閆 華 ，付 麗，朱錫璇，張國軍，朱 黎

(1.國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系武漢綜合試驗(yàn)站，湖北 武漢 430345；2.武漢市葆春蜂王漿有限責(zé)任公司，湖北 武漢 430345；3.湖北神農(nóng)架林區(qū)農(nóng)業(yè)執(zhí)法支隊(duì)，湖北神農(nóng)架442400；4.吉首大學(xué)，湖南 吉首 416000)

蜂王漿是由工蜂咽下腺和上顎腺分泌，用于哺育蜂王幼蟲和1～3 日齡的工蜂幼蟲的白色或淡黃色乳狀液體[1]。作為一種較高級的營養(yǎng)保健品，蜂王漿的成分復(fù)雜，水分為60%～70%，碳水化合物為10%～16%，蛋白質(zhì)含量為12%～15%，脂類物質(zhì)為3%～6.0%，小分子物質(zhì)包括維生素、礦物質(zhì)、游離氨基酸等為2%～3%[2]。

蜂王漿對人體有著很高的營養(yǎng)保健價值，能夠提高人體免疫力，對心血管疾病也有一定的作用，能夠預(yù)防衰老和阿爾茨海默癥，還有一定的美容功效等[3]。10- 羥基-ɑ- 癸烯酸(10-HDA)是蜂王漿中的標(biāo)志性物質(zhì)，約占蜂王漿總質(zhì)量的1.4%～2.3%。由于10-HDA （王漿酸） 具有增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗輻射等多重功效，近年來，它已成為衡量蜂王漿食用價值的重要指標(biāo)[4]。長期的科學(xué)研究及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)證明，蜂王漿的品質(zhì)與保健功效受王漿的儲存條件和儲存時間的影響[5-6]。因此本公司的蜂王漿對10-HDA 和蜂王漿儲存新鮮度有著很高的要求。 文章主要針對蜂王漿中的10-HDA 含量的變化進(jìn)行檢測和跟蹤。

1 材料和方法

1.1 材料

本實(shí)驗(yàn)以武漢市葆春蜂王漿有限責(zé)任公司2016～2019 年蜂農(nóng)送來的蜂王漿樣本為實(shí)驗(yàn)材料。

1.2 儀器和試劑

液相色譜儀SeriesⅢ、吹風(fēng)機(jī)RCY9212型、減壓干燥箱DZF-6020、超聲波清洗機(jī)SK3300H、電子天平AG135。實(shí)驗(yàn)所用的主要實(shí)驗(yàn)試劑見表1。

表1 本實(shí)驗(yàn)所用的主要試劑

1.3 試液制備

將蜂王漿樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻，取約0.5 g，置于已稱定的50 mL容量瓶中，加入0.03 moL/L 鹽酸1 mL 和水2 mL，攪拌均勻后加入無水乙醇30 mL，邊加入邊輕輕搖動，再精密加入內(nèi)標(biāo)液10 mL(每毫升含內(nèi)標(biāo)物約0.65 mg)，用無水乙醇稀釋至刻度，立即置超聲波浴中超聲15 min，在3 000 r/min 下離心10 min 后，放入4℃冰箱冷藏備用。

1.4 蜂王漿中10-HDA 測定

用4.6 mm×250 mm 的不銹鋼柱，填充無定形硅膠C18 鍵合相做色譜柱，檢測波長為210 nm，柱溫35℃，流速為1 mL/min。精密吸取濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL的10-HDA 標(biāo)準(zhǔn)溶液2 滋L 注入色譜儀，用峰面積比值計(jì)算應(yīng)呈線性，求出校正因子F。吸取試樣溶液4 滋L注入色譜儀，按“內(nèi)標(biāo)法” 定量。

蜂王漿中10-HDA 計(jì)算公式如下：

式中：X2—— 蜂王漿中10-HDA 的含量，%；

F —— 校正因子；

Ai—— 試樣中被測組分峰面積；

As—— 試樣中內(nèi)標(biāo)物峰面積；

ms—— 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量，單位為(g)；

mi—— 試樣質(zhì)量，單位為(g)。

2 結(jié)果與分析

葆春蜂王漿公司每年收購的蜂王漿有多批次，所以在計(jì)算蜂王漿中10-HDA 的含量時，取每月所有批次蜂王漿中10-HDA 含量的平均值進(jìn)行分析。

2.1 不同年份檢測蜂王漿10-HDA 含量變化

4 年來葆春公司收購的蜂王漿原料中10-HDA 含量的平均值呈增長的趨勢，2019年的10-HDA 含量平均值由2016 的1.76%上升到了1.83%。詳見圖1。2019 年送到公司的蜂王漿樣品的10-HDA 含量普遍比往年高。

圖1 每年10- HDA平均含量圖

2.2 不同地區(qū)10-HDA 含量變化

對與葆春公司合作的湖北不同地區(qū)生產(chǎn)蜂王漿檢測結(jié)果進(jìn)行分析。由圖2 可以看出2016-2019 年不同地區(qū)蜂王漿的10-HDA 含量存在著較大的差異。湖北省鐘祥市2019 年10-HDA 含量最高，京山縣2016～2019 年的10-HDA 含量呈上升的趨勢，鄂州市的蜂王漿中，2016 年至2018 年10-HDA 含量呈下降趨勢，2019 年恢復(fù)到了較高水平。黃梅縣的10-HDA 含量基本持平，2019 年10-HDA 含量明顯下降。2019 年蜂王漿中含有10-HDA含量普遍偏高的情況下，黃梅縣的蜂王漿中10-HDA 的含量在2019 年不升反降，黃梅縣蜂農(nóng)今年的王漿生產(chǎn)量是去年的兩倍，充分證明是因黃梅縣該年生產(chǎn)蜂王漿增加漿條和王臺基的數(shù)量造成。

圖2 不同地區(qū)每年10- HDA平均含量

2.3 不同地區(qū)10-HDA 平均含量變化

從圖3 可以看出鄂州市提供的王漿樣本的10-HDA 含量最高，近幾年平均達(dá)到1.86%，其次是鐘祥市達(dá)到1.78%，最后是京山縣，有1.76%。鄂州市一直是優(yōu)質(zhì)王漿的生產(chǎn)地，他們生產(chǎn)高10-HDA 含量的蜂王漿，在市場上也獲得了較高的價格。

圖3 2016- 2019 年不同地區(qū)10- HDA平均含量

3 結(jié)論

(1) 蜂種是決定生產(chǎn)蜂王漿品質(zhì)的最主要因素，高產(chǎn)種王生產(chǎn)不出10-HDA 含量高的蜂王漿，即使其他條件再好也無法達(dá)到優(yōu)質(zhì)品；蜜王生產(chǎn)的蜂王漿中10-HDA 含量最高，其次是蜜漿王，漿王生產(chǎn)蜂王漿10-HDA 含量最低[7]， 年群產(chǎn)最高達(dá)到15 kg 以上，10-HDA 的含量僅為0.6%～0.9%。蜂農(nóng)們生產(chǎn)蜂王漿使用的王種一般為蜜漿王和漿王。鄂州市蜂農(nóng)使用的王種正是蜜漿王且為定地飼養(yǎng)。

(2) 蜜粉源充足是生產(chǎn)蜂王漿的重要條件，10-HDA 的含量與特定的蜜源條件有極大的關(guān)系[8]。如果蜜粉源不足靠飼喂糖和天然花粉替代品，不能生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蜂王漿。不同地區(qū)不同年份由于蜜粉源條件不同，生產(chǎn)的蜂王漿中10-HDA 含量略有差別。

(3) 蜂王漿中10-HDA 含量的多少與生產(chǎn)蜂王漿時漿條的數(shù)量成正比，漿條越多蜂王漿的產(chǎn)量越高，但10-HDA 的含量必定下降。這就是葆春公司對蜂王漿生產(chǎn)蜂場及示范蜂場一再要求控制好漿條數(shù)量的原因。

(4) 種王、蜜源、漿條數(shù)量相同時，蜂群強(qiáng)弱是影響蜂王漿10-HDA 含量的因素。

筆者4 年來通過對國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系武漢綜合試驗(yàn)站和葆春公司示范試驗(yàn)蜂場生產(chǎn)的蜂王漿的10-HDA 含量進(jìn)行了長期的跟蹤檢測，認(rèn)為要想生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蜂王漿，以上四個條件缺一不可，因此武漢綜合試驗(yàn)站及葆春公司對蜂王漿生產(chǎn)蜂農(nóng)及示范蜂場主每年都從以上四點(diǎn)進(jìn)行高質(zhì)量王漿生產(chǎn)培訓(xùn)。

蜂王漿除了10-HDA 含量高之外，新鮮度也是保證蜂王漿高品質(zhì)的重要因素。低溫保鮮能夠很好的保護(hù)蜂王漿中的維生素C 及蛋白質(zhì)不被氧化[6]，儲藏溫度升高也會導(dǎo)致蜂王漿中糠醛類物質(zhì)含量增加[9]，低溫環(huán)境儲藏且降低解凍次數(shù)能夠保證蜂王漿的抑菌效果[10]。保證蜂王漿新鮮度的基本方法就是控制溫度，而控制好溫度就能確保蜂王漿的維生素C、蛋白質(zhì)不被氧化，糠醛類物質(zhì)含量不會升高，抑菌效果不會下降，因此蜂王漿的新鮮度是保證蜂王漿品質(zhì)的重要因素。這正是葆春公司每年對蜂農(nóng)的蜂王漿進(jìn)行嚴(yán)格的新鮮度檢測的原因。