陳秀英

（廣州市增城質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測所，廣東廣州 511300）

天然著色劑安全、成本高，而合成著色劑價格便宜且效果明顯，所以更多商家選擇使用合成著色劑。但合成著色劑不僅沒有營養(yǎng)價值，過多使用還會對人體健康造成一定的威脅[1-2]，所以我國對其在食品中的使用作了明確的規(guī)定[3]。目前，國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的合成著色劑檢測方法主要是高效液相色譜法[4]和紙色譜法[5]，但是這兩種方法的前處理過程不一樣，檢測條件不同，步驟煩瑣。國家標(biāo)準(zhǔn)沒有針對果醬制品提出具體的前處理方法，而且對果醬中合成著色劑的研究也暫未見報道，所以針對果醬中常用著色劑，非常有必要研究一種操作簡便又能夠滿足于檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)日常檢測任務(wù)的前處理方法，提高工作效率。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇（CH3OH）：色譜純；乙酸銨（CH3COONH4）：分析純；氫氧化鈉（NaOH）：分析純；硫酸鋅（ZnSO4）：分析純；實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

檸檬黃（CAS：1934-21-0）、莧菜紅（CAS：915-67-3）、胭脂紅（CAS：2611-82-7）、日落黃（CAS：2783-94-0）、誘惑紅（CAS：25956-17-6）、亮藍(lán)（CAS：3844-45-9）、購自中國計量科學(xué)研究院，濃度均為0.500 mg/mL。

1.2 儀器和設(shè)備

LC-2010AHT高效液相色譜儀配紫外檢測器（日本島津公司）；AR224CN型天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司）：感量為0.000 1 g；HH-2型恒溫水浴鍋（常州澳華）；KQ-500E型超聲清洗器（昆山超聲）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.000 1 g）經(jīng)粉碎均勻的樣品，放入80 mL的小燒杯中，加水20 mL，用玻璃棒攪拌后放入 70 ℃的水浴鍋中加熱溶解30 min（不溶解的樣品可以適當(dāng)延長時間或提升溫度至全部溶解），取出，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移到50 mL帶刻度的容量瓶中，加入1 mol/L的NaoH溶液 5 mL，1 mol/L的硫酸鋅溶液5 mL，定容50 mL。然后劇烈振搖10 s后，離心，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，進(jìn)高效液相色譜儀分析。將樣品提取液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，峰面積大小進(jìn)行外標(biāo)法定量。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)混合儲備液（100 μg/mL）：各吸取0.5 mg/mL的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍(lán)和誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)原液2.0 mL，用超純水定容至10.0 mL。

（2）合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)混合 儲 備 液0.01 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、 2.0 mL和5.0 mL用超純水定容至10.0 mL，配成每毫升相當(dāng)0.1 μg、1.0 μg、2.0 μg、5.0 μg、10.0 μg、20.0 μg和50.0 μg的合成著色劑，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾上機(jī)。

（3）乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1 000 mL，溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，超聲脫氣。氫氧化鈉溶液（1 mol/L）：稱取40 g氫氧化鈉，加水至 1 000 mL，溶解混勻。硫酸鋅溶液（1 mol/L）：稱取161 g硫酸鋅，加水至1 000 mL，溶解混勻。

1.3.3 上機(jī)條件

色譜柱：C18柱，4.6 mm×250 mm×5 μm（島津Ankylo C18）； 流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn) 樣量：10 μL；采用梯度洗脫，以乙酸銨（0.02 mol/L）-甲醇作為流動相，具體條件如表1。

表1 梯度洗脫條件

1.3.4 結(jié)果計算

試樣中著色劑含量的計算公式：

式中：X-試樣中著色劑的含量，單位為g/kg；c-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度，單位為μg/mL，m-試樣的質(zhì)量，單位為mg；v-試樣稀釋總體積，單位為mL；1 000-換算系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性方程及檢出限

按照國家標(biāo)準(zhǔn)要求將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配成0.1 μg/mL、 1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列濃度，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，著色劑的含量（μg/mL）為橫坐標(biāo)X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸分析，回歸方程如表1所示。在空白樣品中添加適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，按1.3.1的樣品前處理步驟操作，以S/N=3，即以3倍信噪比計算檢測限，結(jié)果見表2。

表2 6種著色劑的回歸方程及檢出限

2.2 回收率及精密度

精密稱取已知不含6大合成著色劑的果醬6份，每份約5 g，以2份為1組，每組分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)原液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL，按1.3.1中的方法進(jìn)行平行測定，計算加樣回收率，6種合成著色劑的回收率為88%～102%，RSD為1.0%～3.7%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

表3 合成著色劑的回收率及精密度（n=2）

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

抽取客戶委托送樣的10個批次樣品作為代表，采取上述方法進(jìn)行處理，結(jié)果如表4。

表4 10批次樣品檢測結(jié)果（單位：g/kg）

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值均低于算術(shù)平均值10%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。10批次樣品中，只有1批次（第10批）的樣品因?yàn)檎`用了不得添加的誘惑紅導(dǎo)致不合格，其余9批次均合格，與初測結(jié)果基本一致。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過改變樣品的前處理方法來同時測定6種合成著色劑，免去了吸附、洗脫、濃縮等煩瑣的操作步驟，操作簡單、試劑用量少，符合環(huán)保的原則；而且3 h就可以出結(jié)果，可實(shí)現(xiàn)批量化檢測、快速高效?；厥章试?8%～102%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%～3.7%，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢出限也能達(dá)到國標(biāo)要求，此法快速、準(zhǔn)確、高效，可廣泛應(yīng)用于合成著色劑的檢測。