馬強(qiáng) 陳潔 苗加偉 熊書 龐毅 鄧雪松

中圖分類號 R737.9;R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）17-2073-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.17.05

摘 要 目的：研究木香烴內(nèi)酯（COS）對人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞周期分布及凋亡的影響，并探討其機(jī)制。方法：將人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞分為空白對照組和COS 10、20、30、40、50 μmol/L組，用MTT法檢測COS對細(xì)胞增殖的影響。另將細(xì)胞分為空白對照組和COS低、中、高濃度組（10、20、30 μmol/L），培養(yǎng)24 h后，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布情況，采用Hoechst 33258熒光染色檢測細(xì)胞凋亡情況，采用Western blot法檢測抑癌因子p53、胱天蛋白酶3（caspase-3）、B細(xì)胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶抑制因子1A（p21）、周期蛋白依賴性激酶2（CDK2）和細(xì)胞周期蛋白E（cyclinE）蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：與空白對照組比較，COS可顯著抑制SK-BR-3細(xì)胞的增殖（P<0.05或P<0.01），且呈濃度和時(shí)間依賴趨勢。低、中、高濃度的COS均可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并阻滯細(xì)胞周期于G1/S期（P<0.05或P<0.01）;并可顯著上調(diào)p53、caspase-3、Bax、p21蛋白的表達(dá)（P<0.05或P<0.01），顯著下調(diào)Bcl-2、CDK2、cyclinE蛋白的表達(dá)（P<0.01）。結(jié)論：COS能抑制人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和周期阻滯;其作用機(jī)制可能與調(diào)控p53/Bax/Bcl-2/caspase-3凋亡信號通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞 木香烴內(nèi)酯;SK-BR-3細(xì)胞;細(xì)胞增殖;細(xì)胞周期;細(xì)胞凋亡

Effects of Costunolide on Cell Cycle Distribution and Apoptosis of Breast Cancer SK-BR-3 Cells

MA Qiang1，2，CHEN Jie1，MIAO Jiawei1，XIONG Shu1，PANG Yi1，2，DENG Xuesong1，2（1. Dept. of Basic Medicine， Chongqing Three Gorges Medical College， Chongqing 404120， China; 2. Chongqing Key Laboratory of Development and Utilization of Genuine Medicinal Materials in Three Gorges Reservoir Area， Chongqing 404120， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the effects of costunolide （COS） on the cell cycle distribution and apoptosis of human breast cancer SK-BR-3 cells and its mechanism. METHODS： Human breast cancer SK-BR-3 cells were divided into blank control group， and COS groups of 10， 20， 30， 40， 50 μmol/L. MTT assay was used to detect the effects of COS on cell proliferation. SK-BR-3 cells were divided into blank control group， COS low， medium and high concentration groups （10， 20， 30 μmol/L）. After cultured for 24 h， flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. Hoechst 33258 fluorescence staining was used to detect cell apoptosis. Western blot assay was used to detect the expression of p53， caspase-3， Bcl-2， Bax， p21， CDK2 and cyclinE. RESULTS： Compared with blank control group， COS could significantly inhibit the proliferation of SK-BR-3 cells （P<0.05 or P<0.01）， and in a dose and time-dependent manner. Low， medium and high concentrations of COS could induce cell apoptosis and arrest cell at G1/S phase （P<0.05 or P<0.01）， could significantly up-regulate the protein expression of p53， caspase-3， Bax and p21 （P<0.05 or P<0.01）， and could significantly down-regulate the protein expression of Bcl-2， CDK2 and cyclinE （P<0.01）. CONCLUSIONS： COS can inhibit the proliferation of human breast cancer SK-BR-3 cells and induce cell apoptosis and cell cycle arrest. The mechanism may be related to the regulation of p53/Bax/Bcl-2/caspase-3 apoptosis signal pathway.

KEYWORDS? ?Costunolide; SK-BR-3 cells; Cell proliferation; Cell cycle; Cell apoptosis

乳腺癌（breast cancer）是女性病死率最高的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，其預(yù)防和治療已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題[1]。盡管臨床上有多種乳腺癌的治療手段可選擇，如化療、放療和激素治療等，但上述治療手段存在著導(dǎo)致患者免疫功能下降、消化障礙、炎癥反應(yīng)等諸多副作用，故乳腺癌的治療仍需要更安全、更有效的臨床策略[2]。由此可見，尋找副作用小且效果顯著的抗癌藥物顯得尤為重要。

從藥用植物中提取分離的天然化合物是抗癌藥物的重要來源，這些天然化合物在各種癌癥及其他相關(guān)疾病的治療中已顯現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢[3]。與以單分子為靶點(diǎn)的傳統(tǒng)化療藥物相比，天然化合物能夠靶向同一途徑或多條相關(guān)途徑的多個(gè)因子，具有更好的治療效果和較低的毒副作用[3]。木香烴內(nèi)酯（costunolide，COS）就是其中之一。該化合物是從菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.中分離提取到的，屬于倍半萜內(nèi)酯類化合物，具有抗炎、抗真菌感染、抗氧化等多種藥理學(xué)活性[4]，并對肝癌、白血病、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較為明顯的抑制活性[5-7]。因此，本課題組推測該化合物可能是一種潛在的抗癌治療藥物。盡管目前已有學(xué)者在多種人類腫瘤細(xì)胞上對COS的抑制作用進(jìn)行了探索[5-8]，但該化合物對人乳腺癌細(xì)胞的影響尚未得到證實(shí)。基于此，本研究擬初步探討COS對人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞周期分布和凋亡的影響，并初步探討其潛在機(jī)制，以期為探索乳腺癌的治療方案提供研究基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器包括ELx800型酶標(biāo)儀（美國BioTek公司），CytoFLEX型流式細(xì)胞儀、Allegra-64R型臺式高速冷凍離心機(jī)（美國Beckman公司），MCO-15AC型細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本SANYO公司），ChemiDoc Touch型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司），DMi8A型熒光倒置顯微成像系統(tǒng)（德國Leica公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

COS對照品（批號HY-N0036，純度99.84%）購自美國MCE公司，用二甲基亞砜（DMSO）溶解配制成濃度為100 mmol/L的貯備液，分裝后于-20 ℃下保存，備用。

DMEM高糖培養(yǎng)基、0.25%胰酶（批號分別為C11995500BT、25200-056）均購自美國Gibco公司;4%多聚甲醛（批號P1110）購自北京索萊寶科技有限公司;胎牛血清（FBS）、青霉素及鏈霉素雙抗溶液（批號分別為SH30084.03、J130071）均購自美國Hyclone公司;細(xì)胞周期檢測試劑盒（批號WLA010a）購自沈陽萬類生物科技有限公司;MTT試劑、DMSO（批號分別為1334MG250、BS087）均購自合肥志宏生物技術(shù)有限公司;Hoechst 33258熒光染色試劑盒（批號A3466）購自美國APExBIO公司;ECL化學(xué)發(fā)光顯色液（批號P10100）購自蘇州新賽美生物科技有限公司;RIPA細(xì)胞裂解液、二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測定試劑盒（批號分別為P0013K、P0012）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;兔抗人抑癌因子p53多克隆抗體、兔抗人胱天蛋白酶3（caspase-3）多克隆抗體、兔抗人B細(xì)胞淋巴瘤2（Bcl-2）多克隆抗體、兔抗人Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）多克隆抗體、兔抗人細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶抑制因子1A（p21）多克隆抗體、兔抗人周期蛋白依賴性激酶2（CDK2）多克隆抗體、兔抗人細(xì)胞周期蛋白E（cyclinE）多克隆抗體、兔抗人β-肌動蛋白（β-actin）多克隆抗體（批號分別為ab32389、ab32351、ab32124、ab32503、ab109520、ab32147、ab33911、ab8227）均購自英國Abcam公司;辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（批號TJ271921）購自美國Invitrogen公司;其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 細(xì)胞

人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞系由中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫提供。

2 方法

2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)及分組

將SK-BR-3細(xì)胞接種于含10%FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)基（以下簡稱“完全培養(yǎng)基”）中，置于37 ℃、5%CO2、97%濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)條件下同），待細(xì)胞融合至85%時(shí)用0.25%胰酶消化，再進(jìn)行傳代培養(yǎng)并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。取對數(shù)增殖期的SK-BR-3細(xì)胞，隨機(jī)分為空白對照組和COS 10、20、30、40、50 μmol/L組?？瞻讓φ战M僅加入完全培養(yǎng)基（下同），COS組分別加入含COS終濃度為10、20、30、40、50 μmol/L的完全培養(yǎng)基。上述COS的給藥濃度參考文獻(xiàn)[9-10]和本課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。

2.2 細(xì)胞增殖活性檢測

采用MTT法進(jìn)行檢測。取對數(shù)增殖期的SK-BR-3細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基重懸，制成密度為6×104 mL-1的懸液，按每孔100 μL接種至96孔板中，培養(yǎng)24 h。按“2.1”項(xiàng)下方法將細(xì)胞分組，每組設(shè)9個(gè)復(fù)孔?？瞻讓φ战M加入完全培養(yǎng)基100 μL，各藥物組加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基100 μL;分別于培養(yǎng)24、48、72 h時(shí)，加入終質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的MTT試劑50 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h;吸棄培養(yǎng)基，加入DMSO 150 μL，于搖床上振搖1～2 min后，使用酶標(biāo)儀于490 nm波長處檢測各孔的光密度（OD）值并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率：細(xì)胞生長抑制率=（OD空白對照組-OD檢測組）/OD空白對照組×100%。

2.3 細(xì)胞凋亡率檢測

采用Hoechst 33258熒光染色法進(jìn)行檢測。取對數(shù)增殖期的SK-BR-3細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基重懸，制成密度為5×104 mL-1的懸液，按每孔2 mL接種至含無菌蓋玻片的6孔板中，培養(yǎng)24 h。將細(xì)胞隨機(jī)分為空白對照組和COS低、中、高濃度組（10、20、30 μmol/L，劑量參考“2.2”項(xiàng)下結(jié)果設(shè)置），每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔?？瞻讓φ战M加入完全培養(yǎng)基2 mL，各藥物組加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基2 mL;培養(yǎng)48 h后，按Hoechst 33258熒光染色試劑盒說明書方法進(jìn)行固定、染色，并置于倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照，并參考文獻(xiàn)[11]方法計(jì)算細(xì)胞凋亡率：細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

2.4 細(xì)胞周期分布情況檢測

采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。取對數(shù)增殖期的SK-BR-3細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基重懸，制成密度為5×104 mL-1的懸液，按每皿3 mL接種至直徑60 mm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24 h。按“2.3”項(xiàng)下方法將細(xì)胞分組，每組設(shè)3個(gè)平行皿?？瞻讓φ战M加入完全培養(yǎng)基3 mL，各藥物組加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基3 mL;培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞，加入70%乙醇于4 ℃下固定過夜，隨后用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）洗滌2次，加入RNase A試劑100 μL重懸，于37 ℃水浴中孵育30 min;加入PI染色液500 μL，混勻，于4 ℃避光條件下孵育30 min后，使用流式細(xì)胞儀檢測。使用ModFit LT 4.1細(xì)胞周期分析軟件處理，記錄各周期的細(xì)胞分布情況。

2.5 細(xì)胞凋亡和周期相關(guān)蛋白表達(dá)情況檢測

采用Western blot法進(jìn)行檢測。取對數(shù)增殖期的SK-BR-3細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基重懸，制成密度為5×106 mL-1的懸液，按每皿3 mL接種至直徑60 mm的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24 h。按“2.3”項(xiàng)下方法將細(xì)胞分組，每組設(shè)3個(gè)平行皿?？瞻讓φ战M加入完全培養(yǎng)基3 mL，各藥物組加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基3 mL;培養(yǎng)48 h后，加入RIPA裂解液裂解細(xì)胞，并收集蛋白，采用BCA法測定蛋白濃度。蛋白經(jīng)煮沸變性后，取適量行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上;以5%脫脂奶粉于室溫下封閉2 h，用TBST緩沖液洗滌3次;加入p53、caspase-3、Bcl-2、Bax、p21、CDK2、cyclinE、β-actin一抗（稀釋度均為1 ∶ 1 000），4 ℃孵育過夜;用TBST緩沖液洗滌3次，加入相應(yīng)二抗（稀釋度為1 ∶ 3 000），室溫孵育2 h;加入ECL化學(xué)發(fā)光顯色液顯色后，置于化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下成像。使用Quantity One V4.6.6圖像分析軟件對蛋白條帶灰度值進(jìn)行分析，以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）的灰度值比值表示目標(biāo)蛋白的相對表達(dá)量。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 COS對SK-BR-3細(xì)胞增殖的影響

與空白對照組比較，不同濃度的COS均能顯著抑制SK-BR-3細(xì)胞的增殖（P<0.05或P<0.01），并呈濃度、時(shí)間依賴趨勢，詳見表1。同時(shí)，在研究過程中筆者發(fā)現(xiàn)，當(dāng)COS濃度較高（40、50 μmol/L）、作用時(shí)間較長（72 h）時(shí)，細(xì)胞大量死亡、漂浮，而貼壁細(xì)胞較少，故最終選擇10、20、30 μmol/L的COS作用48 h作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的條件。

3.2 COS對SK-BR-3細(xì)胞凋亡的影響

與空白對照組比較，經(jīng)過低、中、高濃度的COS處理后，細(xì)胞的核染色質(zhì)出現(xiàn)了不同程度的濃染、固縮、邊集等凋亡現(xiàn)象，其凋亡率均較空白對照組顯著升高（P<0.05或P<0.01），且呈濃度依賴趨勢，詳見圖1、表2。

3.3 COS對SK-BR-3細(xì)胞周期分布的影響

與空白對照組比較，經(jīng)過低、中、高濃度的COS處理后，G0/G1期細(xì)胞百分比均顯著升高（P<0.05或P<0.01），S期細(xì)胞百分比均顯著降低（P<0.05或P<0.01），均呈濃度依賴趨勢;而G2/M期的細(xì)胞百分比組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），詳見圖2、表3。

3.4 COS對SK-BR-3細(xì)胞凋亡及周期相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響

與空白對照組比較，經(jīng)過低、中、高濃度的COS處理后，細(xì)胞中p53、caspase-3、Bax、p21蛋白的相對表達(dá)量均顯著升高（P<0.05或P<0.01），而Bcl-2、CDK2、cyclinE蛋白的相對表達(dá)量均顯著降低（P<0.01），均呈濃度依賴趨勢，詳見圖3、表4。

4 討論

癌癥的發(fā)生發(fā)展通常由細(xì)胞增殖與凋亡之間所處的動態(tài)平衡關(guān)系來決定，而抗癌藥物所顯現(xiàn)出的抗癌效果也往往是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等途徑來實(shí)現(xiàn)的[12]。COS是一種具有多種生物學(xué)活性的倍半萜內(nèi)酯化合物，已有研究表明其對皮膚癌、卵巢癌、食管癌等不同來源的人腫瘤細(xì)胞株具有廣譜的細(xì)胞毒性[13-15]。本研究以體外培養(yǎng)的人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞為對象，初步探討了COS對其增殖的抑制作用。MTT法檢測結(jié)果顯示，不同濃度的COS均能顯著減弱細(xì)胞活性，且這種作用呈時(shí)間、濃度依賴趨勢。Hoechst 33258熒光染色結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的COS干預(yù)后，SK-BR-3細(xì)胞的核染色質(zhì)出現(xiàn)明顯的固縮、邊集等凋亡現(xiàn)象。以上結(jié)果提示，COS具有抑制SK-BR-3細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用。

細(xì)胞周期阻滯和凋亡是誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的兩種機(jī)制。有關(guān)細(xì)胞周期調(diào)控的研究顯示，正常細(xì)胞的周期進(jìn)展受到G1、S、G2、M期檢查點(diǎn)的嚴(yán)格控制，而細(xì)胞周期進(jìn)展檢查點(diǎn)的改變會導(dǎo)致異常的細(xì)胞增殖和腫瘤的發(fā)生發(fā)展，例如腫瘤細(xì)胞常因上述檢查點(diǎn)出現(xiàn)缺陷而導(dǎo)致其無限制增殖[16]。許多抗腫瘤藥物在特定的檢測點(diǎn)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[17]。Hua等[18]的研究顯示，COS可將人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞周期阻滯于G1/S期，從而抑制該細(xì)胞的增殖。本研究結(jié)果顯示，COS低、中、高濃度組G0/G1期細(xì)胞百分比均顯著升高，S期細(xì)胞百分比均顯著降低，提示COS可阻滯SK-BR-3細(xì)胞于G1/S期，從而抑制細(xì)胞的增殖，且這種作用呈濃度依賴趨勢。由此推測，細(xì)胞周期G1/S期阻滯可能是COS抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制之一。

p53是一種腫瘤抑制蛋白，在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程、激活檢查點(diǎn)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用;p21是Clp家族成員之一，位于p53因子下游，也是p53最重要的下游因子之一[19]。p21基因編碼的p21蛋白是目前已知的具有最廣泛激酶抑制活性的細(xì)胞周期抑制蛋白，能抑制cyclinE-CDK2復(fù)合體的活性;后者會使視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白不能發(fā)生磷酸化、轉(zhuǎn)錄因子E2F不能被釋放，從而使細(xì)胞周期停滯在G1期[19-20]。本研究結(jié)果顯示，低、中、高濃度的COS均可使p21蛋白（p53的下游靶標(biāo)）表達(dá)上調(diào)，同時(shí)使CDK2和cyclinE蛋白表達(dá)下調(diào);而cyclinE-CDK2復(fù)合體的正常表達(dá)在細(xì)胞G1/S期的轉(zhuǎn)折中起著重要作用，這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步解釋了COS導(dǎo)致人乳腺癌細(xì)胞G1/S期阻滯的潛在機(jī)制。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡引起組織損傷的一種生理反饋[21]。對于目前癌癥治療常用的絕大多數(shù)藥物而言，其發(fā)揮抗癌作用的機(jī)制主要是通過激活并啟動細(xì)胞凋亡途徑以達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的[22-23]。研究表明，p53是一種腫瘤抑制蛋白，可通過調(diào)節(jié)凋亡介導(dǎo)蛋白的表達(dá)來改變線粒體膜的通透性，從而觸發(fā)細(xì)胞凋亡[24]。Bcl-2蛋白家族是一個(gè)調(diào)節(jié)線粒體途徑的凋亡調(diào)節(jié)蛋白大家族，其主要以Bax（促凋亡蛋白）和Bcl-2（抗凋亡蛋白）為代表。其中，Bcl-2蛋白是由控制線粒體的相關(guān)凋亡因子所釋放的主要調(diào)節(jié)因子，可通過調(diào)節(jié)膜電位而控制線粒體外膜通透性[25-26];Bax一般存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)接收到凋亡信號時(shí)，Bax會重新定位于線粒體表面，在其表面構(gòu)成跨線粒體膜的孔，導(dǎo)致膜電位降低、膜通透性增加，從而釋放凋亡因子、活化下游caspase，進(jìn)而激活caspase-3、啟動caspase級聯(lián)反應(yīng)，最終誘發(fā)細(xì)胞凋亡[27]。因此，為進(jìn)一步探討COS誘導(dǎo)SK-BR-3細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，本研究檢測了COS對其凋亡途徑關(guān)鍵調(diào)控因子p53、Bax、Bcl-2、caspase-3表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，低、中、高濃度的COS均可使p53、Bax、caspase-3蛋白的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)使Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào)。上述結(jié)果表明，p53及線粒體介導(dǎo)的caspase激活途徑在COS誘導(dǎo)的SK-BR-3細(xì)胞凋亡中起了關(guān)鍵作用。

綜上，COS可有效抑制人乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞活性，加速細(xì)胞凋亡，并使細(xì)胞周期阻滯在G1/S期;其作用機(jī)制可能與調(diào)控p53/Bax/Bcl-2/caspase-3凋亡信號通路有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] TZIKAS A K，NEMES S，LINDERHOLM B K. A compa- rison between young and old patients with triple-negative breast cancer：biology，survival and metastatic patterns[J]. Breast Cancer Res Treat，2020，182（10）：643-654.

[ 2 ] LEE J E，KWON Y J，BAEK H S，et al. Synergistic induc- tion of apoptosis by combination treatment with mesupron and auranofin in human breast cancer cells[J]. Arch Pharm Res，2017，40（6）：746-759.

[ 3 ] GUPTA A K，RATHER M A，JHA A K，et al. Artocarpus lakoocha Roxb. and Artocarpus heterophyllus Lam.? ? ?flowers：new sources of bioactive compounds[J]. Plants （Basel），2020，9（10）：1329-1345.

[ 4 ] KIM D Y，CHOI B Y. Costunolide：a bioactive sesquiterpene lactone with diverse therapeutic potential[J]. Int J Mol Sci，2019，20（12）：2926-2946.

[ 5 ] LIN X，PENG Z，SU C. Potential anti-cancer activities and mechanisms of costunolide and dehydrocostuslactone[J]. Int J Mol Sci，2015，16（5）：10888-10906.

[ 6 ] CAI H，LI L，JIANG J，et al. Costunolide enhances sensitivity of K562/ADR chronic myeloid leukemia cells to doxorubicin through PI3K/Akt pathway[J]. Phytother Res，2019，33（6）：1683-1688.

[ 7 ] HU M，LIU L，YAO W. Activation of p53 by costunolide blocks glutaminolysis and inhibits proliferation in human colorectal cancer cells[J]. Gene，2018，678：261-269.

[ 8 ] CHEN J，CHEN B，ZOU Z，et al. Costunolide enhances doxorubicin-induced apoptosis in prostate cancer cells via activated mitogen-activated protein kinases and generation of reactive oxygen species[J]. Oncotarget，2017，8（64）：107701-107715.

[ 9 ] ZHANG C，LU T，WANG G D，et al. Costunolide，an active sesquiterpene lactone，induced apoptosis via ROS-mediated ER stress and JNK pathway in human U2OS cells[J]. Biomed Pharmacother，2016，80：253-259.

[10] WANG Z，ZHAO X，GONG X G. Costunolide induces lung adenocarcinoma cell line A549 cells apoptosis through ROS（reactive oxygen species）-mediated endoplasmic reticulum stress[J]. Cell Biol Int，2016，40（3）：289-297.

[11] 苗加偉，陳潔，鄧雪松，等.去氫木香內(nèi)酯抑制人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖及促凋亡[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2020，40（10）：1369-1373.

[12] LI X. The inducers of immunogenic cell death for tumor immunotherapy[J]. Tumori，2017，104（1）：1-8.

[13] LEE S H，CHO Y C，Lim J S. Costunolide，a sesquiterpene lactone，suppresses skin cancer via induction of apoptosis and blockage of cell proliferation[J]. Int J Mol Sci，2021，22（4）：2075-2091.

[14] YANG Y I，KIM J H，CHOI J H，et al. Costunolide indu- ces apoptosis in platinum-resistant human ovarian cancer cells by generating reactive oxygen species[J]. Gynecol Oncol，2011，123（3）：588-596.

[15] HUA P，SUN M，ZHANG G，et al. Costunolide induces apoptosis through generation of ROS and activation of p53 in human esophageal cancer ECA-109 cells[J]. J? ? Biochem Mol Toxic，2016，30（9）：462-469.

[16] SUN J M，XU H T，ZHAO L，et al. Induction of cell-cycle arrest and apoptosis in human cholangiocarcinoma cells by pristimerin[J]. J Cell Biochem，2019，120（7）：12002- 12009.

[17] XIA L，WEN H，HAN X，et al. Luteinizing hormone inhi- bits cisplatin-induced apoptosis in human epithelial ova- rian cancer cells[J]. Oncol Lett，2016，11（3）：1943-1947.

[18] HUA P，ZHANG G，ZHANG Y，et al. Costunolide indu- ces G1/S phase arrest and activates mitochondrial-media- ted apoptotic pathways in SK-MES-1 human lung squamous carcinoma cells[J]. Oncol Lett，2016，11（4）：2780- 2786.

[19] LI G，ZHANG R，ZHANG X，et al. Human colorectal cancer derived-MSCs promote tumor cells escape from sene- scence via p53/p21 pathway[J]. Clin Transt Oncol，2020，22（4）：503-511.

[20] LIN C P ，LIN C S ，LIN H H ，et al. Bergapten induces G1 arrest and pro-apoptotic cascade in colorectal cancer cells associating with p53/p21/PTEN axis[J]. Environ Toxicol，2019，34（3）：303-311.

[21] YU K，YANG X，LI Y，et al. Synthesis of cucurbitacin Ⅱa derivatives with apoptosis-inducing capabilities in human cancer cells[J]. RSC Advances，2020，10（7）：3872-3881.

[22] HENGARTNER M O. The biochemistry of apoptosis[J].Nature，2000，407（6805）：770-776.

[23] 邵鑫，蔣先虹，王瑞，等.紫草素對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116自噬和凋亡的影響[J].中國藥房，2021，32（1）：51-55.

[24] CORDANI M，BUTERA G，PACCHIANA R，et al. Molecular interplay between mutant p53 proteins and auto- phagy in cancer cells[J]. Biochim Biophys Acta Rev? ? Cancer，2017，1867（1）：19-28.

[25] CAMPBELL K J，TAIT S W G. Targeting Bcl-2 regulated apoptosis in cancer[J]. Open Biol，2018，8（5）：180002.

[26] 趙冀安，馬艷榮，聶文佳，等.溴苯基姜黃素對膽管癌細(xì)胞凋亡、遷移和侵襲的影響及機(jī)制研究[J].中國藥房，2021，32（4）：467-474.

[27] MOTAMED H R，SHARIATI M，AHMADI R，et al. The apoptotic effects of progesterone on breast cancer （MCF-7） and human osteosarcoma （MG-636） cells[J]. Physiol Int，2020，107（3）：406-418.

（收稿日期：2021-03-04 修回日期：2021-07-27）

（編輯：張?jiān)拢?/p>