周靜，肖立新

（1.江西省贛州市第五人民醫(yī)院結(jié)核科，江西贛州 341000；2.興國(guó)縣結(jié)核病防治所結(jié)核科，江西贛州 342400）

結(jié)核病具有傳染性的特點(diǎn)，主要是因人體免疫功能減弱而感染結(jié)核分枝桿菌所致，一旦侵入人體腦膜組織，則會(huì)誘發(fā)結(jié)核性腦膜炎，嚴(yán)重影響人們的身體健康[1]。腦脊液留取具有一定的難度且細(xì)胞偏少，不利于臨床早期診斷結(jié)核性腦膜炎。因此，探尋一種快捷、方便、準(zhǔn)確輔助診斷結(jié)核性腦膜炎的方式，為臨床及時(shí)有效治療結(jié)核性腦膜炎患者具有重要意義[2]。結(jié)核性腦膜炎與免疫應(yīng)答相關(guān)，機(jī)體易在結(jié)核分枝桿菌刺激情況下釋放ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ等免疫應(yīng)答因子[3]。基于此，本研究探究結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液細(xì)胞因子檢測(cè)情況，旨在為臨床輔助診斷結(jié)核性腦膜炎提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年12月至2020年6月本院接收的114疑似顱神經(jīng)疾病患者作為研究對(duì)象，根據(jù)臨床診斷結(jié)果分為研究組（結(jié)核性腦膜炎患者，n=57）和常規(guī)組（非結(jié)核性腦膜炎患者，n=57）。研究組男30例，女27例；年齡21～69歲，平均（39.6±10.8）歲。常規(guī)組男31例，女26例；年齡21～70歲，平均（39.9±11.3）歲。兩組患者臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。所有患者均對(duì)本研究知情同意，并自愿簽署知情同意書(shū)。本研究已通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法將保存于-80℃環(huán)境下的腦脊液標(biāo)本取出，復(fù)溫，采用ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)腦脊液細(xì)胞因子水平，包括ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ。取100μL待測(cè)樣本加入試劑盒的微孔中，在水浴箱中進(jìn)行孵育，溫度為36℃，時(shí)間為90 min，棄上清后清洗5次。再選取100μL生物素化抗體工作液（已經(jīng)提前稀釋配置好），在水浴箱中進(jìn)行孵育，溫度為36℃，時(shí)間為60 min，清潔板5次；加入100μL酶濃縮工作液，在36℃環(huán)境下進(jìn)行30 min孵育，清潔板5次后再添加TMB顯色進(jìn)行15 min孵育，最后給予終止液，在波長(zhǎng)450 nm下，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定A值（吸光度），以S（樣本A值）/N（陰性對(duì)照A值），其中＞2.0為陽(yáng)性，同時(shí)，詳細(xì)記錄各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)水平。

1.3 觀察指標(biāo)比較兩組腦脊液細(xì)胞因子（ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ）水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間率（%）比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組腦脊液細(xì)胞因子水平比較研究組ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平均明顯高于常規(guī)組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組腦脊液細(xì)胞因子水平比較（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

表1 兩組腦脊液細(xì)胞因子水平比較（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

注：ESAT-6，早期分泌靶抗原6；IL-10，白細(xì)胞介素-10；TNF-α，腫瘤壞死因子-α；IFN-γ，干擾素-γ

組別研究組常規(guī)組t值P值病例57 57 ESAT-6 266.6±34.5 7.7±1.5 22.450＜0.05 IL-10 17.7±8.6 14.6±7.9 16.785＜0.05 TNF-α 90.3±44.6 11.3±5.1 20.638＜0.05 IFN-γ 100.3±49.6 33.2±16.6 23.977＜0.05

2.2 觀察組患者腦脊液細(xì)胞因子相關(guān)性分析相關(guān)性分析顯示，IFN-γ與ESAT-6呈正相關(guān)（r=0.96，P＜0.05）。IL-10與ESAT-6、TNF-α、IFN-γ無(wú)明顯相關(guān)性；TNF-α與ESAT-6、IFN-γ無(wú)明顯相關(guān)性；ESAT-6與TNF-α明顯無(wú)明顯相關(guān)性。

2.3 單一指標(biāo)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)診斷效能比較4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)敏感度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于單一指標(biāo)檢測(cè)（P＜0.05）；單一指標(biāo)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)特異度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 單一指標(biāo)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)診斷效能比較（%）Table 2 Comparison of diagnostic efficiency between single index detection and combined detection(%)

3 討論

結(jié)核性腦膜炎發(fā)生后，會(huì)激活CD4+、巨噬細(xì)胞、星形細(xì)胞而分泌出大量的細(xì)胞因子，如干擾素、白介素等[4]。早期感染結(jié)核分枝桿菌后，會(huì)刺激人體產(chǎn)生高度特異性的ESAT-6，而ESAT-6僅分布于致病性結(jié)核桿菌中，因此，避免了卡介苗、非致病性結(jié)核桿菌檢測(cè)結(jié)果的影響。有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌在羅氏培養(yǎng)基上分泌的ESAT-6水平偏低，但結(jié)核分枝桿菌被巨噬細(xì)胞吞噬后，ESAT-6水平呈升高趨勢(shì)。說(shuō)明腦脊液細(xì)胞因子ESAT-6過(guò)高時(shí)，細(xì)胞已被結(jié)核分枝桿菌入侵且已形成致病性較高的狀態(tài)[5]。在結(jié)核性腦膜炎患者群體中，腦脊液中存在較少的結(jié)核分枝桿菌，鑒于ESAT-6指標(biāo)特殊性，有望成為臨床輔助診斷結(jié)核性腦膜炎患者最重要、最主要的檢測(cè)指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，研究組ESAT-6為（266.6±34.5）pg/mL，明顯高于常規(guī)組的（7.7±1.5）pg/mL（P＜0.05）。表明臨床輔助診斷結(jié)核性腦膜炎過(guò)程中ESAT-6具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

IL-10因子能在抗結(jié)核過(guò)程中抑制巨噬細(xì)胞的表達(dá)，并抑制刺激因子，一定程度上降低細(xì)胞免疫功能，進(jìn)而延緩結(jié)核性腦膜炎病理變化。趙玉等[6]研究表明，結(jié)核性腦膜炎患者ESAT-6、IL-10水平明顯高于健康體檢者。本研究結(jié)果表明，研究組腦脊液細(xì)胞因子IL-10水平顯著高于常規(guī)組（P＜0.05）。提示IL-10因子在結(jié)核性腦膜炎患者機(jī)體中呈高表達(dá)狀態(tài)。人體感染結(jié)核分枝桿菌后，會(huì)對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生刺激，進(jìn)而釋放TNF-α因子，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞殺傷結(jié)核分枝桿菌的能力[7]。在免疫應(yīng)答反應(yīng)過(guò)程中，IFN-γ具有雙重作用，不僅可促使免疫應(yīng)答，且還能充分發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用。IFN-γ在結(jié)核性腦膜炎患者呈高表達(dá)，提示腦膜巨噬細(xì)胞對(duì)結(jié)核分枝桿菌清除能力增強(qiáng)[8]。本研究結(jié)果表明，研究組TNF-α、IFN-γ明顯高于常規(guī)組（P＜0.05）。表明結(jié)核性腦膜炎患者具有較高的TNF-α、IFN-γ水平，臨床可考慮將其作為早期診斷結(jié)核性腦膜炎患者感染的主要指標(biāo)。相關(guān)性分析表明，僅有IFN-γ與ESAT-6呈正相關(guān)（P＜0.05），其他指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性，分析原因?yàn)?，作為T淋巴細(xì)胞的ESAT-6靶抗原，可在一定程度上誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞并刺激生成干擾素γ[9]。此外，本研究中4種檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)敏感度、陰性陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均高于單一指標(biāo)檢測(cè)（P＜0.05）。說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于臨床早期輔助確診結(jié)核性腦膜炎的應(yīng)用價(jià)值更高。

結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液細(xì)胞因子表達(dá)水平較高，ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ聯(lián)合檢測(cè)具有敏感度較高，有助于臨床輔助診斷，值得臨床推廣運(yùn)用。