張建英，李 彪，賈 龍，丁榮榮

（1.寧夏大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，寧夏 銀川 750021；2.寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

土甲族（Opatrini）隸屬鞘翅目（Coleoptera）擬步甲科（Tenebrionidae）擬步甲亞科（Tenebrioninae）[1]，在寧夏分布有10屬35種[2]。土甲族昆蟲是我國荒漠半荒漠地區(qū)主要的農(nóng)、林、牧業(yè)害蟲和倉儲害蟲[3]。四五月份成蟲交配產(chǎn)卵，孵化成幼蟲[4]，幼蟲一般棲息在土壤之中，口器較發(fā)達(dá)，食性雜[2]，為害植物嫩芽、根部和種子，損害植物生長，甚至致其死亡。土甲族昆蟲的幼蟲期是取食量最大、對農(nóng)林牧業(yè)為害最嚴(yán)重的發(fā)育階段。因此，高效、準(zhǔn)確地對該類昆蟲幼蟲進(jìn)行種的鑒定已成為該類昆蟲防治與利用的基礎(chǔ)，也是該類群昆蟲防治與利用研究的核心內(nèi)容之一。雖然目前對于土甲族昆蟲的研究很多，在成蟲分類研究方面較為完善，但對于土甲族昆蟲幼期種類鑒定的研究卻鮮有報道，其主要原因是該族昆蟲幼期標(biāo)本不易獲得，并且屬間或種間差異小，給種類鑒定造成了很大困難。

目前，國際上對昆蟲的鑒定大多采用形態(tài)學(xué)方法，形態(tài)學(xué)鑒定是將成蟲的形態(tài)學(xué)特征作為依據(jù)進(jìn)行鑒定，而幼期的特征差異小，僅從形態(tài)特征入手，鑒定困難，必須等到幼蟲老熟時，即形態(tài)特征骨化穩(wěn)定后才能鑒定。因此幼蟲鑒定一直是分類學(xué)的一個難題，采取的辦法往往是將幼蟲在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行人工飼養(yǎng)，待其發(fā)育成成蟲后再進(jìn)行鑒定，費(fèi)時費(fèi)力，嚴(yán)重影響物種鑒定的速度。20世紀(jì)80年代以來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)的發(fā)展以及PCR技術(shù)的建立與完善，一系列分子生物學(xué)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物鑒定，極大地彌補(bǔ)了傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定方法存在的缺陷，DNA條形碼技術(shù)就是其中具有代表性的一種[5]。加拿大動物學(xué)家Hebert等[6]首先倡導(dǎo)將條形編碼技術(shù)應(yīng)用于生物物種鑒定。DNA在生物體生長發(fā)育過程中不會改變，以DNA序列作為檢測對象，不受個體發(fā)育過程、不同發(fā)育形態(tài)和生長環(huán)境等的影響，且DNA條形碼技術(shù)具有可操作性強(qiáng)等特點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于物種鑒定[7]。

土甲族昆蟲生活史普遍在1年左右。野外獲得低齡幼蟲后，因其鑒別特征尚未硬化定型，專業(yè)人員很難做出準(zhǔn)確鑒定，往往通過實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，待其發(fā)育成老熟幼蟲或成蟲后再進(jìn)行鑒定，而這個過程短則數(shù)月，長則1年，鑒定周期很長。為此，本研究利用DNA條形碼技術(shù)以線粒體COⅠ基因、線粒體16S基因?yàn)榉肿訕?biāo)簽，對土甲族偽堅土甲屬粗背偽堅土甲（Scleropatrum horridum horridum）和笨土甲屬阿笨土甲（Penthicus alashanica）成蟲、低齡幼蟲和高齡幼蟲等8個樣品的線粒體COⅠ基因、線粒體16S基因序列進(jìn)行比對分析，若同種土甲成蟲（雌性和雄性）和幼蟲（低齡和高齡）之間的16S和COⅠ基因序列相似度達(dá)到98%及以上，說明可以通過DNA條形碼技術(shù)擴(kuò)增未知幼蟲的16S和COⅠ基因序列，然后與已知成蟲的16S和COⅠ基因序列進(jìn)行比對，根據(jù)相似度來判斷未知幼蟲為哪種已知成蟲的幼蟲，從而鑒定未知幼蟲種類。Hajibabaei等[8]對鱗翅目隸屬3科521種的DNA條形碼進(jìn)行分析鑒定，證明DNA條形碼的準(zhǔn)確性極高；Virgilio等[9]對鞘翅目、雙翅目、半翅目、膜翅目、鱗翅目和直翅目進(jìn)行了DNA條形碼技術(shù)鑒定的效率分析，認(rèn)為在無數(shù)據(jù)庫參照時其物種鑒定的效率會受影響；岳巧云等[10]應(yīng)用COⅠ基因鑒定形態(tài)近似的鞘翅目幼蟲，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。該研究的意義在于：昆蟲幼蟲分類研究中采用DNA條形碼技術(shù)，相比傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng)幼蟲待其鑒別特征骨化后再進(jìn)行鑒定的傳統(tǒng)幼蟲鑒定方法，可以有效減少鑒定時間和成本，鑒定結(jié)果也比較準(zhǔn)確、客觀、簡便。采用線粒體16S基因和線粒體COⅠ基因同時作為DNA條形編碼的標(biāo)記基因，突破了單分子標(biāo)記的局限性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 供試蟲源 本研究用于檢測的粗背偽堅土甲和阿笨土甲成蟲采集于寧夏賀蘭山國家級自然保護(hù)區(qū)；幼蟲經(jīng)人工室內(nèi)飼養(yǎng)獲得。

1.1.2 試劑 Taq Plus DNA聚合酶、10×PCR Buffer（含Mg2+）、dNTP（10 mmol/L）、滅菌去離子水、引物DNA、6×DNA Loading Dye、DNA Ladder Mix（100~10 000 bp）、DNA Ladder Mix (100~3 000 bp)、50×TAE、瓊脂糖H、SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒、無水乙醇、異丙醇、1×TE、BigDye Terminator v1.1、POP-7TMPolymer、HiDi Formamide、EDTA、NaAc、NaOH、Ezup柱式動物組織基因組DNA抽提試劑盒

1.1.3 儀器 冰箱、潔凈工作臺、PCR儀、凝膠成像儀、測序儀、冷凍離心機(jī)、臺式高速離心機(jī)、電泳儀、電泳槽、微型旋渦混合儀、數(shù)顯恒溫水浴鍋、移液器、紫外可見分光光度計等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 室內(nèi)人工飼養(yǎng)方法 室內(nèi)飼養(yǎng)成蟲時，用較大的容器盛沙土，將雌雄蟲按一定比例放置其中進(jìn)行飼養(yǎng)。沙土必須進(jìn)行100～120℃高溫處理24 h，目的是殺死沙土中的螨類。沙土用水拌濕，土壤含水量在14%～18%為宜。將拌好的沙土裝入容器，上面留出1/3體積的空余，在濕土上覆蓋薄薄一層干沙土。以燕麥片、黃瓜、麩皮、苜蓿等作為主要飼料。當(dāng)卵達(dá)到一定數(shù)量時，用軟毛筆將卵轉(zhuǎn)移到孵卵容器中，孵化卵的沙土濕度不能過大。當(dāng)卵孵化成幼蟲后，將其輕輕轉(zhuǎn)移到新容器中飼養(yǎng)。飼養(yǎng)幼期土甲較飼養(yǎng)成蟲困難，幼蟲和蛹對沙土水分有一定要求，容器內(nèi)沙土水分不宜過大，否則會使幼蟲和蛹發(fā)黑腐爛；但也不能沒有水分，當(dāng)沙土水分減少后，可通過吸水紙向其中滴水以保持一定濕度。預(yù)蛹期時老熟幼蟲會在容器底部打造蛹室，在此期間不能搖動容器。飼養(yǎng)過程中若發(fā)現(xiàn)寄生螨需及時處理，可在漏斗中用干燥的沙土來回沖刷蟲體，從而去除體表的寄生螨；寄生菌需隔離處理。除預(yù)蛹期和蛹期外，需定期更換沙土從而達(dá)到保濕、除菌的目的。用透明容器飼養(yǎng)需注意避光。

1.2.2 DNA提取 采用Ezup柱式動物組織基因組DNA抽提試劑盒分別提取粗背偽堅土甲雌性成蟲、雄性成蟲、低齡幼蟲、高齡幼蟲和阿笨土甲雌性成蟲、雄性成蟲、低齡幼蟲和高齡幼蟲8個樣品的DNA。

1.2.3 PCR擴(kuò)增條件及產(chǎn)物檢測 選用線粒體COⅠ基因、線粒體16S基因的部分片段作為分子標(biāo)記，委托生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計合成引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增（表2）。

表2 引物序列

PCR反應(yīng)體系包括模板DNA1μL、上下游引物（10μmol/L）各1μL、Dntp（mix）（10 mmol/L）1μL、Taq Buffer（10×）2.5μL、Taq酶（5 U/μL）0.2μL、dd H2O加至25μL。擴(kuò)增條件：第1步95℃預(yù)變性5 min；第2步94℃變性30 s，63℃（每循環(huán)降0.5℃）退火30 s，72℃延伸30 s共10個循環(huán)；第3步95℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s共30個循環(huán)；第4步72℃修復(fù)延伸10 min；第5步4℃保溫。

產(chǎn)物檢測：取5μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以標(biāo)準(zhǔn)DNA Marker為參照，在1%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分離，150 V、100 mA條件下電泳10~20 min，在紫外檢測儀上觀察拍照。按純化試劑盒操作說明將目的片段電泳條帶單一且明亮的PCR產(chǎn)物二次純化，用測序儀對PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序。

1.2.4 序列分析 本研究測定了土甲族2種昆蟲的16S基因和COⅠ基因部分序列，用Chromas軟件觀察每對序列峰值圖，結(jié)合Contig Express軟件進(jìn)行人工校閱得到所測序列。用分子進(jìn)化遺傳分析軟件MEGA 7分別統(tǒng)計2個基因的序列組成，計算堿基組成，統(tǒng)計轉(zhuǎn)換（transition，TS）和顛換（transversion，TV）數(shù)，計算轉(zhuǎn)化/顛換比率，分析2種昆蟲間的DNA序列差異。將測得的DNA序列輸入NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）網(wǎng)站，進(jìn)行Blast核苷酸序列的同源性分析，用Clustal X 1.83軟件對2種基因14條序列進(jìn)行多重比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA提取

通過分光光度計對測得的各樣品DNA質(zhì)量進(jìn)行檢測，得到基因組DNA溶液OD值為1.7～2.0。DNA提取檢測結(jié)果顯示除6號樣外，其他7個樣品均得到清晰明亮且單一的目的條帶，滿足后續(xù)PCR擴(kuò)增要求。其中6號樣沒有得到目的條帶，結(jié)果見圖1，這可能因?yàn)樵跇悠诽幚磉^程中6號樣基因組DNA發(fā)生降解，從而導(dǎo)致未能成功提取出6號樣基因組DNA。

圖1 DNA提取檢測圖

2.2 PCR擴(kuò)增

對除6號樣外的7個樣品進(jìn)行16S和COⅠ基因PCR擴(kuò)增，得到的電泳圖如圖2、圖3所示。對于16S基因片段，7個樣品均得到清晰明亮的目的條帶；對于COⅠ基因片段，7個樣品亦均得到清晰明亮的目的條帶，2個基因片段結(jié)果均為單一條帶，可用于后續(xù)的基因測序分析。本實(shí)驗(yàn)采用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果表明：PCR擴(kuò)增產(chǎn)生大小相同的1條帶，無其他條帶干擾（圖2、圖3），因此所得到的序列應(yīng)該是線粒體序列，而非核中線粒體假基因。

圖2 16S基因PCR產(chǎn)物電泳圖

圖3 COⅠ基因PCR產(chǎn)物電泳圖

2.3 基因序列組成及變異

2.3.1 16S基因序列組成及變異 在2種土甲的16S基因序列中，有62個保守位點(diǎn)，935個變異位點(diǎn)，變異率為93.4%，645個簡約信息位點(diǎn)，285個自裔位點(diǎn)，結(jié)果表明種間序列變異較大。堿基T、C、A、G的平均含量分別為32.0%、15.3%、45.1%和7.6%。A+T的平均含量為77.1%，明顯高于G+C含量（22.9%）。堿基T、C、A、G在每個氨基酸密碼子的不同位點(diǎn)差異不大，第1位點(diǎn)A+T含量（78.0%）高于G+C含量（22.0%），第2位點(diǎn)A+T含量（76.7%）高于G+C含量（23.3%），第3位點(diǎn)A+T含量（76.4%）高于G+C含量（23.6%），16S基因在各類昆蟲中富含A、T，如鱗翅目A+T的含量為78.4%，蜉蝣目A+T的含量為66.3%[11]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之相似，另外所有擬步甲科昆蟲的序列總和中A、T堿基所占總堿基的百分比均高于G、C堿基所占總堿基的百分比，由此可知所有序列都表現(xiàn)出明顯的AT偏向性（表3），這表明所有序列都符合昆蟲線粒體的堿基組成結(jié)構(gòu)。堿基替換是DNA序列堿基進(jìn)化的重要衡量指標(biāo)，有堿基轉(zhuǎn)換和堿基替換兩種形式[12]。從堿基替換的結(jié)果看，TV的發(fā)生遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于TS,全組數(shù)據(jù)TS/TV的平均值為0.3，在第1、2、3位點(diǎn)的比值分別為0.3、0.4、0.4。其中轉(zhuǎn)換主要發(fā)生在C←→T之間，顛換主要發(fā)生在A←→T和A←→C之間，其他類型的替換相比上述幾種替換發(fā)生較少（表4）。

表3 土甲族2種昆蟲的16S基因序列組成 %

表4 土甲族2種昆蟲的16S基因堿基替換統(tǒng)計

2.3.2 COⅠ基因序列組成及變異 在2種土甲的COⅠ基因序列中，有15個保守位點(diǎn)，1 021個變異位點(diǎn)，變異率為98.2%，698個簡約信息位點(diǎn)，321個自裔位點(diǎn)，結(jié)果表明種間序列變異較大。堿基T、C、A、G的平均含量分別為35.0%、17.5%、30.8%和16.7%。A+T的平均含量為65.8%，明顯高于G+C含量（34.2%）。第1位點(diǎn)的A+T含量為65.3%，第2位點(diǎn)的A+T含量為62.4%，第3位點(diǎn)的A+T含量為69.7%。第3位點(diǎn)表現(xiàn)出比較強(qiáng)的AT含量偏向性，A+T含量較前兩個位點(diǎn)高，該位點(diǎn)堿基G的含量最少為12.8%。所有擬步甲科昆蟲的序列總和中A、T堿基所占總堿基的百分比為63.1%[13]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符，都表現(xiàn)出明顯的AT偏向性（表5）。這表明所有序列符合昆蟲線粒體堿基組成結(jié)構(gòu)。從堿基替換的結(jié)果看，TV的發(fā)生略多于TS,TS/TV的平均值為0.5，在第1、2、3位點(diǎn)的比值分別為0.5、0.5、0.5。其中轉(zhuǎn)換主要發(fā)生在C←→T之間，顛換主要發(fā)生在A←→T之間，其他類型的替換相比上述幾種替換發(fā)生較少（表6）。

表5 土甲族2種昆蟲的COⅠ基因序列組成 %

表6 土甲族2種昆蟲的COⅠ基因堿基替換統(tǒng)計

2.4 同源性相似度比對分析

2.4.1 16S基因同源相似度 由表7和表8可知，粗背偽堅土甲雄性成蟲與低齡幼蟲及高齡幼蟲的相似度達(dá)到100%，與雌性成蟲相似度達(dá)100%，雌性成蟲與低齡幼蟲及高齡幼蟲相似度達(dá)到100%，低齡幼蟲與高齡幼蟲相似度也達(dá)到100%。阿笨土甲雌性成蟲與低齡幼蟲相似度達(dá)99.11%，與高齡幼蟲相似度達(dá)98.97%，低齡幼蟲與高齡幼蟲相似度達(dá)99.56%。2種土甲種間16S基因相似度：成蟲之間最高為93.72%，幼蟲之間最高為93.33%，成蟲與幼蟲之間最高為93.55%。2種土甲種內(nèi)雌性成蟲的16S基因與低齡幼蟲和高齡幼蟲的同源相似度均達(dá)到98%以上，粗背偽堅土甲雄性成蟲的16S基因與低齡幼蟲和高齡幼蟲的同源相似度均達(dá)到98%以上。說明16S基因在不同種的各個蟲態(tài)之間差異較大，在同一種內(nèi)不論是雌性還是雄性成蟲，它們與不同齡期幼蟲都有極高的16S基因同源相似度。

表7 種內(nèi)16S基因BLAST比對結(jié)果

表8 種間16S基因BLAST比對結(jié)果

2.4.2 CO I基因同源相似度 由表9和表10可知，粗背偽堅土甲雌性成蟲與低齡幼蟲相似度達(dá)98.84%，與高齡幼蟲相似度達(dá)99.50%，與雄性成蟲相似度達(dá)98.49%；雄性成蟲與低齡幼蟲相似度達(dá)98.94%，與高齡幼蟲相似度達(dá)99.39%，低齡幼蟲與高齡幼蟲相似度達(dá)99.24%。阿笨土甲雌性成蟲與低齡幼蟲相似度達(dá)98.63%，與高齡幼蟲相似度達(dá)99.24%，低齡幼蟲與高齡幼蟲相似度達(dá)98.79%。2種土甲種間COⅠ基因相似度：成蟲之間最高為91.57%，幼蟲之間最高為90.53%，成蟲與幼蟲之間最高為91.75%。2種土甲雌性成蟲的COⅠ基因與低齡幼蟲和高齡幼蟲的同源相似度均達(dá)到98%以上，粗背偽堅土甲雄性成蟲的COⅠ基因與低齡幼蟲和高齡幼蟲的同源相似度均達(dá)到98%以上。說明COⅠ基因在不同種的各個蟲態(tài)間差異較大，在同一種內(nèi)不論是雌性還是雄性成蟲，它們與不同齡期幼蟲都有極高的COⅠ基因同源相似度。

表1 樣品編號及昆蟲、蟲態(tài)對應(yīng)關(guān)系

表9 種內(nèi)COⅠ基因BLAST比對結(jié)果

表10 種間COⅠ基因BLAST比對結(jié)果

3 結(jié)論與討論

目前DNA條形碼技術(shù)主要被用于鑒定近緣種或者建立數(shù)據(jù)庫分析某個大的類群[14-15]。在昆蟲研究工作中，非昆蟲分類學(xué)專家很難通過形態(tài)特征對一些昆蟲進(jìn)行鑒定，而分子鑒定可以有效解決這一問題，DNA條形碼技術(shù)就是其中的代表之一，對昆蟲特定基因片段進(jìn)行測序及比對，確定其分類學(xué)地位。

運(yùn)用DNA條形碼技術(shù)鑒定物種有一個關(guān)鍵點(diǎn)就是基因的選擇，基因的選擇直接關(guān)系到鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。研究表明，許多生物包括昆蟲類群存在核中線粒體基因的拷貝，即線粒體假基因Numts（nuclear mitochondria DNA segments）[16]。隨著線粒體假基因研究的推進(jìn)，人們開始懷疑線粒體基因作為系統(tǒng)發(fā)育研究分子標(biāo)記的準(zhǔn)確性。因?yàn)閙tDNA與線粒體假基因同源，在核基因組中進(jìn)化速率很低，所以在用通用引物進(jìn)行擴(kuò)增時很容易被擴(kuò)增出來[17]，如果線粒體假基因在進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育研究分析時被當(dāng)作線粒體基因序列來進(jìn)行分析，分析結(jié)果可能會變得不準(zhǔn)確或者錯誤[18-19]。COⅠ基因因其突變速度快、容易擴(kuò)增、母性遺傳等特點(diǎn)成為分子系統(tǒng)發(fā)育研究中應(yīng)用較為廣泛的分子標(biāo)記。本研究采用COⅠ基因和16S基因作為分子標(biāo)記，對2種土甲進(jìn)行分子分類鑒定研究。通過對2種土甲不同蟲態(tài)的7條16S基因序列與7條COⅠ基因序列進(jìn)行分析，根據(jù)堿基組成分析結(jié)果，2種土甲的堿基序列均表現(xiàn)出一定的AT偏向性，其中16S基因序列中A+T的平均含量為77.1%，G+C的平均含量為22.9%，這與劉曉麗[11]報道的擬步甲線粒體16S基因序列堿基構(gòu)成的特點(diǎn)相符；COⅠ基因序列中A+T的平均含量為65.9%，G+C的平均含量為34.1%，這與趙亞茹[13]報道的擬步甲科昆蟲COⅠ基因的A+T含量相符。這表明本研究測得的基因序列是正確的。從2種土甲不同基因序列的同源相似度分析結(jié)果來看，粗背偽堅土甲種內(nèi)16S基因序列同源相似度最高達(dá)100%，阿笨土甲種內(nèi)16S基因序列同源相似度最高達(dá)99.56%，粗背偽堅土甲與阿笨土甲種間16S基因序列同源相似度最高為93.72%；粗背偽堅土甲種內(nèi)COⅠ基因序列同源相似度最高達(dá)99.50%，阿笨土甲種內(nèi)COⅠ基因序列同源相似度最高達(dá)99.24%，粗背偽堅土甲與阿笨土甲種間COⅠ基因序列同源相似度最高為91.75%。以上結(jié)果表明，不同物種間沒有完全一致的序列，同一物種不同蟲態(tài)不同齡期的個體間DNA序列差異很小。2種土甲種內(nèi)不同個體間16S基因序列最大差異為1.03%，小于種類鑒定界限（2%）；2種土甲種間16S基因序列最小差異為6.28%，高于限值（2%）。2種土甲種內(nèi)不同個體間COⅠ基因序列最大差異為1.51%，小于種類鑒定界限（2%）；2種土甲種間COⅠ基因序列最小差異為8.25%，高于限值（2%）。結(jié)果顯示2種土甲種內(nèi)個體間與種間存在明顯的差異間隔，種內(nèi)最大差異小于限值（2%），種間最小差異明顯高于限值（2%），與研究報道的種間差異>2%的結(jié)果一致[20]。由序列同源相似度可知1、2、3、4號為同一種，5、7、8號為同一種，這與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致，表明DNA條形碼技術(shù)可以用來進(jìn)行土甲族昆蟲幼期鑒定研究。

本研究采用16S與COⅠ兩種基因進(jìn)行測定分析，突破單分子標(biāo)記的局限性，當(dāng)然本研究存在一定的不足之處，如研究標(biāo)本采自同一地區(qū)，標(biāo)本來源單一，若有不同采集地的標(biāo)本進(jìn)行對比研究鑒定，結(jié)果將更有說服力；本研究只是鑒定了幼蟲期的低齡和高齡幼蟲，對其他齡期的研究尚未進(jìn)行。貢獻(xiàn)在于：為幼蟲種類鑒定提供新途徑，采用基于COⅠ基因和16S基因的DNA條形碼技術(shù)與常規(guī)形態(tài)學(xué)鑒定方法相結(jié)合的鑒定方式，可以更加準(zhǔn)確快捷地進(jìn)行種類鑒定研究。本實(shí)驗(yàn)獲得的土甲族昆蟲的COⅠ基因序列可以作為該蟲的條形碼，進(jìn)行快捷準(zhǔn)確的鑒定，從而為害蟲及時有效防治提供科學(xué)依據(jù)。DNA條形碼技術(shù)除了可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類的諸多局限性外，還可以為分類學(xué)家發(fā)現(xiàn)新種提供一個新的方法[21]，如果DNA條形碼技術(shù)能夠在土甲族昆蟲鑒定上得到充分利用并與常規(guī)形態(tài)學(xué)相結(jié)合，會給土甲族昆蟲的幼期鑒定帶來新突破。