 謝敏 王夢芝 鄔磊 費丹 周瑤敏 胡麗芳

徐俊（1986-），博士，主要從事動物營養(yǎng)與質量安全風險評估研究工作。先后主持國家自然科學基金項目、江西省重點研發(fā)計劃項目及江西省協(xié)同創(chuàng)新項目等國家級或省部級科研項目6項;作為主要成員參與國家自然科學基金項目、國家科技支撐計劃項目及農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質量安全風險評估等科研項目10余項。獲江西省科技進步獎一等獎1項，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質量安全中心科普獎2項;制定地方標準6項;獲授權國家發(fā)明專利3項、實用新型專利5項;獲軟件著作權3項;參編著作5部;在《Journal of Integrative Agriculture》《Asian-Australasian Journal of Animal Sciences》《Frontiers in Microbiology》《動物營養(yǎng)學報》《南方農(nóng)業(yè)學報》《分析試驗室》等科技期刊上發(fā)表學術論文20余篇。

摘要：【目的】探討矮腳黃雞口服利巴韋林后其腸道微生物群落結構多樣性的變化情況，揭示抗病毒藥物對動物腸道健康的影響機制，為科學禁用抗生素及開發(fā)綠色生態(tài)飼料提供理論依據(jù)?！痉椒ā?0日齡矮腳黃雞按10 mg/kg的劑量連續(xù)口服利巴韋林溶液7 d（試驗組），以口服等量生理鹽水為對照組，停藥后收集4 h內(nèi)的新鮮雞糞。通過糞便基因組提取試劑盒提取雞糞總DNA，根據(jù)細菌16S rDNA序列V3～V4可變區(qū)，設計通用引物338F和806R進行PCR擴增，然后參照Illumina MiSeq平臺上機說明進行Illumina MiSeq高通量測序?！窘Y果】從16個矮腳黃雞糞便樣品中共獲得614626條原始序列（Raw reads），經(jīng)質量控制后獲得606862條優(yōu)質序列（Clean reads），按97%的序列相似度進行OTU聚類分析獲得968個OTUs，對照組和試驗組共享624個OTUs。矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度指數(shù)（Chao1和ACE）表現(xiàn)為對照組顯著（P<0.05，下同）或極顯著（P<0.01，下同）高于試驗組;在物種多樣性方面，Simpson指數(shù)的組間差異不顯著（P>0.05），Shannon指數(shù)則表現(xiàn)為試驗組顯著高于對照組。對照組和試驗組的矮腳黃雞糞便樣品均以厚壁菌門、放線菌門、擬桿菌門和變形菌門為優(yōu)勢菌門，相對豐度均在5.00%以上;在屬分類水平上，相對豐度大于0.10%的屬共有108個，對照組和試驗組均以乳桿菌屬相對豐度最高，分別為34.07%和19.26%。矮腳黃雞口服利巴韋林后，腸道中的乳桿菌屬、腸球菌屬、Paeniglutamicibacter、Tessaracoccus、埃希氏桿菌屬、副球菌屬、Gottschalkia及黃桿菌屬呈顯著或極顯著下降趨勢，而擬桿菌屬、葡萄球菌屬、疊球菌屬、Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group、明串珠菌屬及丹毒絲菌屬呈顯著或極顯著上升趨勢。UniFrac-PCoA分析發(fā)現(xiàn)，第一主成分（PC1）和第二主成分（PC2）的貢獻率分別為73.44%和6.99%，對照組和試驗組間的微生物群落結構差異明顯，彼此間可較好地區(qū)分開，但同處理組內(nèi)的8個樣品能很好地聚在一起，菌群相似度很高?！窘Y論】口服利巴韋林會顯著影響矮腳黃雞腸道微生物區(qū)系，改變腸道微生物的穩(wěn)態(tài)結構，進而導致其腸道健康受到損傷。

關鍵詞： 矮腳黃雞;利巴韋林;腸道微生物;豐富度;多樣性;Illumina MiSeq高通量測序

中圖分類號： S831.92? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）05-1139-10

Abstract：【Objective】The structural diversity of the intestinal microbiological community in dwarf yellow chicken after oral ribavirin was discussed， the mechanism of the effects of antiviral drugs on animal intestinal health was revealed， and provided theoretical basis for scientific prohibition on the addition of antibiotics and the development of green ecological feed. 【Method】Dwarf yellow chicken at 90 d were selected as experimental animal， and took ribavirin orally for 7 consecutive d according to the body weight dose of 10 mg/kg （treatment group）， the same amount of normal saline was taken orally as control group. Manure samples were collected within 4 h after the drug stopped.The total chicken manure DNA was extracted from the fecal genome extraction kit， according to bacterial 16S rDNA sequence V3-V4 variable region， common primers 338F and 806R were designed for PCR amplification， then conducted Illumina MiSeq high-throughput sequencing with reference to the on-board Illumina MiSeq platform instructions. 【Result】In total， 614626 raw reads were obtained for the bacterial 16S rRNA genes analysis. After screening these gene sequences with strict criteria， 606862 clean reads were obtained. OTU cluster analysis based on 97% sequence similarity obtained 968 OTUs. Additional-ly， there were 624 OTUs shared between the groups. The intestinal microbiological community richness indexes（Chao1 and ACE） in the control group were significant（P<0.05， the same below） or extremely significant（P<0.01， the same below）? higher than in the treatment group. In species diversity， the Simpson index was not significant between groups（P>0.05），? Shannon index in control group was significantly higher compared to treatment group. At the phylum level， Firmicutes， Actinobacteria， Bacteroidetes and Proteobacteria were the dominant phyla in both groups， with average relative abundance above 5.00%. At the genus level， there were 108 genera accounted for more than 0.10% relative abundance， and Lactobacillus accounted for the highest relative abundance in the control group and the treatment group， which were 34.07% and 19.26% respectively. After oral administration of ribavirin， Lactobacillus， Enterococcus， Paeniglutamicibacter， Tessaracoccus， Escherichia， Paracoccus， Gottschalkia and Flavobacterium significantly or extremely decreased， while Bacteroides， Staphylococcus， Methylosarcina， Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group， Leuconostoc and Erysipelothrix significantly or extremely increased. The UniFrac-PCoA weighted principal coordinate analysis found that the primary component（PC1） and secondary component （PC2） contributed 73.44% and 6.99%， respectively. The microbial community structure difference between the control group and the treatment group was obvious， which could be better separated from each other， but the 8 samples in the treatment group could be well gathered together， and the flora similarity was very high. 【Conclusion】Oral administration of ribavirin can significantly affect the intestinal microflora of dwarf yellow chicken， and change the steady-state structure of the intestinal microorganisms， which can cause the impaired of the intestinal health.

Key words： dwarf yellow chicken; ribavirin; intestinal microflora; richness; diversity; Illumina MiSeq high throughput sequencing

Foundation item：Key Research and Development Project of Jiangxi（20192ACB60004）; Postdoctoral Research Fund of Jiangxi（2015KY43）

0 引言

【研究意義】動物消化道內(nèi)的微生物不僅有助于營養(yǎng)攝取、免疫調(diào)節(jié)及消化道上皮細胞的發(fā)育，還是抵御病原體的天然屏障，對維持宿主健康至關重要（Zoetenal et al.，2004;曾波等，2017）。促生長類抗生素在促進動物生長（Emami et al.，2012）的同時會導致動物腸道微生物群落結構多樣性及其穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變（Vangay et al.，2015;辛可啟等，2020），盡管抗生素的使用主要針對致病菌，但對整個腸道菌群也會產(chǎn)生重要影響（Jernberg et al.，2010;Looft et al.，2014）。因此，研究抗生素對動物胃腸道微生物群落結構的影響，對深入探究動物消化道微生物穩(wěn)態(tài)機理具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】已有研究證實，抗生素可通過亞治療劑量促進動物機體生長，究其原因主要是抗生素能控制胃腸道感染及調(diào)控腸道微生物群落結構（Dibner and Richards，2005;Torok et al.，2011），雖然其作用機制尚未明確，但可確認抗生素是通過重塑腸道微生物多樣性及其相對豐度而發(fā)揮作用，為動物機體的生長營造最佳微生態(tài)環(huán)境（郭鵬等，2017;王歡等，2020）。Dumonceaux等（2006）以維吉尼亞霉素為肉雞生長促進劑添加至飼料中，結果發(fā)現(xiàn)雛雞回腸近端及十二指腸中乳酸桿菌的種類有所增加，即在飼料中添加維吉尼亞霉素會改變?nèi)怆u近端胃腸道的菌群結構。但也有研究報道，在家禽養(yǎng)殖過程中使用抗生素會導致乳酸桿菌的種類減少，且雞腸道菌群結構的變化還會影響其免疫功能和健康狀況（謝全喜等，2012;Lee et al.，2012）。La-ongkhum等（2011）采用PCR-DGGE研究阿維菌素對肉仔雞空腸內(nèi)微生物菌群的影響，發(fā)現(xiàn)阿維菌素可改變腸道中魏斯氏菌屬、糞鏈球菌和嗜酸乳桿菌的含量，降低腸道內(nèi)微生物菌群多樣性。倪江（2013）研究發(fā)現(xiàn)，在嶺南黃肉雞的基礎日糧中分別添加林可霉素、桿菌肽鋅和硫酸粘桿菌素，各處理組肉雞腸道中大腸桿菌、乳酸桿菌及雙歧桿菌的數(shù)量有升有降，而肉雞日增重分別提高5.86%、5.31%和3.73%，故推測抗生素對腸道微生物的影響只是抗生素促生長機理的一部分。Elokil等（2020）研究表明，給京紅雞口服恩諾沙星和地克珠利后其腸道中的微生物組成發(fā)生顯著變化，且停藥后無法恢復到原腸道微生態(tài)結構。針對豬的研究發(fā)現(xiàn)，飼喂抗生素會促使其回腸中的厚壁菌門和放線菌門相對豐度降低，變形菌門相對豐度提高，回腸和糞便中的有益菌屬下降，而有害的條件性致病菌相對豐度增加（高侃等，2016）。Zhang等（2016）研究表明，給斷奶仔豬口服乳酸菌或金霉素后，其空腸、結腸和盲腸的微生物多樣性及組成均不相同，以金霉素組的厚壁菌門和普氏菌屬相對豐度更高。Li等（2020）針對長期使用抗生素的豬腸道微生物群落多樣性進行分析，結果發(fā)現(xiàn)厚壁菌門和擬桿菌門（F/B）比值隨著育肥時間的推移而顯著增加，且變形菌門和纖維桿菌門的相對豐度顯著低于無抗生素組。目前，除了研究在飼料中添加抗生素對動物腸道微生物群落結構的影響外，還有關于注射抗生素對其影響的相關研究（Janczyk et al.，2007;Fleury et al.，2015）。Ruczizka等（2020）在評估注射頭孢噻肟對哺乳仔豬和生長豬糞便微生物群落結構的影響時發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)后12 h注射頭孢噻肟會顯著影響雌、雄性仔豬糞便微生物組成的連續(xù)變化，同時對宿主生產(chǎn)性能造成長期影響?！颈狙芯壳腥朦c】至今，有關抗生素對動物腸道微生物影響的研究主要集中在飼用抗生素方面（倪江和楊維仁，2012;劉穎等，2017;于佳民等，2018），而有關抗病毒藥物對動物腸道微生物群落結構影響的研究鮮見報道。在家禽的養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖戶為降低病毒性疾病帶來的養(yǎng)殖風險，經(jīng)常性使用違禁抗病毒藥物（目前尚未批準的獸用抗病毒藥物）預防或治療病毒性疾病，尤其是近幾年的風險評估發(fā)現(xiàn)違規(guī)使用利巴韋林現(xiàn)象仍較普遍，是影響家禽產(chǎn)品質量安全的主要因素之一?！緮M解決的關鍵問題】通過Illumina MiSeq高通量測序技術探討矮腳黃雞口服利巴韋林后其腸道微生物群落結構多樣性的變化情況，進一步揭示抗病毒藥物對動物腸道健康的影響機制，為科學禁止添加抗生素及開發(fā)綠色生態(tài)飼料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗動物及其飼養(yǎng)管理

90日齡矮腳黃雞購自江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，共80羽，平均體重1500±50 g，隨機分為2組[對照組（A）和試驗組（B）]，每組8個重復，每個重復5羽。每個重復的矮腳黃雞飼養(yǎng)在同一個雞籠內(nèi)，雞籠底部配有活動托盤用于接收糞便。矮腳黃雞飼喂不含任何藥物的全價配合飼料（由江西省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所自制），飼料配方見表1。

1. 2 試驗方法

參照實際養(yǎng)殖過程中違禁使用利巴韋林的用藥劑量，每天上午8：00按10 mg/kg的劑量給試驗組矮腳黃雞連續(xù)口服利巴韋林溶液7 d，對照組矮腳黃雞口服等量生理鹽水，每天清理托盤倒掉糞便，最后一次給藥后，在托盤上鋪一張消毒薄膜，收集4 h內(nèi)的新鮮雞糞，混勻裝入消毒好的EP管中，立即放入 -80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?。測樣時將雞糞樣品置于冰上解凍，按糞便基因組提取試劑盒說明提取雞糞總DNA（QIAGEN，51504），DNA樣品采用核酸蛋白分析儀（DU640，美國Backman公司）分別測定260和280 nm處的吸光值，并以1.0%瓊脂糖凝膠電泳（DYY-6C電泳儀，北京六一儀器廠）檢測DNA質量。

根據(jù)細菌16S rDNA序列V3～V4可變區(qū)，設計通用引物（338F：5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'和806R：5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'），PCR擴增反應體系20.0 μL：5×PCR Buffer 4.0 μL，338F/806R引物（5 μmol/L）各0.4 μL，dNTP Mix（2.5 mmol/L）2.0 μL，DNA聚合酶0.4 μL，DNA模板10 ng，雙蒸水補足至20.0 μL。擴增程序：95 ℃預變性3 min;95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，進行27個循環(huán);72 ℃延伸10 min，結束后4 ℃保存。PCR擴增產(chǎn)物以2.0%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，使用Axygen DNA膠回收純化試劑盒（Axy Prep DNA Gel Extration kit，AP-GX-500）進行切膠回收純化，經(jīng)Biotek酶標儀（FLX800，美國伯騰儀器有限公司）定量分析后，按標準的Illumina TruSeq DNA文庫制備流程構建Illumina測序文庫，然后參照Illumina MiSeq平臺上機說明進行Barcoded Illumina MiSeq測序。

1. 3 數(shù)據(jù)處理

原始序列（Raw reads）經(jīng)質量控制后得到有效序列（Valid reads），再丟棄長度短于150 bp、含有模糊堿基或引物堿基含2個以上錯配信息、單個堿基重復數(shù)超過6個的序列，即獲得優(yōu)質序列（Clean reads）。參照序列相似度為97%的原則，將Clean reads歸為多個操作分類單元（Operational taxonomic unit，OTU），并進行聚類分析。根據(jù)OTU信息進行腸道微生物群落豐富度及多樣性分析，豐富度采用Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)表示，多樣性采用Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)表示。Shannon指數(shù)越大，說明群落多樣性越高;Simpson指數(shù)越大，則說明群落多樣性越低。在屬分類水平上繪制聚類熱圖，同時對微生物群落進行UniFrac分析，利用獲得的距離矩陣進行PCoA分析和聚類分析，從遺傳距離上判斷不同樣本間的距離，比較不同樣品間的差異性。

1. 4 統(tǒng)計分析

采用Excel 2010進行試驗數(shù)據(jù)整理，并以SPSS 22.0的單因素方差分析（One-way ANOVA）進行顯著性檢驗。

2 結果與分析

2. 1 矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度及其多樣性

Illumina MiSeq高通量測序結果表明，從16個矮腳黃雞糞便樣品中共獲得614626條Raw reads，經(jīng)質量控制后獲得606862條Clean reads，平均每個樣品37929條Clean reads，平均序列長度為442 bp。參照97%的序列相似度進行OTU聚類分析，結果發(fā)現(xiàn)16個矮腳黃雞糞便樣品共產(chǎn)生968個OTUs，其中，對照組樣品的OTU數(shù)目為802個，試驗組樣品的OTU數(shù)目為790個，二者共享624個OTUs（圖1），占總OTU數(shù)目的64.46%;對照組和試驗組樣品的特有OTU數(shù)目分別為178和166個，占總OTU數(shù)目的18.39%和17.15%。說明口服利巴韋林后矮腳黃雞腸道微生物存在一定比例的特有OTU。

矮腳黃雞腸道微生物群落豐富度及其多樣性分析結果如表2所示。對照組和試驗組的Clean reads差異不顯著（P>0.05，下同）;16個矮腳黃雞糞便樣品的Chao1指數(shù)范圍為605.00～737.92，ACE指數(shù)范圍為591.55～728.78，豐富度指數(shù)表現(xiàn)為對照組顯著（P<0.05，下同）或極顯著（P<0.01，下同）高于試驗組;在物種多樣性方面，Simpson指數(shù)的組間差異不顯著，Shannon指數(shù)則表現(xiàn)為試驗組顯著高于對照組，說明口服利巴韋林改變了矮腳黃雞腸道中的微生物多樣性。對照組和試驗組的文庫覆蓋率（Goods coverage）均在99.00%以上，說明每個樣品測序量合理，可很好地反映矮腳黃雞腸道微生物群落結構多樣性。

2. 2 矮腳黃雞腸道微生物組成及其群落結構

采用RDP和BLAST對16個矮腳黃雞糞便樣品的OTU進行鑒定分析，結果在門分類水平上共鑒定獲得15個菌門（圖2），包括厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）、Saccharibacteria、軟壁菌門（Tenericutes）、互養(yǎng)菌門（Synergistetes）、異常球菌—棲熱菌門（Deinococcus-Thermus）、螺旋體門（Spirochaetes）、綠彎菌門（Chloroflexi）、藍細菌門（Cyanobacteria）、梭桿菌門（Fusobacteria）、脫鐵桿菌門（Deferribacteres）、疣微菌門（Verrucomicrobia）和迷蹤菌門（Elusimicrobia）。對照組和試驗組均以厚壁菌門、放線菌門、擬桿菌門和變形菌門為優(yōu)勢菌門，相對豐度均在5.00%以上，其中以厚壁菌門的相對豐度最高。

在屬分類水平上，相對豐度大于0.10%的屬共有108個，表明矮腳黃雞腸道中的菌群微生物非常豐富。對照組和試驗組均以乳桿菌屬（Lactobacillus）的相對豐度最高，分別為34.07%和19.26%;其次是棒狀桿菌屬（Corynebacterium），對應的相對豐度分別為9.47%和8.04%（圖3）。通過T檢驗對相對豐度排名前20位的菌屬進行差異顯著性分析，結果如圖4所示。矮腳黃雞口服利巴韋林后，其腸道中的乳桿菌屬、腸球菌屬（Enterococcus）、Paeniglutamicibacter、Tessaracoccus、埃希氏桿菌屬（Escherichia-Shigella）、副球菌屬（Paracoccus）、Gottschalkia及黃桿菌屬（Flavobacterium）呈顯著或極顯著下降趨勢，而擬桿菌屬（Bacteroides）、葡萄球菌屬（Staphylococcus）、疊球菌屬（Sporosarcina）、Jeotgalicoccus、Unclassified_f_rikenellaceae、Unclassifier_o_bacteroidales、Rikenellaceae_RC9_gut_group、明串珠菌屬（Tri-chococcus）及丹毒絲菌屬（Erysipelothrix）呈顯著或極顯著上升趨勢。

2. 3 用藥前后矮腳黃雞腸道微生物群落結構的相似性

在屬分類水平上對相對豐度排名前50位的菌屬進行聚類分析并繪制熱圖。由圖5可知，16個矮腳黃雞糞便樣品分成兩簇，其中對照組樣品聚成一簇，試驗組樣品聚成一簇，說明同處理組各樣品的微生物群落結構相似，但不同處理組間的微生物群落結構存在明顯差異，試驗重復性良好。

利用UniFrac-PCoA對用藥前后矮腳黃雞糞便微生物群落結構差異進行分析，并通過系統(tǒng)進化距離衡量樣品間的相對距離，用于表征微生物群落結構的差異性，PCoA分析可將這種差異顯示在二維或三維空間，因此，PCoA分析圖中距離越近表示2個樣品的菌群結構越相似。由圖6可知，基于UniFrac的PCoA分析結果顯示，第一主成分（PC1）和第二主成分（PC2）的貢獻率分別為73.44%和6.99%，對照組和試驗組間的微生物群落結構差異明顯，彼此間可較好地分隔開，而同處理組內(nèi)的8個樣品能很好地聚在一起，菌群相似度很高。

3 討論

在家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中，抗生素作為預防和治療性藥物用于防止疾病發(fā)展和傳播的同時，也廣泛用于提高其生長性能。給肉雞飼喂鹽酸林可霉素、桿菌肽鋅或硫酸粘桿菌素均可顯著提高其日增重（倪江，2013）;但抗生素治療已被證實會引起腸道微生物群落結構改變甚至紊亂，而造成腸道微生物平衡失調(diào)，并對宿主的生理活動及代謝性能產(chǎn)生有害影響，最終可能導致腸道疾病的發(fā)生（Allen and Stanton，2014）。

前人研究證實，雞腸道內(nèi)的微生物群落以厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門和變形菌門為主（Sergeant et al.，2014）。在本研究中，不論是對照組矮腳黃雞糞便樣品還是試驗組矮腳黃雞糞便樣品，均以厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門和變形菌門為主要優(yōu)勢菌門，且這4種菌門的相對豐度合計在99.00%以上。其中，厚壁菌門在對照組和試驗組的相對豐度均超過50.00%，但藥物干預后F/B比值由對照組的6.83下降至3.11。動物和人類的肥胖癥與其腸道中的厚壁菌門和擬桿菌門密切相關。Ley等（2005）、Turnbaugh等（2006）通過對比肥胖小鼠和瘦弱小鼠盲腸內(nèi)容物的菌群結構，發(fā)現(xiàn)肥胖小鼠的擬桿菌門相對豐度較低，而厚壁菌門相對豐度較高，F(xiàn)/B比值在肥胖小鼠中偏高，即腸道內(nèi)F/B比值較高時可提高體內(nèi)脂肪的貯存。B?ckhed等（2004）針對無菌小鼠的研究也發(fā)現(xiàn)，擬桿菌門有促進脂肪沉積的作用，且推測與其能分解植物多糖密切相關。郭秀蘭（2008）也研究證實，豬的脂肪沉積與腸道擬桿菌門豐度及F/B比值相關，認為調(diào)控腸道微生物是控制豬脂肪沉積的有效途徑。本研究結果表明，在藥物干預后矮腳黃雞腸道內(nèi)的F/B比值約降低2倍，故推測添加利巴韋林不利于矮腳黃雞體內(nèi)脂肪的沉積，是由于其腸道微生態(tài)結構平衡被打破所造成。肉雞體內(nèi)的脂肪沉積又分為肌內(nèi)脂肪和腹脂，若能提高肌內(nèi)脂肪并降低腹脂對動物而言非常有利，因此后續(xù)將進一步探究利巴韋林藥物干預對肉雞肌內(nèi)脂肪和腹脂的影響機制。

不同抗生素對動物腸道微生物群落結構造成的影響也存在差異（倪江，2013;李會智，2016;向明等，2019）。Antonopoulos等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，小鼠使用阿莫西林和甲硝唑聯(lián)合治療后其盲腸區(qū)微生物菌群的豐度和結構發(fā)生顯著變化，治療結束后菌群結構可迅速恢復，但以頭孢哌酮治療小鼠會引起腸道微生物菌群多樣性的長期匱乏。李會智（2016）的研究也表明，在仔豬日糧中添加金霉素、喹乙醇+恩拉霉素、喹乙醇+維吉尼亞霉素均會降低豬糞便微生物群落多樣性。本研究結果表明，口服利巴韋林也顯著改變矮腳黃雞腸道的微生物多樣性，且給藥組的腸道微生物多樣性顯著高于對照組，與劉穎等（2017）研究發(fā)現(xiàn)在仔豬日糧中添加桿菌肽鋅與黏桿菌素后其腸道微生物物種多樣性較基礎飼糧組更豐富的結論一致。可見，不同抗生素對動物腸道微生物群落結構及其多樣性的影響存在明顯差異，究其原因可能與抗生素對不同動物的作用機制差異有關。

在實際生產(chǎn)中，亞治療劑量的抗生素能有效促進家禽生長（Emami et al.，2012），可能是提高腸道中乳酸菌數(shù)量的緣故（Dumonceaux et al.，2006），但也有研究發(fā)現(xiàn)使用抗生素后機體的乳酸菌數(shù)量呈降低趨勢（Lee et al.，2012）。雞腸道菌群結構的變化會影響其免疫功能和健康狀況，而雞腸道菌群結構的變化受多種因素影響，包括養(yǎng)殖條件、飲食組成及抗生素等（Lee et al.，2012）。倪江和楊維仁（2012）研究發(fā)現(xiàn)，在黃雞日糧飼料中添加不同抗生素（鹽酸林可霉素和桿菌肽鋅）不會顯著改變十二指腸、空腸和回腸中的微生物數(shù)量，但盲腸中的大腸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著減少。本研究中，對照組和試驗組的矮腳黃雞腸道微生物群落結構均以乳桿菌屬含量最高，其相對豐度分別為34.07%和19.26%，且口服利巴韋林后顯著降低了乳桿菌屬相對豐度。乳桿菌屬是促進腸道健康的重要益生菌，對促進免疫細胞、組織和器官生長發(fā)育及增強小腸和其他組織對病原菌的抵抗力具有重要意義，且乳酸菌代謝可通過降低腸道pH來抑制致病菌生長。矮腳黃雞口服利巴韋林7 d后其腸道乳桿菌屬含量顯著降低，降幅接近50.0%，說明利巴韋林會顯著影響肉雞腸道健康及微生物群落結構的穩(wěn)態(tài)性。

此外，使用利巴韋林藥物干預后，矮腳黃雞糞便樣品中的腸球菌屬相對豐度由對照組的7.76%顯著下降至2.47%。腸球菌能產(chǎn)生酪胺，其與酪氨酸的代謝密切相關，可增強細菌與腸道的黏附性（Ladero et al.，2013）。因此，在選用抗生素治療某一特定細菌感染引起的相關疾病時，會改變整個腸道的微生態(tài)環(huán)境及該生態(tài)系統(tǒng)與宿主間的相互作用。郭鵬等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，在β-內(nèi)酰胺藥物治療過程中，腸球菌屬可能在結腸中生存并合成酪胺，以此提高結腸黏膜的黏附性。盡管利巴韋林屬于抗病毒藥物，不會直接作用于腸道細菌，但矮腳黃雞在口服利巴韋林后仍會顯著改變其腸道菌群結構，故推測利巴韋林會導致細菌與腸道的黏附性下降，其具體原理有待進一步探究。

4 結論

口服利巴韋林會顯著影響矮腳黃雞腸道微生物區(qū)系，改變腸道微生物的穩(wěn)態(tài)結構，進而導致其腸道健康受到損傷。

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（責任編輯 蘭宗寶）