孫 晨，高 燕，巴帥康，秦子臻，張 云，張姍姍*，劉可春*

1齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院)生物研究所，濟(jì)南 250103；2云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，昆明 650500

氨基糖苷類(lèi)藥物是化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有氨基糖分子的抗生素，多用于治療革蘭氏陰性菌的感染，應(yīng)用十分廣泛[1]。但是這類(lèi)藥物具有較強(qiáng)的耳毒性和腎毒性[2]。研究發(fā)現(xiàn)，其腎毒性可通過(guò)水化治療來(lái)緩解[3]。但是其耳毒性目前卻無(wú)有效的治療方法，開(kāi)發(fā)相應(yīng)的防治藥物至關(guān)重要。氨基糖苷類(lèi)藥源性耳聾的致病機(jī)理目前尚未完全研究清楚，但是已有研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)耳中的感覺(jué)毛細(xì)胞在其中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[4]。該細(xì)胞是位于哺乳動(dòng)物內(nèi)耳中的一類(lèi)終末分化細(xì)胞，一旦缺失不可再生。氨基糖苷類(lèi)藥物進(jìn)入毛細(xì)胞后，可誘導(dǎo)活性氧(reactive oxygen species，ROS)的大量產(chǎn)生[5]。這些由于氨基糖苷類(lèi)藥物作用而產(chǎn)生的ROS可促使毛細(xì)胞發(fā)生氧化損傷，并誘導(dǎo)其凋亡[6]。因此，降低感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生現(xiàn)已成為氨基糖苷類(lèi)藥源性耳聾防治藥物研發(fā)的方向之一。斑馬魚(yú)是一種國(guó)際認(rèn)可的新型脊椎動(dòng)物模式生物，體積較小、生長(zhǎng)快速、生殖能力強(qiáng)、體外受精發(fā)育、胚胎透明，在生理結(jié)構(gòu)、信號(hào)通路、蛋白質(zhì)功能等方面，斑馬魚(yú)與人類(lèi)相比均表現(xiàn)出極高的保守性[7]。斑馬魚(yú)具有與人類(lèi)高度同源的內(nèi)耳感覺(jué)毛細(xì)胞及側(cè)線毛細(xì)胞。當(dāng)其發(fā)育至第5天(days post-fertilization，dpf)時(shí)，上述毛細(xì)胞既已發(fā)育完全[8]。由于斑馬魚(yú)在發(fā)育早期全身透明，借助活體成像技術(shù)，可直接實(shí)時(shí)觀察待測(cè)樣品對(duì)毛細(xì)胞的毒性作用。因此，斑馬魚(yú)現(xiàn)已成為研究藥源性耳聾防治藥物的重要模式生物。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，竹柳中含有一種具有抗氧化功效的多糖，其組成為：8.72%木糖、14.87%L(+)-鼠李糖、3.22%D(-)-葡萄糖醛酸、5.45%D-半乳糖醛酸、54.68%D-阿拉伯糖、13.05%甘露糖(見(jiàn)附錄1)。基于抗氧化與感覺(jué)毛細(xì)胞損傷保護(hù)的密切聯(lián)系，本實(shí)驗(yàn)選用斑馬魚(yú)為試驗(yàn)動(dòng)物，氨基糖苷類(lèi)代表性抗生素——卡那霉素為損傷藥物，以自主發(fā)現(xiàn)的竹柳多糖為實(shí)際研究對(duì)象，對(duì)其感覺(jué)毛細(xì)胞的保護(hù)活性與機(jī)制進(jìn)行了初步研究，旨在為進(jìn)一步理解藥源性耳聾的防治提供理論依據(jù)與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)采用健康野生AB系斑馬魚(yú)，由山東省人類(lèi)疾病斑馬魚(yú)模型與藥物篩選工程技術(shù)研究中心提供。雌雄斑馬魚(yú)在28 ℃，光照與黑暗時(shí)間為14 h和10 h條件下分開(kāi)養(yǎng)殖。交配取卵時(shí)，于前日將健康成熟斑馬魚(yú)按雌雄比1∶1或1∶2比例放入交配缸內(nèi)，中間放置隔板，置于黑暗環(huán)境中，次日亮燈前抽去隔板，光照刺激使其排卵。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品、儀器與試劑

造模藥物卡那霉素(批號(hào)：BA10BA0024，生工生物工程(上海)股份有限公司)，用去離子水配制成1 mM的儲(chǔ)蓄液，放置于-20 ℃保存。4%多聚甲醛(批號(hào)：AR1069，武漢博士德生物公司)；CellROX Deep Red試劑盒(批號(hào)：2023824，Thermo Fisher Scientific)；TUNEL Brightred Appoptosis Detection Kit(批號(hào)：A113，南京諾唯贊生物科技有限公司)；FM1-43染料(批號(hào)：#70020，Biotium)；三卡因(批號(hào)：886-86-2，Sigma-Aldrich)。

AXIO Zoom.V16蔡司體式熒光顯微鏡(卡爾蔡司，德國(guó))；OLYMPUS熒光顯微鏡觀察并拍照(OLYMPUS，日本)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 竹柳多糖的安全性評(píng)價(jià)

受精3 h(hours post-fertilization，hpf)的斑馬魚(yú)胚胎分別暴露于0、30、40和50 μg/mL的竹柳多糖藥液中，在28.5 ℃的培養(yǎng)箱中連續(xù)處理96 h，期間每24 h更換一次藥液，每個(gè)濃度同時(shí)設(shè)置三個(gè)平行組(每個(gè)濃度20個(gè)胚胎)。處理結(jié)束后，對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行形態(tài)觀察并統(tǒng)計(jì)各組的累計(jì)死亡率、累計(jì)孵化率、畸形率及心率。累計(jì)死亡率=(96 hpf的死亡數(shù)/胚胎總數(shù))×100%；累計(jì)孵化率=(96 hpf孵化數(shù)/96 hpf存活的胚胎總數(shù))×100%；畸形率=(96 hpf畸形數(shù)/96 hpf已孵化幼魚(yú)數(shù))×100%；畸形指標(biāo)為脊柱和尾巴彎曲、卵黃囊畸形、心包水腫和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩[9]。

1.3.2 卡那霉素與竹柳多糖的聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)

受精6 dpf的斑馬魚(yú)置于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，隨機(jī)分成空白對(duì)照組與不同濃度聯(lián)合暴露組，分別為a：空白對(duì)照組、c：30 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組、d：40 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組、e：50 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組，每組15尾仔魚(yú)，同時(shí)設(shè)置三個(gè)平行孔?？瞻讓?duì)照組中不添加任何待測(cè)物；不同濃度聯(lián)合暴露組中分別同時(shí)添加200 μM的卡那霉素與30、40、50 μg/mL的竹柳多糖藥液，上述各組斑馬魚(yú)均置于28.5 ℃的培養(yǎng)箱中連續(xù)處理2 h。處理結(jié)束后，對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行形態(tài)觀察并統(tǒng)計(jì)各組的累計(jì)死亡率、累計(jì)孵化率、畸形率和心率。

1.3.3 竹柳多糖對(duì)功能型毛細(xì)胞的保護(hù)活性評(píng)價(jià)

受精6 dpf的斑馬魚(yú)隨機(jī)分成空白對(duì)照組、造模組和不同濃度的竹柳多糖處理組分別為a：空白對(duì)照組、b：卡那霉素造模組、c：30 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組、d：40 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組、e：50 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組?？瞻讓?duì)照組內(nèi)不添加任何待測(cè)物，置于28.5 ℃的培養(yǎng)箱中連續(xù)處理1 h。造模組中添加終濃度為200 μΜ的卡那霉素，置于28.5 ℃的培養(yǎng)箱中連續(xù)處理1 h。不同濃度竹柳多糖處理組中首先分別添加終濃度為30、40、50 μg/mL的竹柳多糖，置于28.5 ℃的培養(yǎng)箱中預(yù)處理1 h，隨后加入終濃度為200 μΜ的卡那霉素，在28.5 ℃的培養(yǎng)箱中繼續(xù)處理1 h。處理結(jié)束后，將上述各組仔魚(yú)置于5 μM 的FM1-43染料中，避光孵育3 min。隨后使用麻醉劑將仔魚(yú)麻醉，熒光顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)耳石附近5簇功能型毛細(xì)胞(O1、MI1、MI2、O2和IO4)的數(shù)量(n=15)[10]。

1.3.4 感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)ROS含量檢測(cè)

受精6 dpf的斑馬魚(yú)如“1.3.3”所述方法處理后，應(yīng)用CellROX Deep Red試劑盒，對(duì)感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)的ROS進(jìn)行熒光標(biāo)記，操作方法參照試劑盒說(shuō)明。標(biāo)記結(jié)束后，清洗各組仔魚(yú)，熒光顯微鏡下觀察拍攝耳石周?chē)粯?biāo)記為紅色熒光的ROS。

1.3.5 凋亡感覺(jué)毛細(xì)胞檢測(cè)

受精6 dpf的斑馬魚(yú)如“1.3.3”所述方法處理后，應(yīng)用TUNEL BrightRed凋亡檢測(cè)試劑盒，對(duì)發(fā)生凋亡的感覺(jué)毛細(xì)胞進(jìn)行特異標(biāo)記，操作方法參照試劑盒說(shuō)明。標(biāo)記結(jié)束后，清洗各組仔魚(yú)，熒光顯微鏡下觀察拍攝耳石周?chē)粯?biāo)記為紅色熒光的凋亡毛細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用GraphPad Prim version 6軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)和單因素方差分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，P<0.05代表差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 竹柳多糖對(duì)斑馬魚(yú)一般指標(biāo)的影響

不同濃度竹柳多糖連續(xù)作用斑馬魚(yú)胚胎96 h后，如圖1所示，空白對(duì)照組內(nèi)無(wú)胚胎畸形情況發(fā)生，其累計(jì)死亡率、孵化率分別為2.50%±1.44%、97.40%±0.03%，心率為198.60±2.27(見(jiàn)表1)。30、40和50 μg/mL的竹柳多糖連續(xù)處理斑馬魚(yú)96 h后，亦無(wú)胚胎畸形情況發(fā)生，其死亡率分別為2.50%±2.50%、10.00%±3.82%、5.83%±2.21%，孵化率分別為100.00%、98.04%±1.96%、99.07%±0.93%，心率分別為198.90±1.59、198.30±2.15、205.35±2.00(見(jiàn)圖1、表1)。不同濃度竹柳多糖處理組在死亡率、孵化率和心率等方面與空白對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。上述結(jié)果提示，當(dāng)竹柳多糖的作用濃度為30、40、50 μg/mL時(shí)，它對(duì)斑馬魚(yú)沒(méi)有明顯的毒性作用。

圖1 竹柳多糖的安全性評(píng)價(jià)Fig.1 Safety evaluation of bamboo willow polysaccharides注：A：竹柳多糖連續(xù)作用96 h后斑馬魚(yú)的累計(jì)死亡率；B：竹柳多糖連續(xù)作用96 h后斑馬魚(yú)的累計(jì)孵化率；C：竹柳多糖連續(xù)作用96 h后斑馬魚(yú)的形態(tài)。Note:A:Cumulative mortality of zebrafish after 96 h continuous treatment with bamboo willow polysaccharides;B:Cumulative hatching rate of zebrafish after 96 h continuous treatment with bamboo willow polysaccharides;C:Morphology of zebrafish after continuous treatment with bamboo willow polysaccharides for 96 h.

表1 96 hpf幼魚(yú)每分鐘心率Table 1 Zebrafish heart rate per minute of 96 hpf = 20)

2.2 竹柳多糖與卡那霉素共處作用后對(duì)斑馬魚(yú)心率及形態(tài)的影響

不同濃度竹柳多糖與卡那霉素共同作用6 dpf斑馬魚(yú)2 h后，各組斑馬魚(yú)均發(fā)育正常，且無(wú)死亡現(xiàn)象，如圖2所示。在空白對(duì)照組中，斑馬魚(yú)的平均心率為195.80±3.28；在30、40和50 μg/mL的聯(lián)合暴露組中，斑馬魚(yú)的心率分別為193.70±2.27、197.00±2.86、197.30±1.95(見(jiàn)表2)。不同濃度聯(lián)合暴露組的斑馬魚(yú)心率與空白對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述結(jié)果提示，當(dāng)竹柳多糖的作用濃度為30、40、50 μg/mL時(shí)，它與200 μM的卡那霉素聯(lián)合作用斑馬魚(yú)后，不具有明顯的聯(lián)合毒性。

圖2 竹柳多糖與卡那霉素的聯(lián)合毒性評(píng)價(jià)Fig.2 Evaluation of joint toxicity of bamboo willow polysaccharides and kanamycin注：不同濃度竹柳多糖與卡那霉素聯(lián)合作用后，斑馬魚(yú)形態(tài)發(fā)育正常，脊柱與尾巴均無(wú)彎曲、卵黃囊無(wú)畸形、心包無(wú)水腫(a：空白對(duì)照組；c：30 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組；d：40 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組；e：50 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組)。Note:Morphology of zebrafish treated with kanamycin and polysaccharides (a:Control;c:30 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin;d:40 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin;e:50 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin).

表2 斑馬魚(yú)每分鐘心率Table 2 Zebrafish heart rate per minute = 15)

2.3 竹柳多糖對(duì)卡那霉素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷的影響

FM1-43是一種特異的熒光染料，它可以通過(guò)感覺(jué)毛細(xì)胞上的機(jī)械感知通道進(jìn)入胞內(nèi)[11]。機(jī)械感知通道是一種機(jī)械敏感的離子通道，它可將聲波的機(jī)械振動(dòng)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，是感覺(jué)毛細(xì)胞行使聽(tīng)覺(jué)功能的關(guān)鍵[12]。為了明確竹柳多糖對(duì)卡那霉素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)功效，應(yīng)用FM1-43對(duì)功能型的感覺(jué)毛細(xì)胞進(jìn)行了特異標(biāo)記，結(jié)果如圖3所示。在空白對(duì)照組中，斑馬魚(yú)側(cè)線處的感覺(jué)毛細(xì)胞均被特異標(biāo)記，其耳石周?chē)?簇功能型毛細(xì)胞的平均數(shù)量為48.64±4.17。但是當(dāng)濃度為200 μM的卡那霉素連續(xù)作用斑馬魚(yú)1 h后，其側(cè)線處功能型毛細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，與空白對(duì)照組相比具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。當(dāng)30、40、50 μg/mL的竹柳多糖與卡那霉素共同作用時(shí)，與卡那霉素處理組相比，毛細(xì)胞數(shù)量顯著增加，且毛細(xì)胞的數(shù)量與竹柳多糖的作用濃度呈正相關(guān)性(見(jiàn)圖3、表3)。上述結(jié)果提示，竹柳多糖對(duì)卡那霉素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)活性。

表3 各組斑馬魚(yú)耳石周?chē)宕毓δ苄兔?xì)胞的數(shù)量Table 3 Numbers of five clusters of functional hair cells around otoliths in zebrafish in each group = 15)

圖3 竹柳多糖對(duì)感覺(jué)毛細(xì)胞的保護(hù)功效Fig.3 Protective effect of bamboo willow polysaccharides on sensory hair cells注：A：被特異標(biāo)記的功能型毛細(xì)胞(a：空白對(duì)照組；b：卡那霉素造模組；c：30 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組；d：40 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組；e：50 μg/mL竹柳多糖+卡那霉素組，下同)；B：各組斑馬魚(yú)耳石周?chē)宕毓δ苄兔?xì)胞的數(shù)量統(tǒng)計(jì)。紅色方框：耳石周?chē)奈宕孛?xì)胞；###卡那霉素造模組vs空白對(duì)照組，P<0.001；***竹柳多糖處理組vs卡那霉素造模組，P<0.001)。Note:A Functional hair cells that are specifically labeled(a:Control;b:kanamycin;c:30 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin;d:40 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin;e:50 μg/mL bamboo willow polysaccharides+kanamycin,the same below);B Numbers of five clusters of functional hair cells around the otolith of zebrafish in each group.Red box:five clusters of hair cells around the otolith;###Kanamycin vs control,P<0.001; ***Bamboo willow polysaccharides vs kanamycin,P<0.001).

2.4 竹柳多糖對(duì)卡那霉素誘導(dǎo)的ROS積聚的影響

由于ROS的過(guò)量積聚在卡那霉素誘導(dǎo)感覺(jué)毛細(xì)胞損傷中起著重要作用，因此為了明確竹柳多糖的感覺(jué)毛細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，對(duì)毛細(xì)胞內(nèi)的ROS含量進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，200 μM的卡那霉素可導(dǎo)致毛細(xì)胞內(nèi)ROS水平的升高，但是當(dāng)30、40、50 μg/mL的柳多糖與卡那霉素共同作用時(shí)，毛細(xì)胞內(nèi)的ROS含量明顯減少(見(jiàn)圖4)。

圖4 感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)ROS檢測(cè)Fig.4 Detection of ROS in sensory hair cells注：白色箭頭：被紅色熒光標(biāo)記的ROS。Note:The white arrows:ROS in sensory hair cells were labeled by red fluorescence.

上述結(jié)果提示，竹柳多糖有效抑制了感覺(jué)毛細(xì)胞中卡那霉素誘導(dǎo)的ROS的積聚。

2.5 竹柳多糖對(duì)卡那霉素引起的感覺(jué)毛細(xì)胞凋亡的影響

為了進(jìn)一步明確竹柳多糖的感覺(jué)毛細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，對(duì)毛細(xì)胞的凋亡進(jìn)行了檢測(cè)。如圖5所示，與空白對(duì)照相比，200 μM卡那霉素連續(xù)作用斑馬魚(yú)1 h后，毛細(xì)胞的凋亡發(fā)生率明顯增加。但是當(dāng)30、40或50 μg/mL的竹柳多糖與卡那霉素共同作用時(shí)，與卡那霉素單獨(dú)處理組相比，發(fā)生凋亡的毛細(xì)胞明顯減少。上述結(jié)果提示，竹柳多糖抑制了卡那霉素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

圖5 感覺(jué)毛細(xì)胞凋亡檢測(cè)Fig.5 TUNEL assay of sensory hair cells注：白色箭頭：發(fā)生凋亡的毛細(xì)胞。Note:The white arrow:Apoptotic cells were marked as red dots.

3 討論與結(jié)論

卡那霉素作為氨基糖苷類(lèi)抗生素的代表藥物之一，價(jià)格低廉、抗菌譜廣，性質(zhì)穩(wěn)定，應(yīng)用十分廣泛[13]。但是它卻具有較強(qiáng)的耳毒性[14]?？敲顾刂旅@的作用機(jī)制比較復(fù)雜，內(nèi)耳感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)ROS的過(guò)量積聚在其中發(fā)揮著重要作用，而抗氧化劑則可在一定程度上防治卡那霉素引起的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷[15]。基于此，本項(xiàng)目以自主發(fā)現(xiàn)的具有抗氧化活性的竹柳多糖作為研究對(duì)象，應(yīng)用斑馬魚(yú)模型對(duì)其感覺(jué)毛細(xì)胞保護(hù)活性進(jìn)行了初步研究。

研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)30、40或50 μg/mL的竹柳多糖單獨(dú)作用于斑馬魚(yú)后，斑馬魚(yú)的累計(jì)孵化率均高于98%，累計(jì)死亡率均低于15%，心率均在每分鐘198～210次之間。雖然在40 μg/mL的處理組中，斑馬魚(yú)的累計(jì)死亡率略高，但是經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，上述三組斑馬魚(yú)(30、40、50 μg/mL)的累計(jì)孵化率、死亡率以及心率與空白對(duì)照組相比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。該結(jié)果提示，竹柳多糖對(duì)斑馬魚(yú)無(wú)明顯毒性或致畸作用。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，竹柳多糖與卡那霉素共同作用時(shí)，對(duì)斑馬魚(yú)亦無(wú)明顯的毒性或致畸作用。但是在此濃度下，該多糖對(duì)卡那霉素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷卻具有明顯的保護(hù)活性，且可有效減少毛細(xì)胞內(nèi)卡那霉素誘導(dǎo)的ROS的積聚，并抑制毛細(xì)胞凋亡的發(fā)生。ROS作為機(jī)體內(nèi)一類(lèi)氧的單電子還原產(chǎn)物，是電子從呼吸鏈中泄露，并消耗約2%的氧氣后生成的[16]。機(jī)體內(nèi)部的ROS并不總是有害的。適量ROS可促進(jìn)修復(fù)、免疫、生長(zhǎng)和存活等[17]。但是在病理?xiàng)l件下，ROS產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡會(huì)發(fā)生紊亂，ROS長(zhǎng)時(shí)間的過(guò)量積聚往往會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)、核酸、多糖和脂質(zhì)等生物大分子造成傷害，使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，并誘導(dǎo)其凋亡[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，在體外具有抗氧化活性的竹柳多糖亦可在感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮其抗氧化功效。該多糖可通過(guò)降低感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)ROS的含量，緩解其氧化損傷程度，并最終抑制卡那霉素誘導(dǎo)的凋亡的發(fā)生，對(duì)毛細(xì)胞起到保護(hù)作用。又由于該多糖不具有明顯的毒性或致畸作用，因此上述結(jié)果提示，竹柳多糖在聽(tīng)覺(jué)保護(hù)領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用潛能。

天然產(chǎn)物來(lái)源的多糖是一類(lèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的高分子化合物。大量研究已證實(shí)，多糖通常具有抗氧化活性[18]，且該活性與多糖中甘露糖、半乳糖和糖醛酸的含量密切相關(guān)[19]。例如甘露糖、半乳糖和糖醛酸等均易與ROS相互作用，進(jìn)而使糖苷鍵發(fā)生裂解或使糖醛酸氧化。本研究所用竹柳多糖含有約13.05%的甘露糖，3.22%的葡萄糖醛酸及5.45%的D-半乳糖醛酸。由此推測(cè)，竹柳多糖的感覺(jué)毛細(xì)胞保護(hù)活性可能是由其單糖組成決定的。竹柳多糖內(nèi)的甘露糖與糖醛酸均有助于其快速降低感覺(jué)毛細(xì)胞內(nèi)的ROS含量，進(jìn)而起到感覺(jué)毛細(xì)胞保護(hù)活性。

竹柳生長(zhǎng)迅速、抗逆性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)效益高、適應(yīng)性強(qiáng)、近年來(lái)在我國(guó)的種植面積迅速擴(kuò)大[20]。目前對(duì)于竹柳的研究主要集中在抗旱，耐鹽堿，病蟲(chóng)害防治等領(lǐng)域[21]，而對(duì)其提取物功效的研究鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)在體實(shí)驗(yàn)，證實(shí)竹柳多糖對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素誘導(dǎo)的感覺(jué)毛細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)活性，并發(fā)現(xiàn)該保護(hù)活性與竹柳多糖的抗氧化性密切相關(guān)。本研究所得數(shù)據(jù)可為藥源性耳聾的防治提供新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并有助于拓寬竹柳的應(yīng)用領(lǐng)域，促進(jìn)其高值化應(yīng)用。