馬永紅，朱 麗，劉思蓓，余子全

（湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，淡水魚類發(fā)育生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，微生物分子生物學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長沙 410081）

殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida）是一種嗜冷無動力的氣單胞菌, 廣泛分布于淡水與海水環(huán)境中，是一種不能運(yùn)動、兼性厭氧的革蘭氏陰性菌。其最適生長溫度為22～25℃，35℃以上不生長，是一種條件致病菌，能引起癤瘡病，對魚類的存活有著顯著的影響，曾經(jīng)給全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的困擾［1］。

癤瘡病是由殺鮭氣單胞菌引起的一種高發(fā)性的魚類疾病，影響著世界范圍內(nèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖，其特點(diǎn)是發(fā)病率高，死亡率高［2］。病魚的病癥主要表現(xiàn)為魚體內(nèi)腹水，體表多處潰爛［3］。在癤瘡病等魚類細(xì)菌性疾病的預(yù)防與治療中，不規(guī)范頻繁地使用化學(xué)藥物導(dǎo)致病原體耐藥性增強(qiáng)，水體嚴(yán)重污染，從而造成水產(chǎn)疾病難以控制，同時也引發(fā)了一系列食品安全問題。因此，利用無毒無污染的微生物及其次級代謝產(chǎn)物作為微生物漁藥來防控水產(chǎn)疾病無疑成為了魚病研究的熱點(diǎn)［4］。

放線菌能產(chǎn)生多種具有獨(dú)特作用機(jī)制的活性天然產(chǎn)物，同時已有部分研究表明放線菌也能作為一種益生菌用于水產(chǎn)病害的防治。如Babu等［5］在蝦養(yǎng)殖區(qū)域的淤泥中分離到多株對白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus，WSSV）具有活性的放線菌，并且發(fā)現(xiàn)這些放線菌在蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)中具有潛在的生物修復(fù)作用。拮抗作用是細(xì)菌或其他微生物相互作用的方式之一，是指一種微生物在生長過程中通過某種代謝產(chǎn)物或改變生活環(huán)境來抑制其他微生物的生長，甚至殺死它們的現(xiàn)象。利用拮抗性能強(qiáng)的菌株抑制病原菌的生長、繁殖或致病性是生物防治的手段之一［6］。疾病防控的重點(diǎn)應(yīng)該是預(yù)防。拮抗菌可以作為抑制病原菌的生物控制劑，能夠減少對化學(xué)藥品的使用和依賴，比治療更具經(jīng)濟(jì)效益［7］。因此，本研究主要以殺鮭氣單胞菌為指示菌，從特殊生境下取土樣對該致病菌進(jìn)行拮抗菌的篩選以及活性研究，為魚類癤瘡病的防治提供新的策略和方法。

1 材料與方法

1.1 鏈霉菌I6分離的材料來源

銀川市賀蘭山平均海拔2 000 m以上，是溫帶草原與荒漠的交界線。該地區(qū)植被垂直分布，自然環(huán)境較為復(fù)雜，土壤類型較多。本研究從該地區(qū)山地草甸取土樣，從中分離到鏈霉菌I6。

1.2 鏈霉菌I6的形態(tài)學(xué)觀察

將無菌蓋玻片以45°左右的角度并排插入高氏固體平板培養(yǎng)基中，插入深度為蓋玻片的1/3左右；用無菌竹簽挑取鏈霉菌I6孢子，接種于蓋玻片與高氏培養(yǎng)基的交界線上，在28℃下培養(yǎng)3 d左右；在相差顯微鏡與掃描電鏡下觀察鏈霉菌I6菌絲與孢子的形態(tài)特征以及排列情況等［8］。

1.3 鏈霉菌I6 16S rDNA的擴(kuò)增測序及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

使用細(xì)菌基因組DNA快速抽提試劑盒提取鏈霉菌I6的全基因組［9］，以基因組DNA為模板，用通用引物擴(kuò)增目的基因。引物序列：27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）、1492R（5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'）。序列預(yù)期長度約為1 500 bp。PCR反應(yīng)體系：DNA模板2.5 μL（放線菌I6基因組稀釋10倍）、上游引物1.0 μL、下游引物1.0 μL、dNTP Mixture（2.5 mmol/L）4.0 μL、10×Ex Taq Buffer 5.0 μL、Ta-KaRa Ex Taq（5 U/μL）1.0 μL、無菌超純水35.5 μL，總體積50.0 μL。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸2 min，30個循環(huán)，72℃補(bǔ)平10 min，16℃保存。電泳檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果［10］。用膠回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物，并送至上海生物工程有限公司進(jìn)行測序［11］。將測序獲得的鏈霉菌I6的16S rRNA測序結(jié)果上傳至NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/），利用BLAST和GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行同源性分析。根據(jù)比對結(jié)果，在GenBank中檢索獲得標(biāo)準(zhǔn)菌株的16S rDNA序列，使用MEGA7.0.26軟件并采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.4 鏈霉菌I6活性產(chǎn)物分布的檢測

刮取適量鏈霉菌I6孢子至AM6培養(yǎng)基，置于28℃、200 r/min搖床發(fā)酵5 d；收集發(fā)酵液并離心（8 000 r/min，8 min），分別收集鏈霉菌I6的發(fā)酵上清液與細(xì)菌沉淀。菌體沉淀用無菌水洗3次，之后加入少量AM6培養(yǎng)基重懸、超聲破碎菌體，最后使用無菌濾頭將發(fā)酵上清液與沉淀破碎液過濾后進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，測定抑菌圈的大小。

1.5 鏈霉菌I6發(fā)酵條件的優(yōu)化

為了提高鏈霉菌I6的抗菌活性物質(zhì)產(chǎn)量，本研究對鏈霉菌I6的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。首先，刮取高氏平板上培養(yǎng)好的鏈霉菌I6孢子至胰蛋白胨大豆肉湯（trypticase soy broth，TSB）培養(yǎng)基中，置于28℃、200 r/min搖床活化2 d，然后再按5%的接種量將種子液分別接入7種不同的發(fā)酵培養(yǎng)基（表1）中培養(yǎng)5 d；取出培養(yǎng)后的發(fā)酵上清液，以殺鮭氣單胞菌為指示菌，未接菌的發(fā)酵培養(yǎng)基做為對照進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，篩選活性最強(qiáng)的培養(yǎng)基。接下來將鏈霉菌I6接種至AM3-1最適發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于28℃，200 r/min搖床培養(yǎng)，在培養(yǎng)的第1～12天，每天取發(fā)酵上清液（以殺鮭氣單胞菌為指示菌，未接菌的AM3-1培養(yǎng)基做對照）進(jìn)行1次抑菌試驗(yàn)，測定不同培養(yǎng)時間對鏈霉菌I6產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響。試驗(yàn)每組設(shè)3個平行，重復(fù)3次。最后，將最適發(fā)酵培養(yǎng)基AM3-1的初始pH分別調(diào)節(jié)至4、5、6、7、8、9、10，以5%的接種量將鏈霉菌I6的種子液分別轉(zhuǎn)接至不同初始pH的發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于28℃、200 r/min搖床培養(yǎng)5 d；取各組鏈霉菌I6的發(fā)酵上清液，以殺鮭氣單胞菌為指示菌，未接菌的AM3-1培養(yǎng)基做為對照進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，測定不同的初始pH對鏈霉菌I6產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響，試驗(yàn)每組設(shè)3個平行，重復(fù)3次。

表1 發(fā)酵培養(yǎng)基的類型及組成Tab. 1 Type and composition of fermentation medium

1.6 鏈霉菌I6生理生化特征的檢測

根據(jù)《鏈霉菌鑒定手冊》中的方法配制各類生理生化培養(yǎng)基，在無菌超凈工作臺內(nèi)用已滅菌的竹簽挑取少量鏈霉菌I6孢子接種至各類生理生化培養(yǎng)基中，按照該手冊中的檢測方法進(jìn)行各類生理生化檢測［12］。

1.7 鏈霉菌I6發(fā)酵液對殺鮭氣單胞菌的最小抑菌濃度（MIC）測定

通過梯度稀釋法對鏈霉菌I6的發(fā)酵上清液進(jìn)行稀釋，得到不同濃度的稀釋液，并以未接菌的AM3-1培養(yǎng)基作為對照，每個樣品中加入10.0 μL（1×107CFU/mL）殺鮭氣單胞菌的菌液，于30℃過夜培養(yǎng)。觀察菌株的生長情況，以肉眼觀察到?jīng)]有殺鮭氣單胞菌生長的發(fā)酵液濃度設(shè)定為最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）。觀察結(jié)束后，取每個濃度組的菌懸液100.0 μL至溶菌肉湯（lysogeny broth，LB）固體平板上涂布均勻，30℃過夜培養(yǎng)，觀察平板上殺鮭氣單胞菌的生長情況，平板內(nèi)無殺鮭氣單胞菌生長的發(fā)酵液濃度設(shè)定為最小殺菌濃度（minimum bactericidal concentration，MBC）。

1.8 慶大霉素與諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及鏈霉菌I6發(fā)酵液效價的測定

選用常用來防治魚類病害的慶大霉素與諾氟沙星抗生素作為標(biāo)準(zhǔn)品來衡量鏈霉菌I6發(fā)酵液的效價。稱取2 mg慶大霉素與2 mg諾氟沙星抗生素分別溶解于1 mL無菌水中，配成2 mg/mL的慶大霉素母液與2 mg/mL的諾氟沙星母液，并在超凈工作臺內(nèi)用無菌濾頭過濾，分別配置成1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81 μg/mL的慶大霉素溶液與諾氟沙星溶液。

以殺鮭氣單胞菌作為指示菌，將其涂布在LB平板上吹干；在涂有病原菌的板上打6個直徑為7 mm的孔（圖1a），分為S和K 2組孔，分別在不同的平板上加入50.0 μL不同濃度的慶大霉素與諾氟沙星抗生素以及已過濾的鏈霉菌I6的發(fā)酵上清液到S孔中，每個濃度重復(fù)3次，K孔中加入相同濃度的抗生素標(biāo)準(zhǔn)品，30℃過夜培養(yǎng)，觀察并計(jì)算出各濃度組的抑菌圈直徑的平均值。

將所有平板中K孔的濃度抑菌圈直徑的平均值減去每個平板上K孔的濃度抑菌圈直徑的平均值獲得每個平板的校正值。根據(jù)每個平板的校正值對各組濃度慶大霉素與諾氟沙星抑菌圈的直徑及鏈霉菌I6發(fā)酵上清液抑菌圈的直徑進(jìn)行校正，得到校正值。分別以慶大霉素與諾氟沙星濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，殺鮭氣單胞菌抑菌圈直徑校正值為縱坐標(biāo)，繪制慶大霉素與諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1b、1c）。然后將鏈霉菌I6發(fā)酵液校正的抑菌圈直徑數(shù)值代入標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程中算出所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到發(fā)酵液的效價。

圖1 抗生素滴加位置及抗生素對殺鮭氣單胞菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 Antibiotic dropping position and standard curve of antibiotic against Aeromonas salmonicida（a）抗生素的滴加位置；（b）諾氟沙星對殺鮭氣單胞菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線；（c）慶大霉素對殺鮭氣單胞菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線。(a) Antibiotic dropping position; (b) Standard curve of norfloxacin against Aeromonas salmonicida; (c) Standard curve of gentamicin against Aeromonas salmonicida.

1.9 鏈霉菌I6發(fā)酵液對魚類的安全性評估

鏈霉菌I6發(fā)酵液對多種魚類病原菌具有抑制作用，尤其對殺鮭氣單胞菌具有非常強(qiáng)的抑制活性。為了將鏈霉菌I6應(yīng)用到魚類養(yǎng)殖的疾病防控中，本研究對鏈霉菌I6的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行毒性檢測，通過體外反應(yīng)評估鏈霉菌I6發(fā)酵液對魚類細(xì)胞的安全性。將草魚肝臟細(xì)胞L8824培養(yǎng)至對數(shù)期后，在顯微鏡下觀察草魚肝臟細(xì)胞的生長狀態(tài)。將生長狀況較好的對數(shù)期草魚肝臟細(xì)胞的細(xì)胞密度稀釋為1×105個/mL，取100.0 μL加入96孔板中，放置在30℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，隨后分別加入10.0 μL的鏈霉菌I6發(fā)酵液、未接種的AM3-1培養(yǎng)基、殺鮭氣單胞菌，置于30℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h和24 h后，顯微鏡下觀察草魚肝臟細(xì)胞的形態(tài)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鏈霉菌I6的鑒定

鏈霉菌I6的菌落呈圓形扁平狀且較為干燥，中間凸出，氣生菌絲為淡粉色，基內(nèi)菌絲為淡黃色并伴有黃色可溶性色素產(chǎn)生。用顯微鏡觀察鏈霉菌I6，發(fā)現(xiàn)其營養(yǎng)菌絲沒有隔膜、不斷裂，菌絲細(xì)長且分支多而短，孢子絲呈螺旋狀。在掃描電鏡下可以看出，鏈霉菌I6孢子絲呈緊密螺旋狀（5～8圈），孢子呈扁平橢圓狀，中央有凹陷，并且孢子表面有褶皺（圖2、3）。

圖2 鏈霉菌I6的培養(yǎng)特征及相差顯微鏡觀察Fig. 2 The phase-contrast microscopy and culture characteristics of Strptomyces sp. I6（a）鏈霉菌I6的培養(yǎng)特征；（b）鏈霉菌I6的相差顯微鏡觀察。(a) Culture characteristics of Strptomyces sp. I6; (b) The phase-contrast microscopy of Strptomyces sp. I6.

2.2 鏈霉菌I6的16S rDNA擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育分析

鏈霉菌I6的全基因組DNA提取凝膠電泳圖中條帶清晰。該菌用16S rDNA的通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得長度約為1 500 bp的特異性條帶。將16S rDNA擴(kuò)增測序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對分析后，選擇相似度高的不同物種的同源序列，以FASTA格式下載。使用MEGA7.0.26軟件，運(yùn)用鄰接法構(gòu)建鏈霉菌I6的系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示，鏈霉菌I6單獨(dú)為一支，與Streptomyces triticistrain NEAU A3和Streptomyces bikiniensisstrain WANG1的親緣關(guān)系較近（圖4）。但將鏈霉菌I6的生理生化特征與Streptomyces triticistrain NEAU A3和Streptomyces bikiniensisstrain WANG1的生理生化特征相比較后發(fā)現(xiàn)，其生理生化特征與這兩株菌稍有差異［13-14］（表2），推測鏈霉菌I6可能為一株新的鏈霉菌。

表2 鏈霉菌I6與菌株Streptomyces tritici strain NEAU A3和Streptomyces bikiniensis strain WANG1的生理生化比較Tab. 2 Physiological and biochemical comparison of Streptomyces sp. I6 and Streptomyces tritici strain NEAU A3 and Streptomyces bikiniensis strain WANG1

圖4 鏈霉菌I6的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 4 Phylogenetic tree of Strptomyces sp. I6

圖3 鏈霉菌I6掃描電鏡觀察Fig. 3 The scanning electron microscope of Strptomyces sp. I6（a）鏈霉菌I6；（b）鏈霉菌I6孢子。(a) Strptomyces sp. I6; (b) Spore of Strptomyces sp. I6.

2.3 鏈霉菌I6發(fā)酵條件的優(yōu)化

首先將鏈霉菌I6分別接入7種培養(yǎng)基中發(fā)酵，取樣檢測發(fā)酵上清液對殺鮭氣單胞菌的抑制作用，發(fā)現(xiàn)在AM3-1、AM6、AM24-6、AM5以及AM1培養(yǎng)基中能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，在AM4與S培養(yǎng)基中不能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，且AM3-1發(fā)酵液的抑菌圈直徑比其他培養(yǎng)基抑菌圈直徑大5.0～10.0 mm，其中比AM1培養(yǎng)基大10.0 mm左右，比AM6培養(yǎng)基大5.0 mm左右，故確定AM3-1培養(yǎng)基為鏈霉菌I6的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基（圖5a）。接下來用最適培養(yǎng)基AM3-1發(fā)酵鏈霉菌I6，分別在不同的時間段進(jìn)行取樣，檢測發(fā)酵上清液對殺鮭氣單胞菌的抑制作用。結(jié)果表明，活性物質(zhì)在發(fā)酵后開始產(chǎn)生，第5天的發(fā)酵液對殺鮭氣單胞菌的抑菌作用最強(qiáng)，抑菌圈直徑達(dá)到25.0 mm左右，說明活性物質(zhì)產(chǎn)量在第5天時達(dá)到頂峰，第5天后隨著發(fā)酵時間的增加，發(fā)酵液中的活性物質(zhì)的產(chǎn)量稍有降低，但基本保持穩(wěn)定，故確定鏈霉菌I6的最佳發(fā)酵時長為5 d（圖5b）。最后以5%的接種量將鏈霉菌I6的種子液分別轉(zhuǎn)接至不同初始pH的最適發(fā)酵培養(yǎng)基AM3-1中，發(fā)酵5 d后，取樣檢測發(fā)酵上清液對殺鮭氣單胞菌的抑制作用。結(jié)果表明，發(fā)酵液初始pH對鏈霉菌I6活性化合物的生產(chǎn)有明顯的影響。當(dāng)pH為4時，鏈霉菌I6的發(fā)酵液內(nèi)基本無抗菌化合物的產(chǎn)生，抑菌圈直徑為0；隨著發(fā)酵液初始pH從4增大到7～8時，抑菌圈直徑從無逐漸增大到25.0 mm左右，表明pH為7～8時活性化合物的產(chǎn)量達(dá)到最大；當(dāng)發(fā)酵液初始pH繼續(xù)增大時，抑菌圈直徑逐漸變小；當(dāng)pH為10時，抑菌圈直徑下降到10.0 mm左右，故確定鏈霉菌I6的最適pH為7～8。

圖5 鏈霉菌I6發(fā)酵條件的優(yōu)化Fig. 5 The fermentation conditions of Streptomyces sp. I6 were optimized（a）不同發(fā)酵培養(yǎng)基對鏈霉菌I6產(chǎn)活性化合物的影響。字母表示顯著性差異；（b）不同發(fā)酵時間對鏈霉菌I6產(chǎn)活性化合物的影響；（c）發(fā)酵初始pH對鏈霉菌I6產(chǎn)活性化合物的影響。(a) Effects of different fermentation media on active compounds produced by Streptomyces sp. I6. Letters indicate significant differences; (b) Effects of different fermentation time on active compounds produced by Streptomyces sp. I6; (c) Effects of initial pH of fermentation broth on active compounds produced by Streptomyces sp. I6.

2.4 鏈霉菌I6抗魚類病原菌活性物質(zhì)的研究

為了探究鏈霉菌I6的抗菌活性物質(zhì)的分布，本研究分別用發(fā)酵上清液與沉淀做了抗殺鮭氣單胞菌的活性試驗(yàn)，研究表明，鏈霉菌I6的發(fā)酵上清液對殺鮭氣單胞菌具有很強(qiáng)的抑菌活性（圖6）。鏈霉菌I6發(fā)酵液對殺鮭氣單胞菌的MIC為稀釋16倍后的發(fā)酵液（表3）。鏈霉菌I6發(fā)酵上清液對殺鮭氣單胞菌的校正抑菌圈直徑為25.3 mm。將此數(shù)值代入慶大霉素和諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品的回歸曲線方程中，得出鏈霉菌I6發(fā)酵上清液分別相當(dāng)于慶大霉素與諾氟沙星為7.67 μg/mL與665.00 μg/mL的效價。接下來評估鏈霉菌I6發(fā)酵液對草魚肝臟細(xì)胞的安全性，發(fā)現(xiàn)殺鮭氣單胞菌與草魚肝臟細(xì)胞共孵育12 h和24 h后細(xì)胞嚴(yán)重變形，所有細(xì)胞全部死亡。鏈霉菌I6發(fā)酵液與草魚肝臟細(xì)胞共孵育12 h和24 h后，草魚肝臟細(xì)胞未出現(xiàn)壞死、病變等情況，生長狀況與對照組一致，說明鏈霉菌I6的代謝產(chǎn)物對草魚肝臟細(xì)胞無毒性（圖7）。

圖7 鏈霉菌I6發(fā)酵上清液對草魚肝臟細(xì)胞的影響Fig. 7 Effects of supernatant of Streptomyces sp. I6 on liver cells of grass carpCK1：AM3-1發(fā)酵培養(yǎng)基處理；I6：鏈霉菌I6發(fā)酵液處理；CK2：殺鮭氣單胞菌處理。CK1: AM3-1 fermentation medium treatment; I6: Streptomyces sp. I6 fermentation broth treatment; CK2: Aeromonas salmonicida treatment.

表3 鏈霉菌I6發(fā)酵液對殺鮭氣單胞菌MIC與MBC值的檢測Tab. 3 Detection of MIC and MBC values of Streptomyces sp. I6 fermentation broth against Aeromonas salmonicida

圖6 鏈霉菌I6活性物質(zhì)的分布Fig. 6 Active substance distribution of Streptomyces sp. I61：鏈霉菌I6發(fā)酵上清液；2：菌體破碎重懸液；3：AM6培養(yǎng)基。1: Streptomyces sp. I6 fermentation supernatant; 2: Bacterial sedimentation and suspension; 3: AM6 medium.

3 討論

鏈霉菌是微生物的重要類型，廣泛存在于各種生態(tài)環(huán)境中，在陸地、海洋、空氣塵埃等環(huán)境中都有發(fā)現(xiàn)。鏈霉菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物更是藥物研發(fā)的重要來源，在藥物研發(fā)中發(fā)揮著重要的作用［15-16］。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，以鏈霉菌為代表的放線菌貢獻(xiàn)了一半以上的臨床抗生素藥物及先導(dǎo)物［17-19］，鏈霉菌屬微生物占據(jù)了微生物代謝產(chǎn)物的39%。目前發(fā)現(xiàn)的1 000多種微生物生物活性物質(zhì)中，由鏈霉菌屬微生物所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物中得到的抑菌活性物質(zhì)約占2/3［20］。據(jù)報(bào)道，鏈霉菌對魚類病原菌有抑制效果，其中李夢茜等［21］分離的鏈霉菌LFJK-11發(fā)酵液對引起羅非魚敗血癥的嗜水氣單胞菌有較強(qiáng)的抑制作用。這與本文中研究的鏈霉菌I6發(fā)酵液對引起魚類癤瘡病的病原菌殺鮭氣單胞菌具有很強(qiáng)的抑制活性相類似。

殺鮭氣單胞菌廣泛分布于自然界中，是氣單胞菌中最早被鑒定的致病菌，能引起癤瘡病，對魚類的存活有著顯著的影響。目前常用藥物治療的方法防治殺鮭氣單胞菌。但是隨著藥物的使用，殺鮭氣單胞菌的耐藥性越來越強(qiáng)，甚至出現(xiàn)了可移動的耐藥性基因［22］。也有研究發(fā)現(xiàn)，殺鮭氣單胞菌還可以和常見的嗜水氣單胞菌等細(xì)菌引發(fā)魚類的混合感染。因此，尋求水產(chǎn)防治殺鮭氣單胞菌的益生菌迫在眉睫。本研究中篩到的鏈霉菌I6對殺鮭氣單胞菌有很強(qiáng)的抑制作用，更慶幸的是，鏈霉菌I6發(fā)酵液對殺鮭氣單胞菌的MIC分別相當(dāng)于慶大霉素7.67 μg/mL、諾氟沙星665 μg/mL的效價，且對魚類細(xì)胞無毒性，是一種益生菌。這與陸婷巍等［23］的殺鮭氣單胞菌拮抗菌X8安全性測試結(jié)果相同。因此鏈霉菌I6的活性產(chǎn)物有望開發(fā)成新的微生物制劑應(yīng)用于水產(chǎn)疾病的防控中，具有潛在的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。但目前研究抗魚類病原菌活性化合物生物合成途徑的報(bào)道寥寥無幾。因此，我們將繼續(xù)對鏈霉菌I6發(fā)酵液中抗殺鮭氣單胞菌活性化合物進(jìn)行分離鑒定，并根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)、結(jié)合基因編輯和生物信息學(xué)技術(shù)研究其生物合成途徑。