趙 笛，李菁菁，張 凱，秦 超，楊 磊，尹莉芳

（中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京 210009）

新型冠狀病毒肺炎（COVID-19），簡(jiǎn)稱“新冠肺炎”，是由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）引起的一種重癥急性呼吸綜合征。該病毒主要通過(guò)呼吸系統(tǒng)進(jìn)行傳播，主要通過(guò)作用于肺泡上皮細(xì)胞中存在的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶-2受體（ACE-2）感染人體［1-2］。目前該病毒已迅速席卷全球，累計(jì)確診超過(guò)1億人，死亡病例超過(guò)220萬(wàn)［3-4］。然而由于缺乏有效的治療措施和治療藥物，新冠肺炎的疫情仍然無(wú)法得到完全的控制。各個(gè)國(guó)家科學(xué)家正在積極進(jìn)行COVID-19疫苗的研發(fā)工作，并取得了一定的成果。但是對(duì)于目前超過(guò)1億人的新冠肺炎感染患者來(lái)說(shuō)，當(dāng)務(wù)之急是開(kāi)發(fā)出具有明顯抗病毒療效的藥物進(jìn)行針對(duì)性治療。

瑞德西韋（remdesivir）是一種核苷類似物的氨基磷酸酯前藥，其體內(nèi)活性代謝產(chǎn)物核苷三磷酸（NTP）能夠與天然ATP競(jìng)爭(zhēng)性作用于病毒的RNA依賴性RNA聚合酶（RdRp），引起病毒RNA鏈延伸過(guò)程的錯(cuò)配或終止，抑制病毒的復(fù)制［5］。該化合物在各項(xiàng)臨床前和臨床研究中均表示出廣譜的抗病毒活性［6-7］。因此，F(xiàn)DA于2020年10月批準(zhǔn)了抗病毒藥物注射用瑞德西韋的上市，用于COVID-19的治療。然而由于血漿中存在大量的酯酶等水解酶，瑞德西韋在血漿中極不穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)表明，靜脈注射后瑞德西韋在小鼠體內(nèi)的血漿半衰期小于5 min，恒河猴體內(nèi)的血漿半衰期僅0.39 h［6，8］，在人體血漿中的半衰期為1 h［9］?；谌鸬挛黜f的物理化學(xué)性質(zhì)及其在組織血漿中的不穩(wěn)定性，可以預(yù)計(jì)靜脈注射后瑞德西韋在肺部組織中的分布和滲透率較低。在多項(xiàng)動(dòng)物模型中，肺部均未檢測(cè)到瑞德西韋，其活性代謝物的濃度也較低。由此可見(jiàn)，盡管瑞德西韋仍是新冠肺炎患者最有希望的治療方法之一，但僅僅通過(guò)靜脈給藥的方式很大程度上限制了藥物的臨床療效。因此，需要進(jìn)一步研究瑞德西韋的肺部給藥方式以期改善藥物的肺部蓄積，提高其抗新冠肺炎病毒的臨床療效。

本研究采用脂質(zhì)體為藥物載體制備了瑞德西韋脂質(zhì)體吸入制劑，并以包封率、粒徑和多分散系數(shù)等為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)其制備工藝進(jìn)行篩選和優(yōu)化，旨在制備具有良好的載藥能力和空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的吸入用瑞德西韋脂質(zhì)體，以期改善藥物在肺內(nèi)的分布，提高瑞德西韋的治療效果。

1 材料

1.1 藥品與試劑

瑞德西韋原料藥（批號(hào)：20200319，含量：97.9%，中國(guó)藥科大學(xué)徐云根教授實(shí)驗(yàn)室提供）；二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC，瑞士Corden Pharma公司）；膽固醇（大連美侖生物技術(shù)有限公司）；二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-mPEG 2000，上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司）；甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖和海藻糖（上海麥克林生化科技有限公司）；甲醇（色譜純，美國(guó)Tedia公司），其他試劑均為市售分析純。

1.2 儀 器

XPR2/A百萬(wàn)分之一天平（梅特勒-特利多儀器上海有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（南京科爾儀器設(shè)備有限公司）；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；ZetaPlus電位粒徑測(cè)定儀（美國(guó)布魯克海文儀器公司）；JEM-1200EX型透射電子顯微鏡（日本電子公司）；LGJ-18C型冷凍干燥機(jī)（北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司）；UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；新一代藥用撞擊器（NGI）-120（英國(guó)Copley Scientific公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 瑞德西韋脂質(zhì)體含量和包封率的測(cè)定

2.1.1 紫外全波長(zhǎng)掃描 取10μg/mL瑞德西韋甲醇溶液置于紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)中，于200~500 nm波長(zhǎng)范圍下進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)圖譜的掃描。結(jié)果表明，在246 nm波長(zhǎng)處瑞德西韋有最大吸收，且此波長(zhǎng)處空白脂質(zhì)體甲醇溶液無(wú)明顯干擾，因此選擇以246 nm作為瑞德西韋含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)較為合適。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制 精密稱取瑞德西韋原料藥5 mg于50 mL量瓶中，甲醇溶解定容作為儲(chǔ)備液（100μg/mL）。精密移取適量體積的儲(chǔ)備液至10 mL量瓶中，以50%甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為2、4、6、8、10、15μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在246 nm波長(zhǎng)條件下使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定，以吸收度（A）為縱坐標(biāo)，樣品質(zhì)量濃度c（μg/mL）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到線性方程A=0.061 6c-0.001 5（R2=0.999 9）。所以，瑞德西韋質(zhì)量濃度在2~15μg/mL范圍內(nèi)的檢測(cè)線性良好。

2.1.3 包封率測(cè)定 采用超濾離心法除去游離藥物，取適量瑞德西韋脂質(zhì)體混懸液，用甲醇破乳、稀釋至10 mL，使用紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)在246 nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定瑞德西韋的含量，計(jì)算包封率。

2.2 瑞德西韋脂質(zhì)體制備方法篩選

分別采用薄膜分散法、乙醇注入法和逆向蒸發(fā)法制備瑞德西韋脂質(zhì)體。以脂質(zhì)體的粒徑、多分散系數(shù)、包封率以及穩(wěn)定性為考察指標(biāo)，選擇合適的制備方法。

2.2.1 薄膜分散法 精密稱取處方量瑞德西韋原料藥、DPPC、膽固醇以及DSPE-mPEG 2000置于圓底燒瓶中，加入氯仿15 mL，溶解混勻后于45℃水浴條件下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑。加入適量pH 6.5 PBS緩沖液進(jìn)行水化，冰浴條件下將脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行探頭超聲分散（200 W，10 min）。

2.2.2 乙醇注入法 精密稱取適量DPPC、膽固醇以及DSPE-mPEG 2000，加入無(wú)水乙醇5.0 mL溶解。于45℃攪拌狀態(tài)下將藥物的乙醇溶液緩慢注入緩沖液中。在45~50℃水浴條件下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑，加入適量pH 6.5 PBS緩沖液定容至5.0 mL，冰浴探頭超聲分散（200 W，10 min）。

2.2.3 逆向蒸發(fā)法 精密稱取處方量瑞德西韋原料藥、DPPC、膽固醇以及DSPE-mPEG 2000置于圓底燒瓶中，加入氯仿15 mL溶解，混勻后加入少量pH 6.5 PBS緩沖液探頭超聲分散（200 W，5 min）形成乳化劑。在45℃條件下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機(jī)溶劑，加入適量pH 6.5 PBS緩沖液水化后，冰浴探頭超聲分散（200 W，10 min）。

不同方法制備得到的脂質(zhì)體結(jié)果如表1所示，不同工藝制備的脂質(zhì)體包封率無(wú)明顯差異，然而使用薄膜分散法得到的脂質(zhì)體粒徑較小。從外觀穩(wěn)定性來(lái)看，使用逆向蒸發(fā)法制備的脂質(zhì)體在24 h內(nèi)出現(xiàn)大量沉淀，穩(wěn)定性較差；而采用薄膜分散法制得的脂質(zhì)體混懸液在48 h內(nèi)幾乎無(wú)明顯沉淀產(chǎn)生。綜合考慮以上因素，確定采用薄膜分散法制備瑞德西韋脂質(zhì)體。

Table 1 Characterization of remdesivir-loaded liposomes prepared by different methods(xˉ±s,n=3)

2.3 瑞德西韋脂質(zhì)體處方工藝單因素考察

2.3.1 藥物與磷脂材料的比例 控制處方中穩(wěn)定劑DSPE-mPEG 2000和膽固醇的用量一致，僅調(diào)整藥物與磷脂的比例分別為1∶5、1∶15、1∶20、1∶30，按照“2.2”項(xiàng)下薄膜分散法制備瑞德西韋脂質(zhì)體，以粒徑及包封率作為考察指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果見(jiàn)圖1，隨著瑞德西韋脂質(zhì)體中磷脂DPPC用量的增加，脂質(zhì)體的粒徑減小、包封率提高；當(dāng)藥脂比小于1∶20，包封率幾乎無(wú)明顯變化。因此，確定處方中藥物與磷脂的比例為1∶20。

2.3.2 膽固醇的用量 控制制備的脂質(zhì)體中總脂材用量以及藥物用量不變，分別加入0%、10%、20%、30%、40%的膽固醇，按照“2.2”項(xiàng)下薄膜分散法制備脂質(zhì)體，以粒徑及包封率作為考察指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果如圖2所示，脂質(zhì)體中膽固醇比例主要對(duì)瑞德西韋的包封率有影響，隨著膽固醇占比的提高，其藥物包封率顯著下降。由于適量的膽固醇具有提升脂質(zhì)體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的作用［10］，從而減少載藥脂質(zhì)體的藥物泄露，因此在保證脂質(zhì)體良好的包封率的前提下選擇加入的膽固醇比例為10%。

Figure 1 Influence of the weight ratio of drug to phospholipid on encapsulation efficiency(EE)and particle size of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

Figure 2 Influence of the weight ratio of cholesterol on EE and particle size of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

2.3.3 穩(wěn)定劑DSPE-mPEG 2000的用量 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，僅以磷脂和膽固醇為組成成分的脂質(zhì)體包載瑞德西韋后其粒徑可達(dá)576 nm，標(biāo)準(zhǔn)差較大，并且24 h內(nèi)脂質(zhì)體混懸液有明顯沉降，無(wú)法維持混懸狀態(tài)，穩(wěn)定性極差。因此，選擇加入一定量的DSPE-mPEG 2000作為穩(wěn)定劑。設(shè)計(jì)比例分別為0%、5%、10%、20%，按照“2.2”項(xiàng)下薄膜分散法制備脂質(zhì)體，以粒徑、包封率和穩(wěn)定性作為考察指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)圖3。實(shí)驗(yàn)表明，加入DSPE-mPEG 2000后，隨著其比例增加，脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和載藥量都有明顯提升，因此選擇穩(wěn)定劑占比為20%。

Figure 3 Influence of the weight ratio of DSPE-mPEG 2000 on EE and particle size of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

2.3.4 水化介質(zhì)種類篩選 分別以純化水、生理鹽水、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.5 PBS緩沖液以及pH 7.4 PBS緩沖液作為水化介質(zhì)，考察其對(duì)脂質(zhì)體混懸液的包封率、粒徑及外觀穩(wěn)定性的影響。結(jié)果如圖4所示，水化介質(zhì)主要對(duì)脂質(zhì)體的外觀穩(wěn)定性和包封率產(chǎn)生影響。其中純化水水化得到的脂質(zhì)體雖然72 h內(nèi)無(wú)沉淀產(chǎn)生，但是包封率較低（<50%）。pH 4.0醋酸鹽緩沖液水化后脂質(zhì)體的包封率最優(yōu)，但在24 h內(nèi)有明顯沉淀，而pH 6.5的PBS緩沖液水化后的脂質(zhì)體48 h內(nèi)幾乎無(wú)明顯沉淀。因此，綜合考慮水化介質(zhì)對(duì)粒徑、穩(wěn)定性以及包封率的影響，選擇pH 6.5 PBS緩沖液。

Figure 4 Influence of different hydration medium on EE and particle size of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

2.4 凍干工藝考察

由于冷凍干燥是一個(gè)較為復(fù)雜的過(guò)程，會(huì)對(duì)脂質(zhì)體和藥物的活性產(chǎn)生一定的破壞，因此需要加入適量?jī)龈杀Ｗo(hù)劑以減輕凍干造成的應(yīng)力損傷。因此，分別考察甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖和海藻糖等凍干保護(hù)劑對(duì)瑞德西韋脂質(zhì)體凍干的保護(hù)作用，暫定其加入量為5%（每100毫升加入5 g）。將凍干制劑的外觀、復(fù)溶時(shí)間及復(fù)溶后的粒徑、包封率作為評(píng)價(jià)的指標(biāo)。

結(jié)果表明，無(wú)凍干保護(hù)劑的脂質(zhì)體凍干后復(fù)溶時(shí)間長(zhǎng)（67 s），粒徑明顯增大，穩(wěn)定性較差，24 h內(nèi)有大量沉淀。而加入凍干保護(hù)劑之后，脂質(zhì)體凍干前后的粒徑變化較小，超聲復(fù)溶時(shí)間明顯縮短（5~12 s），穩(wěn)定性得到明顯提升（圖5-A）。從外觀上看，以甘露醇、乳糖和海藻糖作為保護(hù)劑的凍干制劑呈現(xiàn)為皺縮海綿狀固體，具有較好的形態(tài)，其中以海藻糖為凍干保護(hù)劑的脂質(zhì)體復(fù)溶后粒徑變化較小，因此最終選擇海藻糖作為脂質(zhì)體凍干保護(hù)劑。

在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)海藻糖加入的量進(jìn)行篩選。實(shí)驗(yàn)表明，加入不同濃度的海藻糖作為凍干保護(hù)劑制得的樣品復(fù)溶后脂質(zhì)體混懸液的粒徑無(wú)明顯差異，且包封率和穩(wěn)定性均較好。其中，加入凍干保護(hù)劑的量為2%時(shí)，復(fù)溶時(shí)間較長(zhǎng)（27 s）并且凍干的固體外觀形態(tài)較差。而按4%~10%的量加入凍干保護(hù)劑的制劑各項(xiàng)參數(shù)均無(wú)明顯差異（圖5-B），因此確定海藻糖加入的量為4%。

Figure 5 Influence of lyoprotectants(A)and trehalose concentration(B)on EE and particle size of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

2.5 制劑學(xué)評(píng)價(jià)

2.5.1 形態(tài)學(xué)表征 采用透射電子顯微鏡（TEM）觀察瑞德西韋脂質(zhì)體的外觀形態(tài)。取復(fù)溶后的瑞德西韋脂質(zhì)體混懸液10μL滴在銅網(wǎng)上，靜置3~5 min后用濾紙吸去多余的水分，向銅網(wǎng)表面滴加2%磷鎢酸溶液，負(fù)染5 min，烘干后將樣品放置在TEM下觀察并拍攝電鏡照片。如圖6所示，微觀狀態(tài)下脂質(zhì)體外觀呈圓整球形，表面光滑，分布均勻。

Figure 6 TEM images of remdesivir-loaded liposomes

2.5.2 復(fù)溶溶劑的選擇及穩(wěn)定性考察 適宜的復(fù)溶溶劑有利于維持脂質(zhì)體混懸液的粒徑大小、均一性和混懸狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)中分別以純化水、0.9%生理鹽水和pH 6.5 PBS緩沖液作為脂質(zhì)體凍干制劑的復(fù)溶溶劑，以復(fù)溶后脂質(zhì)體的粒徑、PDI作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察復(fù)溶后脂質(zhì)體混懸液在25℃和4℃條件下的穩(wěn)定性。由圖8可知，不同溶劑復(fù)溶后的脂質(zhì)體均具有良好的粒徑大小和均一性。25℃（圖7-A）和4℃（圖7-B）條件下，制劑在10 d內(nèi)的粒徑、PDI均無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性良好。因此，上述3種溶劑均可用于瑞德西韋脂質(zhì)體凍干制劑的復(fù)溶。

2.5.3 體外釋放行為的考察 精密稱取相當(dāng)于瑞德西韋0.5 mg的脂質(zhì)體凍干制劑3份，以生理鹽水2 mL復(fù)溶后置于截留相對(duì)分子質(zhì)量為3 500的透析袋中，以新配制模擬肺液200 mL作為溶出介質(zhì)，37℃下進(jìn)行藥物釋放考察。分別于0.25、0.5、1、2、4、6 h時(shí)間點(diǎn)取樣1 mL，同時(shí)補(bǔ)加等溫、等體積的模擬肺液。測(cè)定瑞德西韋的含量，計(jì)算藥物的累積釋放度并繪制釋放度-時(shí)間曲線。

收集經(jīng)霧化器霧化后得到的樣品，同法進(jìn)行釋放度測(cè)定并繪制釋放度-時(shí)間曲線，并與未霧化的樣品釋放行為進(jìn)行比較。如圖8所示，瑞德西韋脂質(zhì)體在該釋放介質(zhì)中4 h左右即能夠釋放90%以上。經(jīng)霧化后雖然脂質(zhì)體釋放略有降低，但是釋放趨勢(shì)與霧化前基本一致。說(shuō)明載藥脂質(zhì)體經(jīng)霧化后未發(fā)生團(tuán)聚且仍然呈緩慢釋放，霧化過(guò)程對(duì)脂質(zhì)體的質(zhì)量無(wú)明顯影響。

2.5.4 吸入劑的空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分布測(cè)定 參照2020版《中華人民共和國(guó)藥典》四部通則0951項(xiàng)下的要求［11］，使用霧化器對(duì)瑞德西韋脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行霧化，采用新一代撞擊器（next generation impactor，NGI）對(duì)吸入用瑞德西韋脂質(zhì)體混懸液的空氣動(dòng)力學(xué)粒徑分布（aerodynamic particle size distribution，APSD）進(jìn)行研究。具體操作如下：將NGI置于55℃條件下預(yù)冷并連接真空泵以15 L/min的流量運(yùn)行90 min。將脂質(zhì)體混懸液4 mL加入到霧化杯中。霧化10 min后，以50%甲醇洗滌各層級(jí)收集杯和微孔收集器（MOC）的濾紙，收集各層級(jí)的樣品并置于20 mL量瓶中，以50%甲醇稀釋定容，作為供試品溶液。

Figure 7 Stability of remdesivir-loaded liposomes at 25°C(A)and 4°C(B)after reconstitution in different solvent(±s,,n=3)

Figure 8 Drug release curve of remdesivir-loaded liposomes before and after nebulization(±s,,n=3)

吸入瑞德西韋脂質(zhì)體混懸液經(jīng)霧化后的藥物沉積量分布如圖9所示，超過(guò)64%的霧化液滴主要沉積在stage-3、stage-4和stage-5。

使用科普利吸入制劑測(cè)試數(shù)據(jù)分析軟件（CITDAS）軟件計(jì)算相關(guān)參數(shù)：微細(xì)粒子百分比（FPF）、質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)粒徑（MMAD）和幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差（GSD）。結(jié)果表明，霧化氣溶膠顆粒的FPF為（54.31±2.74）%，MMAD為（4.50±0.38）μm；GSD為（2.06±0.34）%。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明，霧化后脂質(zhì)體混懸液可能在肺部沉積的微細(xì)粒子所占比大于50%，并且霧化液滴符合藥典規(guī)定的粒徑大小，具有較窄的粒徑分布，表現(xiàn)出理想的肺部沉積性。

Figure 9 Drug deposition ratio of remdesivir-loaded liposomes(±s,,n=3)

3 討論

新型冠狀病毒的主要通過(guò)飛沫傳播由呼吸道感染人體，臨床主要表現(xiàn)為輕度、中度、重度肺炎和廣泛的肺實(shí)質(zhì)損傷。2020年10月FDA批準(zhǔn)吉利德公司上市了一款用于靜脈注射的瑞德西韋制劑［12］，盡管在目前的臨床數(shù)據(jù)中顯示出了益處［13］，其療效仍然是有限的。由于血液中含有大量的水解酶，經(jīng)靜脈注射的前藥瑞德西韋在血漿中極不穩(wěn)定，從而影響藥物及其活性代謝物在肺部的蓄積，限制了藥物的療效。因此，直接肺部給藥可能是理想的給藥方式，能夠有效避免藥物在血漿中的降解，使藥物快速分布于肺部并提高靶部位藥物濃度，降低COVID-19患者的全身毒性。

脂質(zhì)體是一種可用于肺部靶向給藥的理想載體，它可以制備成不同的粒徑、不同的形式以滿足給藥需求并且能極大程度地改善藥物的穩(wěn)定性。DPPC是肺表面活性劑的主要成分之一［14］，在肺部給藥方面具有顯著的應(yīng)用前景優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也是美國(guó)FDA批準(zhǔn)的吸入賦形劑之一。已上市的阿米卡星脂質(zhì)體吸入混懸液（ARIKAYCE?）即以DPPC、膽固醇為主要賦形劑［15］，用于罕見(jiàn)肺病的治療。因此，本研究以DPPC作為脂質(zhì)體的磷脂材料包載瑞德西韋，對(duì)其處方工藝進(jìn)行篩選并進(jìn)行初步的體外評(píng)價(jià)。

瑞德西韋的溶解度較差，通過(guò)脂質(zhì)體包封可顯著改善其溶解度，而脂質(zhì)體包封率主要受到處方中磷脂和膽固醇用量的影響。因此，本研究主要以單因素試驗(yàn)對(duì)脂質(zhì)體處方組成進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，包封率隨磷脂占比的增加而增加，隨膽固醇用量的增加而減少。由于膽固醇可嵌入磷脂雙分子層中，改善磷脂膜的剛性和穩(wěn)定性，減少藥物在霧化過(guò)程的滲漏［10］，因此，最終處方在保證藥物包封率的前提下加入少量膽固醇以減少藥物的滲漏。此外，DSPE-mPEG 2000的加入可顯著改善脂質(zhì)體混懸液的穩(wěn)定性，減少脂質(zhì)體團(tuán)聚和沉淀的現(xiàn)象。

由于瑞德西韋在水溶液中不穩(wěn)定［16］，采用冷凍干燥技術(shù)將其制備成凍干制劑可延長(zhǎng)貯存期限。凍干保護(hù)劑的加入能保證獲得的凍干制劑具有良好的外觀，復(fù)溶前后粒徑、包封率等參數(shù)無(wú)顯著性差異。此外，復(fù)溶后的混懸液在4℃或25℃條件下良好的穩(wěn)定性表明在霧化過(guò)程中藥物幾乎不會(huì)出現(xiàn)沉淀和聚集的現(xiàn)象。霧化前后脂質(zhì)體的體外釋放曲線無(wú)明顯變化，進(jìn)一步證實(shí)了霧化過(guò)程對(duì)脂質(zhì)體混懸液的質(zhì)量無(wú)明顯影響。

霧化吸入劑的氣溶膠微粒的大小直接影響藥物在呼吸系統(tǒng)中的沉積部位和沉積量，進(jìn)而影響臨床藥效。微粒的沉積主要由慣性碰撞、重力沉積和擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)所決定的。通常慣性碰撞是粒徑大于5μm的氣溶膠顆粒沉積的主要機(jī)制，此時(shí)顆粒主要沉積于主氣道和口咽部；粒徑在1~5μmol/L范圍內(nèi)的微?？梢暂p松到達(dá)下呼吸道，并沉積在氣管、支氣管和肺泡；小于0.5μm的微粒則主要通過(guò)布朗擴(kuò)散作用在呼氣過(guò)程中被排出肺部。故本研究選擇采用NGI測(cè)定吸入劑的ASPD，NGI是2015年《中華人民共和國(guó)藥典》新引入的裝置，它能測(cè)定不同粒徑大小范圍內(nèi)的藥物沉積量，獲得較雙級(jí)撞擊器更全面的霧化特性數(shù)據(jù)［17］。本研究以FPF、MMAD、GSD為指標(biāo)對(duì)其空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)進(jìn)行評(píng)估。其中，F(xiàn)PF反映了粒徑小于5μm的微粒量占總藥液的比例，反映了可能進(jìn)入肺部的藥量。MMAD是質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)粒徑，是衡量微粒能否有效沉積在肺部的重要參數(shù)。幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差GSD反映了氣溶膠顆粒的分布情況，理想氣溶膠的GSD為1，但多數(shù)藥物氣溶膠是非均相的，GSD一般小于3.0即可［18］。

以上實(shí)驗(yàn)表明，本研究開(kāi)發(fā)的吸入用瑞德西韋脂質(zhì)體能夠高效地包載瑞德西韋，體外穩(wěn)定性良好。對(duì)其空氣動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的評(píng)估表明，霧化后的吸入劑氣溶膠微粒滿足肺部給藥所需的粒徑要求，有利于藥物經(jīng)呼吸道直接到達(dá)肺部病灶部位，為藥物的體內(nèi)有效性研究奠定了基礎(chǔ)。