周艷霞 羅關(guān)靖 普興宏 戚彥飛

[摘要]目的研究桑生地黃湯對(duì)代謝綜合征大鼠炎癥因子的干預(yù)作用。方法 SD 大鼠60只，10只為空白對(duì)照組，50只通過高脂高糖高膽固醇飼料飼養(yǎng)制備代謝綜合征模型，模型大鼠隨機(jī)分為5組，每組各10只，分別為模型對(duì)照組、二甲雙胍組、桑生高劑量組、桑生中劑量組、桑生低劑量組，分別給予相應(yīng)濃度藥物，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積的生理鹽水，觀察各組血糖、FINS、IRI、IL-6、TNF-α水平。結(jié)果模型對(duì)照組大鼠與空白對(duì)照組比較，血糖、IRI、IL-6、TNF-α均明顯升高（ P <0.01），桑生高劑量組與模型對(duì)照組比較，桑生高劑量組血糖（ P <0.05）、IRI（ P <0.01）、IL-6（ P <0.01）均低于模型對(duì)照組，二甲雙胍組與模型對(duì)照組比較，二甲雙胍組血糖、IRI 均低于模型對(duì)照組（ P <0.05）。結(jié)論二甲雙胍組與桑生高劑量組對(duì)代謝綜合征大鼠各炎癥因子有干預(yù)作用，且桑生高劑量組效果更優(yōu)。

[關(guān)鍵詞]桑生地黃湯;代謝綜合征;動(dòng)物實(shí)驗(yàn);炎癥因子;胰島素抵抗指數(shù)

[中圖分類號(hào)] R285.5? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616（2021）23-0023-04

Experimental study on the intervention effect of SangshengDihuang Decoction on IRI， IL-6 and TNF-α in rats with metabolic syndrome

ZHOUYanxia1 LUOGuanjing2 PUXinghong2 QIYanfei2

1.Department of Diabetes， Qujing Hospital of Traditional Chinese Medicine， Yunnan， Qujing 655000， China;2.Department of Cardiology， Qujing Hospital ofTraditional Chinese Medicine， Yunnan， Qujing 655000， China

[Abstract] Objective To study the intervention effect of SangshengDihuang Decoction on inflammatory factors in rats with metabolic syndrome. Methods A total of 60 SD rats were selected， of which 10 rats were assigned into the blank control group. The remaining 50 rats were fed with high-fat， high-sugar and high-cholesterol diet to establish the model of metabolic syndrome. The model rats were randomly divided into 5 groups with 10 rats in each group： the model control group， metformin group， Sangsheng high-dose group， Sangsheng middle-dose group and Sangsheng low-dose group. The corresponding concentrations of drugs were given respectively. The blank control group and the model control group were given the same volume of normal saline. The levels of blood glucose， fasting insulin （FINS）， ischemia-reperfusion injury （IRI）， interleukin-6（IL-6） and tumor necrosis factor-α（TNF-α） were observed in each group. Results Compared with those in the blank control group， the blood glucose， IRI， IL-6 and TNF-α in the model control group increased significantly （P <0.01）. The levels of blood glucose （P <0.05）， IRI （P <0.01） and IL-6（P <0.01） in the Sangsheng high-dose group were lower than those in the model control group. The levels of blood glucose and IRI in the metformin group were lower than those in the model control group （P <0.05）. Conclusion The metformin group and Sangsheng high-dose group shows intervention effect on inflammatory factors in the rats with metabolic syndrome， and Sangsheng high-dose group exhibits better effect.

[Key words] SangshengDihuang Decoction; Metabolic syndrome; Animal experiment; Inflammatory factors; Insulin resistance index

代謝綜合征是以向心性肥胖為特征的2型糖尿病與心血管疾病危險(xiǎn)因素的集合體。在我國代謝綜合征患病率逐年增高，且年輕化趨勢(shì)明顯，成為威脅人們身體健康的巨大隱患。代謝綜合征人群的減重、改善胰島素抵抗，是有效預(yù)防2型糖尿病和心血管疾病的重要手段。桑生地黃湯為我科長期使用有效的自擬方劑，對(duì)肥胖型2型糖尿病患者有明顯降糖、減重作用[1]，對(duì)代謝綜合征大鼠脂肪因子有明顯調(diào)節(jié)作用[2]。本研究主要通過桑生地黃湯對(duì)代謝綜合征大鼠胰島素抵抗指數(shù)（insulin resistance index，IRI）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）三個(gè)指標(biāo)的干預(yù)效果來觀察桑生地黃湯改善胰島素抵抗、減輕微炎癥反應(yīng)的作用，以進(jìn)一步探討桑生地黃湯對(duì)代謝綜合征大鼠的相關(guān)作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性 SD 大鼠60只，SPF 級(jí)，6～8周，體重180～220 g，成都科碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：dy20190402，飼養(yǎng)于 SPF 屏障系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物為麻醉后脫臼處死，實(shí)驗(yàn)操作遵循國家或機(jī)構(gòu)的有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用規(guī)定。

1.2實(shí)驗(yàn)用藥

中藥：桑生地黃湯（生藥總重250 g）。桑白皮30 g，玄參10 g，白術(shù)15 g，知母10 g，花粉10 g，玉竹10 g，黃連5 g，葛根30 g，山藥30 g，生熟地黃各10 g ，蒼術(shù)10 g，荷葉20 g，山楂30 g，茯苓20 g，購自四川成都新綠藥業(yè)，免煎顆粒。

陽性藥：鹽酸二甲雙胍片（格華止，中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字 H20023370，0.5 g/片）。

1.3主要儀器

酶標(biāo)儀（BIORAD 公司，Model550 Microplate Reader）、半自動(dòng)生化儀（美生實(shí)業(yè)有限公司， BASIC1.18版本）、高速低溫離心機(jī)（上?？茖W(xué)儀器廠，TGL-16G）。

1.4主要試劑

RatFINSELISAKIT（上海茁彩生物科技有限公司，貨號(hào)：ZC-54525）;Rat IL-6 ELISA KIT（上海茁彩生物科技有限公司，貨號(hào)：ZC-36404）;Rat TNF-α ELISA KIT（上海茁彩生物科技有限公司，貨號(hào)：ZC-37624）。

1.5方法

1.5.1實(shí)驗(yàn)分組及給藥10只正常飼養(yǎng)為空白對(duì)照組，50只高脂高糖高膽固醇飼料大鼠造模12周[2-4]，參考代謝綜合征大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)[5]，即在中心性肥胖（腹圍增大）基礎(chǔ)上，同時(shí)具有高三酰甘油血癥、 HDL-C 減低、高血壓以及 FPG 升高4項(xiàng)中的任意2項(xiàng)可以判斷代謝綜合征造模成功，造模成功率達(dá)86%，將模型組大鼠隨機(jī)分為5組，分別為模型對(duì)照組、二甲雙胍組、桑生高劑量組、桑生中劑量組、桑生低劑量組，按照分組每天灌胃相應(yīng)藥物?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積的生理鹽水;二甲雙胍組給予二甲雙胍藥液：換算人等效劑量1.5 g/d（按照大鼠等效劑量為人日劑量7.4倍計(jì)算），配制成濃度0.2 g/ml，灌胃（0.75 ml/100 g），1次/d;桑生高、中、低劑量組分別給予相應(yīng)濃度桑生地黃湯藥液灌胃：將中藥免煎顆粒用開水沖泡，并用玻棒攪拌，使充分溶解，分別配制成生藥12、6、3 g/ml 的高、中、低三種濃度藥液，中劑量為人等效劑量（按照大鼠等效劑量為人日劑量7.4倍計(jì)算），高劑量為人等效劑量2倍劑量，低劑量為人等效劑量 V2劑量，灌胃（0.75 ml/100 g），1次/d;空白對(duì)照組繼續(xù)給予基礎(chǔ)飼料，模型對(duì)照組、二甲雙胍組及桑生高、中、低劑量組繼續(xù)給予高脂飼料，并定期（每周1次）稱量體重以調(diào)整給藥劑量，連續(xù)給藥4周。造模及給藥過程中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無死亡情況。

1.5.2相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定方法大鼠血生化指標(biāo)的檢測(cè)：采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血糖的含量。 ELISA 法檢測(cè)大鼠空腹胰島素及炎癥因子：空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）、IL-6、TNF-α濃度檢測(cè)，分別嚴(yán)格按照各試劑盒說明書進(jìn)行操作，試驗(yàn)步驟詳見試劑盒說明書。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（ x ±s）表示，組間比較采用 t 檢驗(yàn)， P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠血糖水平、FINS濃度、IRI比較

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血糖明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01）;FINS 濃度明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01）;IRI 增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01）。與模型對(duì)照組組相比，二甲雙胍組、桑生高劑量組、桑生中劑量組大鼠血糖水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）;桑生高劑量組大鼠 IRI 明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01）;二甲雙胍組大鼠 IRI 降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）。與模型對(duì)照組相比，桑生高劑量組大鼠血清中 FINS 濃度明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01）;二甲雙胍組大鼠血清中 FINS 濃度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.05）;桑生中劑量組及桑生低劑量組大鼠血清中 FINS 濃度與模型對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。見表1。

2.2各組大鼠血清中IL-6、TNF-α濃度比較

與空白對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血清中 IL-6、TNF-α濃度明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01）。與模型對(duì)照組相比，桑生高劑量組大鼠血清中 IL-6濃度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.05）;其余各給藥組大鼠血清中 IL-6濃度與模型對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。各給藥組大鼠血清中 TNF-α濃度與模型對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05）。見表2。

3討論

高脂高糖高膽固醇飼料飼養(yǎng)12周能成功制備代謝綜合征大鼠模型。桑生地黃湯與二甲雙胍均有明確降低代謝綜合征大鼠胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)的作用，其中桑生地黃湯高劑量組較二甲雙胍組在改善指標(biāo)中優(yōu)勢(shì)明顯，進(jìn)一步表明桑生地黃湯對(duì)代謝綜合征大鼠的作用機(jī)制，并且可以指導(dǎo)臨床進(jìn)一步擴(kuò)大桑生地黃湯的應(yīng)用范圍。

中醫(yī)對(duì)肥胖的病因病機(jī)早有認(rèn)識(shí)，《黃帝內(nèi)經(jīng)》記載：“此人必?cái)?shù)食甘美而多肥也”“肥者令人內(nèi)熱”。此類人平素喜食肥甘厚味，造成脾胃不和，脾失健運(yùn)，運(yùn)化失司，從而進(jìn)一步影響中焦津液生化輸布，聚化為痰，痰濕中阻，郁而化熱，胃中有熱則消谷善饑，脾氣已虛則津液失布而聚于局部，故出現(xiàn)多食善饑、疲倦乏力、腹型肥胖?，F(xiàn)代中醫(yī)認(rèn)為肥胖以脾虛為本，濕熱為標(biāo)，熱毒等病理產(chǎn)物在胰島素抵抗中發(fā)揮重要作用。故代謝綜合征的中醫(yī)治療宜健脾化濕，清熱潤燥。桑生地黃湯有益氣健脾、清胃潤燥之功，并兼有潤肺、滋腎的作用。其中桑白皮瀉肺胃伏火;知母、花粉、玉竹清肺胃之燥熱而滋陰生津，減少胃納;黃連燥濕清熱，直折胃火，減少胃納;生熟地黃清熱生津，且滋腎中之真陰，配葛根滋陰生津，同時(shí)升清降濁，調(diào)暢氣機(jī);山藥則健脾胃補(bǔ)肺氣，脾胃健運(yùn)，則清升濁降;蒼術(shù)健脾燥濕，玄參滋陰清熱而瀉無根之火，二藥相配則燥而不烈，滋而不膩，剛?cè)嵯酀?jì)[1]?？偡浇∑⒅\(yùn)，清胃養(yǎng)陰，升清降濁，脾氣運(yùn)則濕除，胃火清則消谷緩，養(yǎng)陰則口渴除，升清降濁則腑氣通暢。脾胃健，濕熱清，水谷精微輸布正常，則痰濕自去，清自升濁自降，消渴善饑自除，體重血糖自降而復(fù)常。

目前普遍認(rèn)為代謝綜合征的基本病理機(jī)制是胰島素抵抗，而胰島素抵抗的出現(xiàn)除了與胰島素作用通路異常有關(guān)外，也與體內(nèi)炎癥因子的異常有密切關(guān)系。脂肪組織尤其是內(nèi)臟脂肪組織分泌了機(jī)體30%的 IL-6，Tchkonia等[6]研究顯示，在人類胰島素抵抗的個(gè)體中，脂肪細(xì)胞的 IL-6濃度表達(dá)增高，Almuraikhy等[7]的研究也顯示，IL-6與肥胖相關(guān)性的胰島素抵抗相關(guān)，在 IL-6介導(dǎo)下，正常皮下脂肪組織形成受損，進(jìn)而導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。目前大量臨床及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均可表明[8-11]，IL-6不僅參與了胰島素抵抗的發(fā)生，并且在胰島素抵抗、2型糖尿病的發(fā)病過程、糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病過程中均起到關(guān)鍵作用。本研究中模型組大鼠 IL-6水平明顯升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01），藥物干預(yù)后，各藥物組水平均有下降趨勢(shì)，其中桑生高劑量組下降明顯，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01），其余給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。在胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展過程中 TNF-α也起到至關(guān)重要的作用。Swaroop 等[12]檢測(cè)50例2型糖尿病患者的血清TNF-α水平，發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者 TNF-α水平升高，并且 TNF-α水平與 BMI、空腹胰島素水平以及穩(wěn)態(tài)模型 IRI 呈顯著相關(guān)性，提示在2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制中 TNF-α也扮演了重要角色。本課題中模型組大鼠 TNF-α水平明顯升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.01），藥物干預(yù)后，各藥物組水平均有下降趨勢(shì)，但與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。提示胰島素抵抗與微炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，減輕微炎癥反應(yīng)、降低炎癥因子水平，對(duì)改善胰島素抵抗至關(guān)重要。

本研究發(fā)現(xiàn)，桑生地黃湯可能通過降低炎癥因子水平，減輕微炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到改善胰島素抵抗的作用。胰島素抵抗作為代謝綜合征的病理基礎(chǔ)，炎癥因子參與的微炎癥反應(yīng)起到了促進(jìn)胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的重要作用。中醫(yī)認(rèn)為，脾主運(yùn)化水谷精微，脾主散精，脾主升清胃主降濁，脾管理機(jī)體能量代謝，脾虛則能量代謝出現(xiàn)問題，水谷精微不能升散到達(dá)相應(yīng)靶器官被利用，就會(huì)在異位蓄積而形成病理產(chǎn)物，代謝綜合征的各組分癥狀如血糖高、尿酸高、血脂高、腹型肥胖等均可認(rèn)為是水谷精微的異位蓄積，蓄積在血液則導(dǎo)致高血糖、高尿酸、高血脂，蓄積在皮下、內(nèi)臟則導(dǎo)致腹型肥胖，從而形成本虛標(biāo)實(shí)的病癥，故代謝綜合征的中醫(yī)治療健脾補(bǔ)虛為要，大量臨床研究也表明脾虛與胰島素抵抗有相關(guān)性[13-14]，進(jìn)一步佐證了中醫(yī)對(duì)代謝綜合征基本病機(jī)的認(rèn)識(shí);水谷精微異位蓄積，成痰成飲，郁久化熱，從而形成痰濕、熱毒等病理產(chǎn)物，這些病理產(chǎn)物又進(jìn)一步造成機(jī)體的能量代謝失常，也可以認(rèn)為是痰濕、熱毒等病理產(chǎn)物造成微炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而造成胰島素抵抗，形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致代謝綜合征的出現(xiàn)，大量文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行化痰祛濕[15-17]、清熱解毒[18]中藥治療可以改善胰島素敏感性，可能與此類藥物減輕微炎癥反應(yīng)，降低炎癥因子水平有關(guān)。桑生地黃湯健脾、燥濕、清熱，標(biāo)本兼治，補(bǔ)消同施，多位一體，多靶點(diǎn)起效，共奏降低炎癥因子水平，減輕微炎癥反應(yīng)，改善胰島素抵抗之效，從而緩解代謝綜合征各組分癥狀。

中藥復(fù)方制劑以多靶點(diǎn)、全方位作用為擅長，桑生地黃湯多靶點(diǎn)同時(shí)有減輕微炎癥反應(yīng)，改善胰島素抵抗的作用，使復(fù)方制劑作用大于單味中藥作用之和。本研究提示桑生地黃湯對(duì)代謝綜合征大鼠有降低血糖，改善胰島素抵抗，降低炎癥因子水平的作用，后期我科將繼續(xù)從胰島素抵抗及微炎癥反應(yīng)各個(gè)環(huán)節(jié)繼續(xù)探尋桑生地黃湯的更精確作用部位，為桑生地黃湯的臨床應(yīng)用推廣做好準(zhǔn)備工作。

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（收稿日期：2020-12-10）