鞏效偉，楊琰茗，張 霞，朱東來(lái)，翁稚穎，洪 鎏，韓 熠，趙 偉，羅義勇

(1. 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司 技術(shù)中心，云南 昆明 650231； 2. 昆明醫(yī)科大學(xué)，云南 昆明 650500；3 昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

0 引 言

電子煙是近些年來(lái)發(fā)展最為迅速的一種新型煙草制品，由煙桿(包括發(fā)光二極管、電池、控制電路、氣動(dòng)開(kāi)關(guān)、霧化器等元件)和煙彈(包括貯液腔和吸嘴)組成，工作原理是通過(guò)電加熱的方式加熱含有包括煙堿在內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)來(lái)產(chǎn)生煙霧，然后吸入口腔并通過(guò)肺部吸收.隨著電子煙的發(fā)展，出現(xiàn)了具有功效的電子煙.早在2014年，阮藝斌等就公開(kāi)了“一種具有止咳化痰功能的電子煙煙液”，該專利涉及一種止咳化痰電子煙煙液的配方及感官質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果[1].2017年，左招霞公開(kāi)了一件“止咳煙油與止咳電子煙”專利，涉及到止咳煙油配方及制備方法，并闡述了其功效[2].近期，王禮和也公開(kāi)了“一種止咳煙油與止咳電子煙”專利，該專利涉及到止咳煙油配方、核心原料的制備方法，并簡(jiǎn)述了止咳電子煙對(duì)患有氣管炎煙民的止咳、平喘效果[3].以上文獻(xiàn)大多關(guān)于止咳電子煙煙液的配方及制備方法，對(duì)止咳功效的評(píng)價(jià)也僅限于感官質(zhì)量評(píng)價(jià)或簡(jiǎn)單的人體試驗(yàn).未見(jiàn)以動(dòng)物模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，對(duì)含功效成分的電子煙，開(kāi)展止咳平喘的深入研究報(bào)道.

為了研究和驗(yàn)證功效物質(zhì)在電子煙上的生物學(xué)評(píng)價(jià)，根據(jù)文獻(xiàn)資料顯示[4-9]和前期工作研究，選取了L-薄荷醇(清涼、抗炎)、L-茶氨酸(鎮(zhèn)靜安神)、丁香酚(抗菌、降血壓)、木香烴內(nèi)酯(利膽、消炎)、西貝堿(治療肺熱燥咳、干咳多痰)、菖蒲酮(開(kāi)竅醒神、化濕和胃)、7, 4′-二羥基黃酮(改善血液循環(huán)、抑菌)、臭靈丹提取物(清熱、解毒).將上述成分按照一定比例添加到電子煙煙液中，通過(guò)動(dòng)物煙霧口鼻暴露系統(tǒng)(HRH-MNE)和單通道吸煙機(jī)(SM-120)，采用氨水引咳小鼠咳嗽模型和OVA引喘大鼠哮喘模型，對(duì)其進(jìn)行煙氣暴露后止咳平喘功效的評(píng)價(jià).

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

氨水(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20170301)；卵清蛋白(solarbio，批號(hào)：1127H054)；水合氯醛(青島沙子口化工廠，產(chǎn)品批號(hào)：20100401)；多聚甲醛(天津市大茂化學(xué)試劑廠，產(chǎn)品批號(hào)：20141208)；氫氧化鋁(西隴化工股份有限公司，分析純)；NaOH(西安化學(xué)試劑廠，分析純)；二甲苯(昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室提供)；HE染色所試劑(昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室提供)；L-薄荷醇(百靈威科技有限公司，純度99.5%)、L-茶氨酸(百靈威科技有限公司，純度≧99%)、丁香酚(百靈威科技有限公司，純度98%)、木香烴內(nèi)酯(云南西力生物技術(shù)股份有限公司，純度≧90%)、西貝堿(云南西力生物技術(shù)股份有限公司，純度≧70%)、菖蒲酮(云南西力生物技術(shù)股份有限公司，純度≧50%)、7, 4′-二羥基黃酮(云南西力生物技術(shù)股份有限公司，純度≧70%)、臭靈丹提取物(云南瑞升煙草技術(shù)(集團(tuán))有限公司提供).

1.2 儀器

煙彈(尺寸為φ9.2 mm×35.0 mm，電阻值為3.5 Ω)；電池桿(尺寸為φ9.2 mm×68.0 mm，電池容量為180 mA·h)(深圳合元科技有限公司)；煙彈與電池桿裝配后的尺寸為φ9.2 mm×98.5 mm；HRH-MNE動(dòng)物煙霧口鼻暴露系統(tǒng)(大小鼠)(北京慧榮和生物科技有限公司)；SM-120單通道吸煙機(jī)(北京慧榮和生物科技有限公司)；Nikon研究級(jí)正置熒光顯微鏡系統(tǒng)(上海千欣儀器有限公司)；手術(shù)器械(江蘇蘇科醫(yī)療器械有限公司)；flexiVent FX4震蕩式動(dòng)物肺功能系統(tǒng)(加拿大SCIREQ公司)；EMKA清醒式肺功能檢測(cè)系統(tǒng)(北京廣源達(dá)科技發(fā)展有限公司).

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)別昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，SPF級(jí)別昆明種大鼠，雄性，體重150～180 g，均由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證SYXK(滇) 2005-0003.

1.4 方法

1.4.1 功效型電子煙止咳功效評(píng)價(jià)

1)小鼠分組.取篩選合格的小鼠100只，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分為：Control組(生理鹽水霧化，生理鹽水煙霧暴露)；Model組(10%氨水霧化致咳，含基礎(chǔ)煙液的煙霧暴露)；試驗(yàn)組：L-薄荷醇組(10%氨水霧化致咳，含L-薄荷醇煙液的煙霧暴露)、L-茶氨酸組(10%氨水霧化致咳，含L-茶氨酸煙液的煙霧暴露)、丁香酚組(10%氨水霧化致咳，含丁香酚煙液的煙霧暴露)、木香烴內(nèi)酯組(10%氨水霧化致咳，含木香烴內(nèi)酯煙液的煙霧暴露)、西貝堿組(10%氨水霧化致咳，含西貝堿煙液的煙霧暴露)、菖蒲酮組(10%氨水霧化致咳，含菖蒲酮煙液的煙霧暴露)、7, 4′-二羥基黃酮組(10%氨水霧化致咳，含7, 4′-二羥基黃酮煙液的藥物暴露)和臭靈丹提取物組(10%氨水霧化致咳，含臭靈丹提取物煙液的煙霧暴露)，共10組，每組10只小鼠.

2)小鼠咳嗽敏感性剔除實(shí)驗(yàn).對(duì)所有小鼠進(jìn)行咳嗽敏感性剔除實(shí)驗(yàn)：10%濃氨水噴霧20 s后，觀察其3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期.小鼠的剔除標(biāo)準(zhǔn)如下：3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)少于10次或多于80次者；動(dòng)物死亡、狀態(tài)不佳、反應(yīng)異常劇烈者.均為剔除對(duì)象[10].

3)小鼠煙氣暴露參數(shù)優(yōu)化.考慮到不同抽吸模式[11-12]并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取功效電子煙抽吸模式：20口/只/天，抽吸持續(xù)時(shí)間(2±0.1) s，抽吸頻次(30±0.5) s，抽吸容量(55±0.3) mL，連續(xù)煙霧暴露1周；同時(shí)觀察小鼠的生理情況及其耐受性等.

4)受試電子煙煙氣吸入小鼠暴露實(shí)驗(yàn).為保證暴露染毒過(guò)程中系統(tǒng)輕微負(fù)壓，抽氣流量一般設(shè)置要比氣溶膠流量與稀釋流量總和多，設(shè)定稀釋流量為10 L/min，抽氣流量為13.5 L/min，暴露期間氧濃度控制為(20.5±0.5)%，空氣濕度控制為(80±5)%.使用SM-120單通道智能吸煙機(jī)，按照優(yōu)化電子煙抽吸參數(shù)對(duì)小鼠進(jìn)行連續(xù)1周的煙氣口鼻暴露，每天1次.

5)對(duì)咳嗽小鼠模型的止咳功效評(píng)價(jià).在第7天煙霧暴露結(jié)束1 h后，啟動(dòng)EMKA清醒式肺功能檢測(cè)系統(tǒng)，在霧化泵中加入新鮮配置的10%氨水溶液.將小鼠放入EMKA清醒式肺功能檢測(cè)系統(tǒng)配套的艙體中(艙體一端插入超聲霧化器，另一端連接空氣壓縮機(jī)).將超聲霧化器以最大噴霧力度(MAX)持續(xù)通入10%氨水噴霧20 s，立即關(guān)閉超聲霧化器，使氨水霧化液自然擴(kuò)散.在通入氨水霧化液的同時(shí)，用秒表計(jì)時(shí)，記錄小鼠3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(次)和咳嗽潛伏期(s).咳嗽的表現(xiàn)為：張大口或張小口時(shí)伴有咳嗽聲，均可見(jiàn)腹肌收縮[13-14].

1.4.2 功效型電子煙平喘功效評(píng)價(jià)

1)大鼠分組.取篩選合格的大鼠100只，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分為：Control組(生理鹽水注射致敏，生理鹽水引喘，生理鹽水進(jìn)行煙霧暴露)；Model組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含基礎(chǔ)煙液的煙霧暴露)；試驗(yàn)組：L-薄荷醇組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含L-薄荷醇煙液的煙霧暴露)、L-茶氨酸組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含L-茶氨酸煙液的煙霧暴露)、丁香酚組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含丁香酚煙液的煙霧暴露)、木香烴內(nèi)酯組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含木香烴內(nèi)酯煙液的煙霧暴露)、西貝堿組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含西貝堿煙液的煙霧暴露)、菖蒲酮組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含菖蒲酮煙液的煙霧暴露)、7, 4′-二羥基黃酮組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含7, 4′-二羥基黃酮煙液的煙霧暴露)和臭靈丹提取物組(10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體無(wú)菌原液致敏，10%OVA引喘，含臭靈丹提取物煙液的煙霧暴露)，共10組，每組10只大鼠.

2)大鼠煙氣暴露參數(shù)優(yōu)化.參考電子煙國(guó)際抽吸標(biāo)準(zhǔn)和加拿大深度抽吸標(biāo)準(zhǔn)[11-12]，結(jié)合試驗(yàn)電子煙，煙霧量情況以及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終確定：20口/只/天，抽吸持續(xù)時(shí)間(2±0.1) s，抽吸頻次(30±0.5) s，抽吸容量(70±0.5) mL，連續(xù)煙霧暴露1周；同時(shí)觀察大鼠的生理情況及其耐受性等.

3)哮喘大鼠模型的構(gòu)建.分別于試驗(yàn)第1天和第8天分3點(diǎn)注射1 mL含10 mg OVA和100 mg氫氧化鋁膠體的無(wú)菌抗原液(兩側(cè)腹股溝皮下注射0.25 mL，腹腔注射0.5 mL致敏)，于試驗(yàn)第15天時(shí)進(jìn)行哮喘激發(fā)和煙霧暴露，哮喘激發(fā)連續(xù)3天，煙霧連續(xù)暴露7天.哮喘激發(fā)條件為：含10%OVA生理鹽水霧化3 min，每天1次，Control組采用生理鹽水霧化.當(dāng)大鼠出現(xiàn)皮膚瘙癢，煩躁不安，點(diǎn)頭呼吸，張口呼吸，明顯腹式呼吸等癥狀，表明引喘成功；采用HRH-MNE動(dòng)物煙霧口鼻暴露系統(tǒng)進(jìn)行煙霧暴露.為保證暴露染毒過(guò)程中系統(tǒng)輕微負(fù)壓，抽氣流量一般設(shè)置要比氣溶膠流量與稀釋流量總和多，設(shè)定稀釋流量為10 L/min，抽氣流量為13.5 L/min，暴露期間氧濃度控制為(20.5±0.5)%，空氣濕度控制為(80±5)%.使用單通道智能點(diǎn)煙機(jī)，20口/只/天，卷煙抽吸參數(shù)設(shè)置為：抽吸時(shí)間(2.0±0.1) s，抽吸頻次(30.0±0.5) s，抽吸流量(70.0±0.5) mL.

4)哮喘模型大鼠的平喘效果評(píng)價(jià).持續(xù)1周的功效型電子煙煙霧暴露結(jié)束后，對(duì)哮喘模型大鼠進(jìn)行肺功能呼氣指標(biāo)測(cè)定，觀察功效型電子煙對(duì)哮喘大鼠的影響.應(yīng)用EMKA清醒式肺功能檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)大鼠肺功能情況，待動(dòng)物在腔體內(nèi)平靜5～10 min趨于穩(wěn)定且呼吸波平穩(wěn)時(shí)開(kāi)始記錄數(shù)據(jù)，測(cè)定4個(gè)哮喘主要相關(guān)數(shù)據(jù)，包括呼氣時(shí)間(Te)、最大呼氣量(PEF)、呼氣量(EV)、50%的呼氣流速(EF50%).

5)肺組織病理學(xué)分析.處死試驗(yàn)動(dòng)物，取出試驗(yàn)大鼠左肺放入4%的多聚甲醛溶液中固定24 h以上.

脫水透明：用由低濃度到高濃度的酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份；再將組織塊置于透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊中的酒精.

浸蠟包埋：將已透明的組織塊放入已熔化的石蠟中，放入熔蠟箱保溫.待石蠟完全浸入組織塊后進(jìn)行包埋，包埋后方可進(jìn)行切片、烤片操作.

HE染色制片：切片經(jīng)環(huán)保脫蠟液脫蠟，酒精100%-95%-75%洗凈環(huán)保脫蠟液至流水沖洗，然后過(guò)蘇木素3～5 min，流水沖洗后入1%的鹽酸酒精分化后水洗(洗掉多余未與細(xì)胞核結(jié)合的蘇木素，目的是讓核與漿分界明顯)，1%氨水返藍(lán)后水洗(蘇木素與細(xì)胞核結(jié)合經(jīng)堿反應(yīng)后核與漿分界效果更明顯)，放入伊紅染色10～20 s，流水沖洗后放入75%-95%-100%酒精濃度低到高脫水，吹干后放入環(huán)保脫蠟液中透明，最后用中性樹(shù)脂封片.顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化.

1.4.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理

采用Sigma Stat 3.5統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，各組數(shù)據(jù)單因素方差分析(One-Way ANOVA)，若方差不齊，則進(jìn)行秩和檢驗(yàn).檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，采用Sigma Plot 10.0圖形軟件進(jìn)行作圖.左肺切片選取在顯微鏡下40倍的視野用OLYMPUS-BX51病理圖像采集系統(tǒng)采集圖片.圖片用Image-Pro Plus17.0圖像分析軟件處理.

2 結(jié)果與討論

2.1 功效型電子煙對(duì)咳嗽模型小鼠的影響

電子煙樣品煙霧暴露1周后，與Control組比較，Model組咳嗽次數(shù)增加，但未達(dá)到顯著性差異的水平，可能原因?yàn)樾∈髮?duì)氨水刺激引咳的敏感性存在個(gè)體差異，受篩選入組小鼠樣本量限制，所以得出這個(gè)結(jié)果，該結(jié)果也說(shuō)明基礎(chǔ)煙液對(duì)小鼠的咳嗽沒(méi)有顯著的不良影響；與Model組相比，L-薄荷醇、L-茶氨酸、丁香酚、木香烴內(nèi)酯、西貝堿、菖蒲酮、7, 4′-二羥基黃酮7組和臭靈丹提取物組咳嗽模型小鼠咳嗽次數(shù)減少，其中木香烴內(nèi)酯組效果最顯著，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；從咳嗽潛伏期來(lái)看，與Control組比較，Model組變化不明顯，但與Model組相比，8種功效型電子煙暴露后均使咳嗽模型小鼠引咳潛伏期增長(zhǎng).結(jié)果見(jiàn)圖1.

注：組間比較采用 one way analysis of variance；#: Model組vs試驗(yàn)組P<0.05圖1 電子煙功效成分對(duì)咳嗽模型小鼠咳嗽次數(shù)(A)和引咳潛伏期(B)的影響Fig.1 Effects of functional e-cigarettes on cough model mice’ cough frequency (A) and incubation period (B)

咳嗽敏感性[15-16](cough reflex sensitivity)是指機(jī)體在接受外界刺激(包括化學(xué)、機(jī)械、溫?zé)?時(shí)，表現(xiàn)出來(lái)的咳嗽難易程度，它是咳嗽高敏感綜合征的主要發(fā)病機(jī)制.本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的氨水引咳方法，進(jìn)行為期1周的功效型電子煙煙霧暴露，評(píng)價(jià)8種功效型電子煙煙霧對(duì)氨水引發(fā)的呼吸系統(tǒng)“咳嗽、喘息”的影響.止咳效果通過(guò)對(duì)咳嗽模型大鼠咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期前后比較，評(píng)價(jià)8種成分的止咳效果.L-薄荷醇、L-茶氨酸、木香烴內(nèi)酯、西貝堿、菖蒲酮和臭靈丹提取物6種成分不同程度減少了咳嗽模型小鼠的咳嗽次數(shù)并延長(zhǎng)了咳嗽潛伏期，咳嗽模型小鼠對(duì)過(guò)敏原刺激耐受性提高，咳嗽反應(yīng)敏感性下降，提示L-薄荷醇、L-茶氨酸、木香烴內(nèi)酯、西貝堿、菖蒲酮和臭靈丹提取物6種功效型成分發(fā)揮了舒喉止咳的保健效果.

2.2 功效型電子煙對(duì)哮喘模型大鼠的肺功能影響

運(yùn)用EMKA清醒式肺功能儀檢測(cè)動(dòng)物肺功能，與Control組比較，Model組大鼠Te延長(zhǎng)、PEF、EF50%和EV下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示哮喘模型基本形成；與Model組比較，L-薄荷醇組哮喘模型大鼠的Te下降，EF50%增大，均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；L-茶氨酸組哮喘模型大鼠Te下降，PEF和EF50%增大，均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；丁香酚組哮喘模型大鼠PEF、EF50%和EV增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；木香烴內(nèi)酯組哮喘模型大鼠PEF和EV增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；西貝堿組哮喘模型大鼠Te下降，PEF增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；菖蒲酮組喘模型大鼠Te下降，PEF增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；7, 4′-二羥基黃酮喘模型大鼠PEF和EV增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；臭靈丹提取物組哮喘模型大鼠PEF和EF50%增大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)圖2.

注：組間比較采用 one way analysis of variance；*:Control組vs Model組P<0.05；#: Model組vs試驗(yàn)組P<0.05圖2 功效型電子煙對(duì)哮喘模型大鼠Te(A)、PEF(B)、EF50%(C)和EV(D)的影響Fig.2 Effects of functional e-cigarettes on asthma model rats’ Te (A), PEF (B), EF50% (C) and EV (D)

過(guò)敏性哮喘[17-20](Allergic asthma)的特征為嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性，它是一種由多種細(xì)胞(如嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分共同參與的慢性氣道炎癥性疾病.其中，免疫-炎癥反應(yīng)是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制，抗原通過(guò)抗原呈遞細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)激活T細(xì)胞，活化的輔助性T細(xì)胞(主要是TH2細(xì)胞)產(chǎn)生白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10和IL-13等進(jìn)一步激活B細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞，造成氣道炎癥反應(yīng)，過(guò)敏原通過(guò)APC激活T細(xì)胞是發(fā)生氣道炎癥的重要始動(dòng)環(huán)節(jié).哮喘發(fā)作時(shí)，表現(xiàn)為呼氣性通氣障礙.Te、PEF、EF50%和EV直觀反映了呼氣功能是否存在通氣阻塞，是平喘效果評(píng)價(jià)的重要考察指標(biāo).

從大鼠清醒肺功能指標(biāo)來(lái)看，薄荷醇、茶氨酸、木香烴內(nèi)酯、丁香酚、西貝堿、菖蒲酮、黃酮和臭靈丹8種功效型電子煙對(duì)哮喘模型大鼠肺功能的指標(biāo)均有不同程度改善：L-薄荷醇對(duì)Te、EF50%有顯著改善；L-茶氨酸對(duì)Te、PEF和EF50%有顯著改善；丁香酚對(duì)PEF、EF50%和EV有顯著改善；木香烴內(nèi)酯對(duì)PEF和EV有顯著改善；西貝堿對(duì)Te、PEF有顯著改善；菖蒲酮對(duì)Te、PEF有顯著改善；7, 4′-二羥基黃酮對(duì)PEF和EV有顯著改善；臭靈丹對(duì)PEF和EF50%有顯著改善；其中對(duì)肺功能L-茶氨酸和丁香酚呼氣指標(biāo)的綜合療效顯著.

2.3 哮喘模型大鼠肺組織病理切片

取材動(dòng)物肺組織肉眼觀察：取材動(dòng)物肺組織時(shí)，對(duì)比Control組，觀察Model組大鼠肺組織呈暗紅色，存在明顯腫脹，L-薄荷醇組、L-茶氨酸組、丁香酚組、木香烴內(nèi)酯組、西貝堿組、菖蒲酮組、7, 4′-二羥基黃酮組和臭靈丹提取物組存在輕微腫脹.

肺組織顯微鏡觀察：Model組可見(jiàn)明顯的哮喘病理改變(見(jiàn)圖3B)：支氣管內(nèi)有黏稠痰液，支氣管壁增厚，黏膜腫脹充血，平滑肌肥大，基底膜增厚并發(fā)生玻璃樣變；L-薄荷醇組、L-茶氨酸組、丁香酚組、木香烴內(nèi)酯組、西貝堿組、菖蒲酮組、7, 4′-二羥基黃酮組和臭靈丹提取物組與Model組相比，黏膜水腫程度減輕，但仍存在一定炎癥：?jiǎn)魏思?xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)，黏液中可見(jiàn)少量菱狀Charcot-Leyden晶體(嗜酸性粒細(xì)胞崩解產(chǎn)物).肺組織病理切片結(jié)果見(jiàn)圖3(40倍視野).

注：在B圖中，紅色箭頭示“支氣管黏膜上皮杯狀細(xì)胞增多、平滑肌肥大、基底膜增厚并發(fā)生玻璃樣變”，黑色箭頭示“支氣管黏膜固有層、下層和肌層有單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)”，綠色箭頭示“支氣管腔內(nèi)見(jiàn)黏液栓其中可見(jiàn)夏克萊登結(jié)晶”A: Control組；B: Model組；C: L-薄荷醇組；D: L-茶氨酸組；E: 丁香酚組；F: 木香烴內(nèi)酯組；G: 西貝堿組；H: 菖蒲酮組；I: 7,4′-二羥基黃酮組；J: 臭靈丹提取物組圖3 哮喘模型大鼠肺組織病理切片F(xiàn)ig.3 Pathological sections of lung tissue on asthma model rats：A. control group; B. model group; C.L-menthol group; D.L-theanine group; E. eugenol group; F. costunolide group; G. sipeimine group; H. Shyobunone group; I.7, 4′-dihydroxy flavonoids group; J. Laggera pterodonta extract group

通過(guò)哮喘模型大鼠的肺組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)：Model組顯微鏡下能觀察到明顯哮喘病理改變，大鼠肺基底膜增厚并發(fā)生玻璃樣變，支氣管內(nèi)有黏稠痰液，支氣管壁增厚，黏膜腫脹充血，提示基礎(chǔ)煙液煙霧暴露會(huì)導(dǎo)致支氣管炎癥；進(jìn)行功效型電子煙煙霧暴露后，哮喘模型組大鼠哮喘減輕，支氣管內(nèi)量炎性因子減少，黏膜腫脹充血緩解，提示8種添加成分具有一定抗炎效果，能不同程度緩解煙霧暴露帶來(lái)的支氣管炎癥.

3 結(jié) 論

通過(guò)開(kāi)展含不同功效電子煙對(duì)動(dòng)物模型的止咳平喘實(shí)驗(yàn)研究，表明在電子煙煙液中添加L-薄荷醇、L-茶氨酸、丁香酚、木香烴內(nèi)酯、西貝堿、菖蒲酮、7, 4′-二羥基黃酮和臭靈丹成分能提高機(jī)體對(duì)過(guò)敏原刺激耐受性，使咳嗽反應(yīng)敏感性下降，達(dá)到了舒喉止咳的保健效果，其中木香烴內(nèi)酯效果最佳；添加L-薄荷醇、L-茶氨酸、丁香酚、木香烴內(nèi)酯、西貝堿、菖蒲酮、7, 4′-二羥基黃酮和臭靈丹提取物對(duì)哮喘模型大鼠肺功能各指標(biāo)改善情況各有優(yōu)勢(shì)，其中L-茶氨酸和丁香酚綜合療效顯著，明顯改善了哮喘的呼氣障礙.