薛玉峰，張會(huì)平，王 芳，郝宗生

(涿州市醫(yī)院 a.耳鼻喉科；b.藥劑科，河北涿州 072750)

鼻咽癌是一種起源于鼻咽部上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其進(jìn)展隱匿，有很高的惡性程度，多數(shù)患者發(fā)展到臨床晚期才發(fā)現(xiàn)，致使其預(yù)后較差，5年生存率較低[1]。因此，尋找一種對(duì)鼻咽癌早期診斷的生物標(biāo)志物顯得非常重要。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一類(lèi)單鏈、進(jìn)化高度保守的小分子非編碼RNA，參與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[2-3]。研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌中miR-144-3p 及miR-151-3p 存在異常表達(dá)，其通過(guò)調(diào)控多種靶基因的生物學(xué)功能參與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展，有望作為診斷鼻咽癌的潛在標(biāo)志物[4-5]。但關(guān)于miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌中的臨床診斷價(jià)值尚未闡明。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)鼻咽癌患者血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表達(dá)水平，分析其與鼻咽癌病理特征的關(guān)系及診斷鼻咽癌的價(jià)值，為臨床提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取涿州市醫(yī)院2016年1月～2020年7月收治鼻咽癌患者106 例，男性63 例，女性43例，年齡36～78（59.20±12.75）歲。依據(jù)臨床分期：I 期12 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期50 例，Ⅳ期25 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：頸部伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：首次確診鼻咽癌，經(jīng)鼻咽部組織活檢病理學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往已接受放療、化療或其他抗腫瘤治療者，并發(fā)其他惡性腫瘤者。另選取同期正常者50 例作為對(duì)照組，男性32 例，女性18 例，年齡38～75（60.28±10.53）歲。兩組年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究與患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 儀器與試劑 ABI 7500 型熒光定量PCR 儀（美國(guó)ABI 公司），PCR 試劑盒購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司，RNeasy 試劑盒、miRNA Easy 試劑盒和TRIzol 試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Qiagen 公司，離心機(jī)為美國(guó)ABI 公司產(chǎn)品。生化分析儀為日立7600型全自動(dòng)生化分析儀。

1.3 方法 所有研究對(duì)象均采集空腹靜脈血3ml，離心分離血清，在ABI 7500 型熒光定量PCR 儀上檢測(cè)miR-144-3p 及miR-151-3p。PCR 總反應(yīng)體系為20μl：1μl 引物及探針Mix（20×），10μl TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μl 反向轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μl 雙蒸餾水；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min；95℃變性15 s，60℃退火60 s，進(jìn)行45 個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct法計(jì)算miR-144-3p 及miR-151-3p 水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。應(yīng)用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)分析miR-144-3p 及miR-151-3p 診斷鼻咽癌的價(jià)值。采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-144-3p 及miR-151-3p 水平比較 鼻咽癌組血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表達(dá)水平分別為2.36±1.05 和3.58±1.73，均明顯高于正常對(duì)照組（0.82±0.27 和0.97±0.36），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.001）。

2.2 miR-144-3p 及miR-151-3p 與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p 表達(dá)水平升高與臨床分期高、分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。

表1 miR-144-3p 及miR-151-3p 與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系（n=106,±s）

表1 miR-144-3p 及miR-151-3p 與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系（n=106,±s）

類(lèi) 別nmiR-144-3pt 值P 值miR-151-3pt 值P 值病理類(lèi)型 鱗狀細(xì)胞癌492.32±1.05 0.8710.375 3.50±1.66 1.1730.245非角化型402.39±0.973.62±1.74未分化型172.44±1.083.70±1.78臨床分期 Ⅰ～Ⅱ期311.68±0.57 12.153<0.001 2.30±1.06 16.375<0.001Ⅲ～Ⅳ期753.05±1.204.72±2.18分化程度 中高分化631.94±0.73 5.8240.002 2.66±1.17 10.726<0.001低分化432.80±1.104.45±1.96淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有513.27±1.28 14.285<0.001 4.93±2.25 19.307<0.001無(wú)551.60±0.542.18±1.03遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 有373.35±1.31 16.170<0.001 5.15±2.30 21.286<0.001無(wú)691.56±0.502.04±1.03

2.3 miR-144-3p 及miR-151-3p 診斷鼻咽癌的價(jià)值 見(jiàn)表2 和圖1。血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表達(dá)水平診斷鼻咽癌的最佳截?cái)嘀捣謩e為1.61和2.25，二者聯(lián)合診斷鼻咽癌的曲線(xiàn)下面積（0.937，95%CI：0.875～0.996）明顯高于單項(xiàng)miR-144-3p（0.820，95%CI：0.762～0.881）和miR-151-3p（0.858，95%CI：0.797～0.915），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其敏感度為95.3%，特異度為87.0%。

圖1 miR-144-3p 及miR-151-3p 診斷鼻咽癌的ROC 曲線(xiàn)

表2 miR-144-3p 及miR-151-3p 診斷鼻咽癌的價(jià)值

2.4 miR-144-3p 表達(dá)水平與miR-151-3p 的相關(guān)性 見(jiàn)圖2。相關(guān)分析顯示，鼻咽癌患者血清miR-144-3p 表達(dá)水平與miR-151-3p 呈正相關(guān)（r=0.872，P<0.001）。

圖2 血清miR-144-3p 表達(dá)水平與miR-151-3p 的相關(guān)性

3 討論

鼻咽癌是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤，其發(fā)病部位隱蔽，早期無(wú)典型癥狀，且個(gè)體療效差異較大，故尋找高特異度和高敏感度的生物標(biāo)志物，對(duì)鼻咽癌的早期診斷和預(yù)后判斷具有重要的臨床意義。近年來(lái)研究表明，miRNA 在鼻咽癌的發(fā)病過(guò)程中起到重要的作用，并可為鼻咽癌診斷及靶向治療提供新的思路[6-7]。有研究指出，miR-144-3p 在惡性腫瘤患者中存在異常表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的分化、增殖起到重要的調(diào)控作用，有望成為惡性腫瘤早期診斷、療效監(jiān)測(cè)及靶向基因治療的新型標(biāo)志物[8]。另有研究認(rèn)為，miR-151-3p 通過(guò)調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路，影響腫瘤細(xì)胞增殖、遷移與侵襲，與鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)，可能作為惡性腫瘤診斷及療效預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物[9]。

本研究顯示，miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌組中的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，提示鼻咽癌存在miR-144-3p 及miR-151-3p 的異常高表達(dá)，具有癌基因作用，可參與鼻咽癌的發(fā)生。SONG 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，miR-144-3p 在鼻咽癌組織中明顯高表達(dá)，其通過(guò)直接靶向磷酸酶與張力蛋白同源物基因促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖和侵襲，誘導(dǎo)鼻咽癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)鼻咽癌的進(jìn)展。LIU 等[11]研究表明，鼻咽癌組織中miR-151a-3p 水平明顯高于癌旁組織，miR-151a-3p 促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，與鼻咽癌發(fā)病密切相關(guān)。本研究中Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌患者血清miR-144-3p 及miR-151-3p 表達(dá)水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，miR-144-3p 及miR-151-3p 表達(dá)水平在低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者中均明顯升高，提示miR-144-3p 及miR-151-3p 的高表達(dá)可促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展。既往研究認(rèn)為，鼻咽癌組織中miRNA 的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者miRNA 的表達(dá)水平明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，而且miRNA 高表達(dá)患者預(yù)后較差，提示miRNA 可能在鼻咽癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起重要作用，對(duì)預(yù)后有重要影響[12]。本研究ROC 曲線(xiàn)顯示，miR-144-3p 為1.61 及miR-151-3p 為2.25 是診斷鼻咽癌的最佳截?cái)嘀?，二者?lián)合診斷鼻咽癌的效能較高。本研究相關(guān)性顯示，miR-144-3p 與miR-151-3p在鼻咽癌中呈正相關(guān)。這說(shuō)明miR-144-3p 及miR-151-3p 可作為診斷鼻咽癌的生物學(xué)標(biāo)志物，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷鼻咽癌的價(jià)值最大。LI 等[13]研究顯示，miRNA 在Ⅰ期鼻咽癌中表達(dá)異常，參與腫瘤形成和發(fā)展相關(guān)的通路，為鼻咽癌的早期發(fā)現(xiàn)和治療提供了依據(jù)。WEN 等[14]研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)的血清標(biāo)志物相比，miRNA 對(duì)鼻咽癌的診斷敏感度和特異度較高，可能是鼻咽癌新的血清學(xué)標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。另有研究表明，miRNA 能調(diào)控多種靶基因的生物學(xué)功能，是一種有前途的鼻咽癌非侵襲性生物標(biāo)志物，為鼻咽癌的診斷和治療提供了一個(gè)新的方向[15]。

綜上所述，miR-144-3p 及miR-151-3p 在鼻咽癌中呈高表達(dá)，且與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)有助于提高鼻咽癌的診斷價(jià)值，能夠?yàn)榕R床治療提供新的思路。