劉紹貴, 和嘉榮, 雷 衡, 蘇華偉, 歐陽(yáng)曉芳, 王春蘭, 李 鴻 楊亮宇,上官步敏, 石曉兵, 卿勝奎, 賈志虎, 董 紅

(1.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昆明 650212；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院， 昆明 650201；3.加拿大太平洋遺傳育種公司，北京100107；4.新疆畜牧科學(xué)院， 烏魯木齊 830091)

隨著現(xiàn)代肉牛產(chǎn)業(yè)在我國(guó)的高速發(fā)展，引進(jìn)國(guó)外優(yōu)秀種牛改良國(guó)內(nèi)地方品種產(chǎn)生明顯的效果，創(chuàng)造了較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。然而多年來(lái)我國(guó)年年需要花巨資從發(fā)達(dá)國(guó)家引進(jìn)活體種牛和胚胎，引進(jìn)的良種數(shù)量很小，改良的牛群非常有限。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019年畜禽品種振興戰(zhàn)略，由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司組織，組建了豬、雞、牛、羊等7個(gè)公關(guān)組，構(gòu)建了1(企業(yè)牽頭)+(首席科學(xué)家)+N (科研院所、龍頭企業(yè)等)的產(chǎn)學(xué)研緊密聯(lián)和創(chuàng)新體系。該振興戰(zhàn)略旨在推動(dòng)企業(yè)，充分發(fā)揮引進(jìn)良種優(yōu)勢(shì)，擴(kuò)大引進(jìn)種質(zhì)的改良效果。目前我國(guó)優(yōu)秀種牛存欄量已達(dá)到一定的規(guī)模，并且引進(jìn)良種通過(guò)不斷選育馴化，能更好地適應(yīng)引種地區(qū)的環(huán)境。利用胚胎生物技術(shù)，可以幾倍甚至幾十倍地?cái)U(kuò)大良種后代的數(shù)量，加速我國(guó)肉牛良種群體的發(fā)展。

云南省種畜繁育推廣中心于1996—1997年分兩批共引進(jìn)131頭加系肉用型西門(mén)塔爾種母牛，通過(guò)多年的本土馴化和選育，目前種牛存欄已達(dá)到400余頭，是國(guó)家畜禽品種振興戰(zhàn)略“華西牛”公關(guān)組單位成員之一。本項(xiàng)目“充分利用優(yōu)秀種質(zhì)資源，加快良種牛擴(kuò)群進(jìn)程”選擇10-16月齡優(yōu)秀西門(mén)塔爾種母牛，通過(guò)超數(shù)排卵技術(shù)生產(chǎn)胚胎，充分利用母牛適配月齡前后期機(jī)會(huì)，生產(chǎn)2～3次胚胎，通過(guò)胚胎移植可獲得更多的優(yōu)秀種牛后代，大大提高種母牛的利用率，加快種牛的擴(kuò)群進(jìn)程；對(duì)體內(nèi)胚胎生產(chǎn)后的小母牛成年后的生殖狀況做進(jìn)一步研究表明其受胎率泌乳情況與正常牛無(wú)明顯差異[1]。成功的胚胎生產(chǎn)受到許多內(nèi)部和外部因素的影響。焦蟲(chóng)病呈地區(qū)性和季節(jié)性流行，主要因微小牛蜱地理分存很廣泛，廣泛分布于我國(guó)華北、華中、華南、和西南地區(qū)的大部分省區(qū)[2]。在放牧環(huán)境下，牛只極易受到蚊蟲(chóng)的叮咬。該項(xiàng)目實(shí)施中，部分放牧牛只因受到牛蜱叮咬，犯上了焦蟲(chóng)病。本文總結(jié)了焦蟲(chóng)病對(duì)供體牛胚胎生長(zhǎng)和胚胎質(zhì)量的影響，為南方山區(qū)地區(qū)在春夏季實(shí)施胚胎生產(chǎn)提供有益經(jīng)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供體牛選擇

選擇10～16月齡優(yōu)秀供體種母牛41頭，其中21頭舍飼，20頭人工草場(chǎng)放牧。項(xiàng)目實(shí)施前所選擇的供體母牛均在7～8層膘之間，采食正常，體溫37.8 ℃～38.3 ℃之間，精神狀態(tài)良好。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材及試劑藥品

體視顯微鏡 、溫度控制胚胎冷凍儀、液氮罐、牛體溫計(jì)、輸精槍、胚胎移植槍、沖卵管、埋栓器、FHK過(guò)濾杯、培養(yǎng)皿(90 mm、35 mm、4孔)、集卵皿、鋼芯、擴(kuò)宮棒、卵回收器、100 ml注射器、20 mL注射器、胚胎細(xì)管、等一次性耗材。

CIDR、FSH、PG、律胎素、VA、VE、沖配液、雌二醇、利多卡因(人用)、土霉素粉、靜松靈、沖卵液、保存液、冷凍液。

冷凍精液：美加系進(jìn)口常規(guī)冷凍精液來(lái)自先馬士商貿(mào)(上海)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕?yàn)證放牧條件和舍飼條件下10～16月齡供體母牛生產(chǎn)胚胎質(zhì)量與數(shù)量的差異，實(shí)驗(yàn)全過(guò)程兩組牛只每天進(jìn)行兩次體溫檢測(cè)，同期發(fā)情實(shí)驗(yàn)方案均采用CIDR+FSH+PG 16 d方案。放牧牛只埋栓、超排和人工授精后繼續(xù)放牧。

1.4 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

將所選擇的供體母牛隨機(jī)分成兩組，A組20頭采用舍飼，飼料配方：全株玉米青貯頭均13 kg、全株燕麥干草頭均3 kg、綠豆殼粉頭均2 kg、營(yíng)養(yǎng)舔磚自由采食。B組20頭放牧于牧草豐富的人工草場(chǎng)，牧草種類(lèi)多年生黑麥草、鴨茅草、白三葉和狗尾草，營(yíng)養(yǎng)舔磚自由采食。飼養(yǎng)第8天開(kāi)始進(jìn)行同期發(fā)情處理并每天進(jìn)行兩次體溫檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)埋栓后第8天上午拆栓，第9天上午肌注生源100 μg/頭，全天觀察發(fā)情并做準(zhǔn)確記錄。下午第一次配種，在穩(wěn)定發(fā)情后10～12 h，一支精液/頭，第10天上午第二次配種，在第一次配種后12 h，一支精液/頭；直至第16天沖胚。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)放牧牛只相繼出現(xiàn)體溫升高情況，經(jīng)診斷為焦蟲(chóng)病并及時(shí)注射貝尼爾進(jìn)行治療，注射后牛只均在12 h內(nèi)體溫恢復(fù)至38～38.5 ℃之間。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼養(yǎng)條件超排對(duì)比

不同飼養(yǎng)環(huán)境條件下牛只受到外界干擾因素不同，放牧條件下牛只受到天氣變化、外界溫度、飼料營(yíng)養(yǎng)、年齡差別、對(duì)寄生蟲(chóng)抵抗力等因素影響較大，通常情況下，牛蜱對(duì)經(jīng)常放牧牛只或原已經(jīng)發(fā)過(guò)焦蟲(chóng)病的牛只影響較小，對(duì)從未放牧過(guò)的牛只影響較大；舍飼環(huán)境性對(duì)穩(wěn)定，飼料營(yíng)養(yǎng)條件穩(wěn)定，外界對(duì)牛只影響較小；兩組牛只體溫測(cè)量及胚胎生產(chǎn)情況(見(jiàn)表1)。

表1 放牧條件胚胎生產(chǎn)結(jié)果匯總

由表1可以看出，放牧條件下導(dǎo)致焦蟲(chóng)病牛只生產(chǎn)胚胎總數(shù)136枚，頭均10.5枚，放牧條件下體溫正常牛只胚胎生產(chǎn)總數(shù)82枚，頭均11.7枚；放牧條件下發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚總數(shù)16枚，頭均1.23枚；放牧條件下未發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)47枚，頭均6.71枚；

由表2可以看出，舍飼條件下生產(chǎn)胚胎總數(shù)267枚，頭均13.35枚；舍飼條件下生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)157枚，頭均7.85枚；綜合分析表1和表2可得：放牧條件下發(fā)病牛只與未發(fā)病牛只及舍飼條件下牛只胚胎生產(chǎn)總數(shù)比較差異均不顯著(P>0.05)，經(jīng)檢驗(yàn)放牧條件下發(fā)病牛只生產(chǎn)可用胚胎總數(shù)和頭均生產(chǎn)可用胚胎數(shù)均明顯低于放牧條件下未發(fā)病牛只和舍飼條件牛只，差異均極顯著(P<0.01)。放牧條件下未發(fā)病牛只頭均生產(chǎn)胚胎數(shù)低于舍飼條件下牛只，但差異不顯著(P>0.05)。

表2 舍飼條件胚胎生產(chǎn)結(jié)果匯總

2.2 重復(fù)超排牛只兩次超排對(duì)比

在良好的飼養(yǎng)管理前提下，高強(qiáng)度重復(fù)超排以1個(gè)月為超排間隔，超排3～4次為宜[3]。為了檢驗(yàn)牛只個(gè)體因素與焦蟲(chóng)病的相關(guān)性，我們挑選出發(fā)病牛只14頭采用舍飼的方式進(jìn)行第二次重復(fù)超排，舍飼條件下進(jìn)行超排過(guò)程中出現(xiàn)其中一頭體溫升至38.5 ℃外，其余牛只體溫均正常；另外因該批次牛只選擇重復(fù)超排的時(shí)間僅僅間隔兩個(gè)月，部分牛只體況恢復(fù)還未達(dá)到理想狀態(tài)，一定程度上影響了超排的效果；超排情況見(jiàn)附表2。

由表3數(shù)據(jù)可以看出，放牧條件下頭均生產(chǎn)的可用胚胎為3.25枚，僅占頭均生產(chǎn)總胚數(shù)的23.21%，而舍飼條件重復(fù)超排牛只頭均可用胚為5.42枚，可用率為40.37%，重復(fù)超排的胚胎可用率高于第一次的結(jié)果，差異極顯著(P<0.01)，但生產(chǎn)的總胚胎數(shù)差別不大,牛重復(fù)超排3次對(duì)可用胚數(shù)影響不大[4]。充分表明這與第一次超排出現(xiàn)嚴(yán)重的焦蟲(chóng)病狀有關(guān)。

利用兩組牛只生產(chǎn)的胚胎在相同的環(huán)境下，采用同一方案，采用同期發(fā)情處理受體牛47頭，利用放牧條件下生產(chǎn)的胚胎進(jìn)行檢查移植30頭；采用同期發(fā)情處理受體牛34頭，利用舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎進(jìn)行檢查移植26頭；受體母牛受胎情況如表3。

表3 重復(fù)超排牛只胚胎生產(chǎn)結(jié)果比較

由表4可以看出，放牧條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率為27%，舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率為46%，放牧條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率明顯低于舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎移植受胎率(P<0.05);說(shuō)明放牧條件下生產(chǎn)的胚胎受胎率低的原因可能是胚胎生產(chǎn)時(shí)供體牛發(fā)焦蟲(chóng)病，胚胎質(zhì)量受到影響。為查找原因采用舍飼條件下生產(chǎn)的胚胎進(jìn)行移植，在受體牛及飼養(yǎng)管理?xiàng)l件沒(méi)變的情況下移植26頭，受胎率正常。

表4 兩組牛只生產(chǎn)的胚胎移植受胎情況

3 討論

針對(duì)南方焦蟲(chóng)病高發(fā)的特點(diǎn)，放牧條件下牛只極易感染焦蟲(chóng)病，主要通過(guò)硬蜱傳播，引起宿主發(fā)發(fā)熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿、血尿等癥狀，如不及時(shí)治療，癥狀出現(xiàn)3～5 d后因各臟器衰竭而死亡[5]。當(dāng)然，放牧條件因外界環(huán)境復(fù)雜，氣溫變化較快，飼草供給營(yíng)養(yǎng)不全面，晝夜溫差較大極易造成牛只感冒，這些都是影響胚胎生產(chǎn)的重要因素；因此夏季生產(chǎn)胚胎應(yīng)提前一周以上由放牧轉(zhuǎn)為舍飼，并立即進(jìn)行體表驅(qū)蟲(chóng)或藥物預(yù)防；應(yīng)避免供體牛超排前20 d內(nèi)打疫苗和體內(nèi)驅(qū)蟲(chóng)，體表驅(qū)蟲(chóng)至少應(yīng)提前一周并加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)供給；建議在春冬焦蟲(chóng)病低發(fā)季節(jié)多開(kāi)展胚胎生產(chǎn)。

4 結(jié)論

放牧條件下牛只極易感染焦蟲(chóng)病，而焦蟲(chóng)病最明顯的臨床癥狀就是短期內(nèi)體溫上升，發(fā)焦蟲(chóng)病牛只體溫最高可到42 ℃，當(dāng)發(fā)病牛只體溫升至39 ℃以上時(shí)，因此體溫升高極易造成胚胎早期退化或死亡，配種后也會(huì)導(dǎo)致精子早衰造成卵子不受精等情況，將嚴(yán)重影響可用胚胎的產(chǎn)量和質(zhì)量，大大降低了受體牛的受胎率。