王廣林，劉 輝，王春生，武培璐

(1.皖西學院 分析測試中心，安徽 六安 237012；2.安徽中晟分析檢測科技有限公司，安徽 六安 237200；3.六安市中醫(yī)院，安徽 六安 237000)

隨著人們生活水平的提高、健康意識的增強，來源自然、低熱量的食品材料成為人們的新需求。多種野生蒿類植物進入人們的餐桌[1-2]，可做成各種可口食品(如炒菜、煲湯、粑粑等)。

野艾蒿(ArtemisialavandulaefoliaDC.)為菊科蒿屬多年生草本植物，植株有香氣，體被絨毛，莖直立，高60～120 cm。我國廣泛分布，多生于路旁、田間，為常見雜草。可入藥作艾蒿(ArtemisiaargyiLevl. et Van.)的代用品[3]。有散寒、祛濕、溫經(jīng)、止血等功效，現(xiàn)代藥理研究表明：野艾蒿具有抗菌、抗腫瘤等活性[4-5]。

長江中下游地區(qū)，人們常于清明前后，野外采摘野艾蒿，制作成各種食品，因其味清香怡人，成為人們餐桌上的佳肴。但是食用野艾蒿采收期較短，一般集中在三月下旬至四月上旬。過四月后，其莖葉木質(zhì)化以及揮發(fā)刺激性次級代謝產(chǎn)物含量增加，使之不再適合食用。為使人們放心食用野艾蒿資源，研究分析了野艾蒿、同為蒿屬的牡蒿(ArtemisiajaponicaThunb.)[6-7]和已經(jīng)作為食品的薺菜(Capsellabursa-pastoris(L.) Medic.)中的主要營養(yǎng)物質(zhì)差異，并對野艾蒿的毒性進行分析評價，為野艾蒿植物的食用開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

DGT-G電熱恒溫干燥箱(合肥華德利科學器材有限公司)、JA5103N電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)、FA2104N電子分析天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)、SX2-4-10高溫爐(常州榮華儀器制造有限公司)、HH-3數(shù)顯恒溫水槽(常州榮華儀器制造有限公司)、NKB3100自動定氮儀(上海祎鴻分析儀器有限公司)、BDF電熱板(南京瑞尼克科技開發(fā)有限公司)、pocH-100i全自動血液分析儀(Sysmex公司)、CX-5全自動生化分析儀(Beckman公司)。

1.2 實驗材料

1.2.1 野艾蒿、牡蒿和薺菜的采集

清明節(jié)前后一周內(nèi)，于六安市南山新區(qū)野外遠離污染源的地方，采集野艾蒿、牡蒿地上約5 cm的嫩梢段；采集薺菜的全株。

1.2.2 野艾蒿粉的制備

除去雜草、泥土等，清洗干凈，瀝干水分，于通風無陽光處晾干表面水滴。130～150 ℃，殺青10 min。莖葉變軟、清香味溢出后，揉搓，讓野艾蒿的莖、葉液稍出，利于其揮發(fā)刺激性物質(zhì)的釋放。絞碎成細碎小段，便于在烘制時水分和揮發(fā)刺激性物質(zhì)的進一步釋放。80～90 ℃烘6～8 h，至完全干燥，粉碎備用。

1.2.3 Wistar大鼠

Wistar大鼠100只，雌雄各半，鼠齡4周。飼養(yǎng)于屏障設(shè)施內(nèi)，溫度20～25℃、相對濕度40%～70%、光照周期12 h∶12 h、換氣次數(shù)大于40次/h。自由進食，適應飼養(yǎng)4 d后開始實驗。

1.3 實驗方法

1.3.1 主要營養(yǎng)物質(zhì)檢測

新鮮野艾蒿、牡蒿和薺菜中的水分、灰分、蛋白質(zhì)、粗纖維、脂肪等的測定方法，分別按照食品安全國家標準進行檢測[8-12]；多糖按照2020版《中國藥典》(一部)鐵皮石斛多糖的檢測方法[13]進行檢測；總黃酮按照出口食品中總黃酮的測定[14]進行。

1.3.2 野艾蒿亞慢性經(jīng)口毒性評價

按照90天經(jīng)口毒性試驗的食品安全國家標準[15]，一般90天經(jīng)口毒性試驗大鼠每日攝食量按照體重8%折算，高劑量野艾蒿粉摻入飼料比按照10%計，則實驗大鼠高劑量組野艾蒿粉攝食量為8. 00 g /kg·bw。以4.00 g /kg·bw和2.00 g/kg·bw為中劑量和低劑量，野艾蒿粉摻入飼料比分別為5%和2.5%。

Wistar大鼠按性別隨機分為高、中、低3個實驗組和1個對照組，每組20只(雌雄各半)，對照組喂食不加野艾蒿粉的同批飼料，喂養(yǎng)90 d至實驗末期。另外，設(shè)置衛(wèi)星對照組和衛(wèi)星高劑量組，每組10只(雌雄各5只)，用于停止喂食野艾蒿粉后28 d(恢復期)采血測定血液生理、生化等指標。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 野艾蒿主要營養(yǎng)成分

野艾蒿的主要營養(yǎng)成分與牡蒿和薺菜進行比較。結(jié)果可見(表1)，野艾蒿的蛋白質(zhì)含量分別是牡蒿和薺菜1.69和1.19倍、粗纖維含量分別是它們的1.82和1.21倍，與牡蒿的蛋白質(zhì)、粗纖維含量差異顯著(P<0.05)；野艾蒿的總黃酮分別是牡蒿和薺菜1.34和1.35倍，且差異均顯著(P<0.05)；水分、灰分、脂肪和多糖介于薺菜與牡蒿之間。野艾蒿的總體營養(yǎng)價值好于牡蒿，其蛋白質(zhì)、粗纖維、多糖和總黃酮的含量高于薺菜。

表1 野艾蒿與牡蒿和薺菜主要營養(yǎng)成分含量比較

2.2 野艾蒿亞慢性經(jīng)口毒性

2.2.1 臨床觀察和食物利用率

每天觀察大鼠的臨床表現(xiàn)、記錄攝食量，每周稱量體重等情況。整個實驗過程中，各組大鼠毛發(fā)光亮，對外反應和糞便等表現(xiàn)正常，無病態(tài)、死亡發(fā)生。

實驗結(jié)束(90 d)和恢復期結(jié)束(118 d)，比較各組大鼠體重增長、總攝食量及總食物利用率情況，其中總食物利用率為體重增長量(g)/總攝食量(g)*100%。結(jié)果見表2，實驗組和衛(wèi)星組同性別各組與相應對照組比較，無統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)，說明野艾蒿粉對大鼠的進食、生長等無明顯的影響。

2.2.2 血液學檢查

分別于實驗結(jié)束(90 d)對各實驗組和恢復期結(jié)束(118 d)對衛(wèi)星組進行采血，分析紅細胞、白細胞、血小板、血紅蛋白濃度及其嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞比例等血液生理指標。結(jié)果(表3)可見，同性別各劑量組與相應對照組比較，沒有統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)。說明野艾蒿粉低、中、高劑量連續(xù)喂養(yǎng)90 d對大鼠血液生理指標未造成明顯影響。

2.2.3 血生化學檢查

實驗結(jié)束(90 d)各實驗組、恢復期結(jié)束(118 d)衛(wèi)星組進行采血，分析血液生化指標。結(jié)果(表4)可見，同性別實驗組各劑量組和衛(wèi)星組高劑量組與相應對照組比較，沒有統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)。說明野艾蒿粉低、中、高劑量連續(xù)喂養(yǎng)90 d對大鼠血液生化指標未造成影響，肝、腎等功能未見受損情況。

2.2.4 病理檢測

對實驗結(jié)束(90 d)各實驗組、恢復期結(jié)束(118 d)衛(wèi)星組進行大體檢查。對實驗組和衛(wèi)星組的各主要器官進行稱重，分析主要器官的臟器系數(shù)(器官重量/體重*100%)，結(jié)果見表5，同性別實驗組各劑量組和衛(wèi)星組高劑量組與相應對照組比較，沒有統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)。對高劑量組和對照組主要臟器進行解剖觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、腦、胃、腎、肺等與對照組比較，其外觀顏色正常，未見水腫、滲液、增生、萎縮等異常病理變化。說明野艾蒿粉低、中、高劑量連續(xù)喂養(yǎng)90 d對大鼠主要臟器器官未造成影響。

續(xù)表5

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，野艾蒿嫩梢的總體營養(yǎng)價值好于牡蒿，其蛋白質(zhì)、粗纖維、多糖和總黃酮的含量高于薺菜。其中，黃酮類化合物是蒿屬植物中的主要化學成分，具有廣泛的藥理活性，如抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗氧化、降血脂等。馬麟等[16]研究了貴州野艾蒿中黃酮類成分，發(fā)現(xiàn)了11種黃酮類化合物。戴喜末等[17]采用超聲波提取法提取野艾蒿中的多糖，提取率為6.64%，并且研究發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化、抗腫瘤、改善免疫功能等作用，并對正常細胞無毒副作用[18]。目前植物多糖已在食品、飼料、制藥等多個領(lǐng)域得到廣泛應用[19]。聶利華[20]對潮汕地區(qū)野生植物野艾蒿的氨基酸種類與含量、礦物元素進行了研究，發(fā)現(xiàn)野艾蒿含有多種營養(yǎng)成分，富含多種氨基酸，且含有7種人體必需氨基酸。野艾蒿還含有豐富的鈣、鎂、鐵、錳、鋅、銅和硒等無機元素。王登奎等[21]研究了內(nèi)蒙古地區(qū)野艾蒿中氨基酸、維生素、微量元素的含量，發(fā)現(xiàn)野艾蒿中富含氨基酸，其中天冬氨酸和谷氨酸的含量最高。野艾蒿還含有多種維生素，其中胡蘿卜素含量最高，維生素E、B2含量較高。同時，野艾蒿中還發(fā)現(xiàn)多種微量元素，其中鐵和硒的含量較高。上述研究結(jié)果均說明野艾蒿含有豐富的營養(yǎng)成分，可以作為人們食用資源加以利用。

野艾蒿的亞慢性經(jīng)口毒性結(jié)果顯示：連續(xù)使用含野艾蒿粉飼料喂養(yǎng)大鼠的體重增加、總攝食量、總食物利用率，血液生理及其生化指標，同性別實驗組各劑量組、衛(wèi)星組高劑量組與相應對照組比較，沒有統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)；對高劑量組和對照組主要臟器進行解剖觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、腦、胃、腎、肺等與對照組比較，無明顯差異，其外觀顏色正常，未見水腫、滲液、增生、萎縮等異常病理變化；實驗組和衛(wèi)星組的各主要器官的臟器系數(shù)，同性別實驗組各劑量組、衛(wèi)星組高劑量組與相應對照組比較，沒有統(tǒng)計學意義差異(P>0.05)。有研究發(fā)現(xiàn)野艾蒿精油對小鼠的急性經(jīng)口毒性低，小鼠急性吸入和急性經(jīng)皮毒性試驗以及家兔的急性吸入試驗均無中毒反應和死亡，屬于低毒范圍；以野艾篙精油喂飼大鼠28 d后，高劑量組雄性大鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇偏高，且差異顯著；各處理組雌性大鼠血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶都偏高，且差異顯著；高劑量組的尿素氮也偏高，且差異顯著，認為長時間經(jīng)口服用野艾篙精油后可能導致肝功能或者腎功能損傷[22]。野艾蒿精油是野艾蒿產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)，具有一定的毒性。研究使用的野艾蒿于清明節(jié)前后一周內(nèi)，采集其5 cm左右的嫩梢制備而成。此時野艾蒿剛剛長出地面，其次生代謝物質(zhì)尚未大量合成，大鼠90 d經(jīng)口毒性試驗及其停止喂飼28 d均未見毒性反應，上述研究結(jié)果為野艾蒿嫩梢的食用開發(fā)提供了毒理學依據(jù)。