肖含 李?yuàn)檴?崔思洋 周芳宇 李雨艷

（吉林金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司 吉林長(zhǎng)春 130000）

1 前言

原發(fā)性肝癌（PHC）發(fā)病率高且進(jìn)展快速、侵襲性較強(qiáng)，早期無(wú)典型癥狀，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)。因此，探尋一種準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法，提升PHC的早期診斷效能，對(duì)改善患者預(yù)后具有重要影響[1]。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是診斷PHC的常用方法，但使采取單一指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，其特異度、靈敏度較低，缺乏組織及器官特異性[2]。而AFP、CEA、CA125聯(lián)合檢測(cè)在PHC診斷中的特異度、靈敏度較高，故應(yīng)用廣泛。對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)之間的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，對(duì)保證檢測(cè)結(jié)果的一致性、準(zhǔn)確性和可比性極為重要，故本文就不同檢測(cè)系統(tǒng)之間的檢測(cè)差值進(jìn)行比較和分析，以期為相關(guān)人員提供參考。

2 材料與試劑

2.1 標(biāo)本采集

采集在本院進(jìn)行健康體檢的人員的血液標(biāo)本40份。納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)相關(guān)血液疾??；檢查各項(xiàng)血液指標(biāo)均正常；以《臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本收集與處理》（WS/T225-2002）[3]為準(zhǔn)則。

2.2 儀器與試劑

X系統(tǒng)：全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀（雅培i2000SR）及其配套AFP、CEA、CA125試劑；Y系統(tǒng)：化學(xué)發(fā)光儀（博奧賽斯Axceed260）及其配套AFP、CEA、CA125試劑。

3 方法

3.1 質(zhì)控

于X系統(tǒng)（參考系統(tǒng)-雅培）和Y系統(tǒng)（實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)-博奧）中，給予伯樂(lè)質(zhì)控品，進(jìn)行室內(nèi)全面質(zhì)控，以保障所有質(zhì)控結(jié)果均符合正常標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 驗(yàn)證精密度

本文借助相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)性文件，以CLSI的EP15-A2為參考評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)值[4]，測(cè)定流程以樣本檢測(cè)順序逐一進(jìn)行。選取2個(gè)不同濃度樣本，每天檢測(cè)4個(gè)批次，每批檢測(cè)1次，連續(xù)檢測(cè)5 d，共20個(gè)數(shù)據(jù)。并統(tǒng)計(jì)所得數(shù)據(jù)的均值、SD、CV，計(jì)算的CV要求≤1/3Tea。對(duì)S批內(nèi)與CV批內(nèi)、S批間與CV批間的標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行計(jì)算。

3.3 驗(yàn)證線性規(guī)范

以NCCLS的EP6-A文件為根據(jù)[5]，以高值標(biāo)本（H）為高值血清標(biāo)本（其水平與線性范圍上限相近），以低值標(biāo)本（L）為低值血清標(biāo)本（其水平與線性范圍的下限相近），根據(jù)1H+4L、4H+1L、2H+3L、5H、3H+2L、5L配置H及L，共6個(gè)水平。對(duì)上述水平中3個(gè)項(xiàng)目CEA、CA125、AFP，利用X和Y系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。各水平均評(píng)估2次，取均值，并利用線性回歸對(duì)水平與理論值進(jìn)行分析。X作為橫坐標(biāo)表示稀釋后理論值，Y作為縱坐標(biāo)表示實(shí)測(cè)平均值，對(duì)回歸方程進(jìn)行計(jì)算，具體方法：Y＝aX+b和決定系數(shù)（R2），斜率a值0.95～1.05。R2評(píng)估線性標(biāo)準(zhǔn)：R2≥0.95。

3.4 驗(yàn)證參考區(qū)間

以CLSI的EP方案為參考標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)流程遵循樣本檢測(cè)程序，選取正常健康人樣本20份，每份樣本測(cè)定1次。在20份測(cè)試對(duì)象的數(shù)據(jù)中，如果有不超過(guò)1個(gè)檢測(cè)結(jié)果（95%置信區(qū)間）在實(shí)驗(yàn)室采納的參考區(qū)間界限以外，則表明實(shí)驗(yàn)室采納的參考區(qū)間可接受。

3.5 方法學(xué)

比對(duì)40份已納入的臨床血清樣本，使用X系統(tǒng)和Y系統(tǒng)檢測(cè)，對(duì)結(jié)果行線性回歸分析，得出Y＝aX+b方程結(jié)果及R2，以此分析X系統(tǒng)和Y系統(tǒng)的測(cè)試結(jié)果。

4 結(jié)果

4.1 批內(nèi)和批間精密度

X、Y系統(tǒng)檢測(cè)AFP，CEA，CA125項(xiàng)目批內(nèi)和批間精密度，詳見表1。

表1 2個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的AFP，CEA，CA125項(xiàng)目批內(nèi)和批間精密度

4.2 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

選取混合血清，將AFP、CEA、CA125等水平按照配制關(guān)系進(jìn)行稀釋和計(jì)算，橫坐標(biāo)作為理論預(yù)期值，縱坐標(biāo)作為實(shí)測(cè)值，借助高等數(shù)學(xué)行數(shù)據(jù)檢驗(yàn)，以線性回歸方式執(zhí)行。經(jīng)計(jì)算得出：AFP：Y=0.98844X+2.2212，R2值為0.9992，詳見表2；CEA：Y=0.9999X-6.4297，R2值為0.998，詳見表3；CA125：Y=0.9918X+4.4677，R2值為0.9955，詳見表4。

表2 Y系統(tǒng)AFP線性范圍測(cè)試結(jié)果（ng/ml）

表3 Y系統(tǒng)CEA線性范圍測(cè)試結(jié)果（ng/ml）

表4 Y系統(tǒng)CA125線性范圍測(cè)試結(jié)果（U/ml）

斜率范圍在0.95～1.0之間，R2≥0.95，這表明Y系統(tǒng)復(fù)合廠家規(guī)定線性范圍，滿足本文檢驗(yàn)需求，具體線性范圍：AFP：0～500 ng/ml；CEA：0～500 ng/ml；CA125：0～500 U/ml。

4.3 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

選取AFP、CEA、CA125健康人員樣本20份，每份樣本測(cè)定1次。填寫《健康問(wèn)卷調(diào)查表》，在20份測(cè)試對(duì)象的數(shù)據(jù)中，有不超過(guò)1個(gè)檢測(cè)結(jié)果（95%置信區(qū)間）在實(shí)驗(yàn)室采納的參考區(qū)間界限以外，則表明實(shí)驗(yàn)室采納的參考區(qū)間可接受。

4.4 方法學(xué)樣本比對(duì)

為保證檢驗(yàn)結(jié)果的精確性，選取40份新鮮的臨床血清樣本，采用X系統(tǒng)和Y系統(tǒng)共同實(shí)施檢測(cè)，利用線性回歸對(duì)檢測(cè)結(jié)果實(shí)施評(píng)估，評(píng)估后線性回歸方程分別為：AFP：Y=0.0.8775X+4.57，R2值為0.9975；CEA：Y=0.934X+0.5442，R2值為0.9996。CA125：Y=0.0.8946X-0.1084，R2值為0.9998。三者均滿足斜率在0.95～1.0，且R2≥0.95，可見不同檢測(cè)系統(tǒng)的AFP、CEA、CA125檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性。

5 討論

AFP是臨床公認(rèn)的PHC診斷早期篩查方法，其中原發(fā)性肝癌高危者聯(lián)合應(yīng)用血清AFP及肝臟超聲進(jìn)行篩查，作用顯著。本文采用雅培i2000SR（X系統(tǒng)）和博奧賽斯Axceed 260（Y系統(tǒng)），同時(shí)檢測(cè)甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖類抗原125（CA125），對(duì)這3個(gè)項(xiàng)目分別進(jìn)行精密度、線性范圍，參考區(qū)間和方法學(xué)比對(duì)驗(yàn)證。結(jié)果表明，其精密度、參考區(qū)間和線性范圍均能符合指標(biāo)。在方法學(xué)比對(duì)中，這3個(gè)項(xiàng)目均滿足斜率在0.95～1.0且R2≥0.95。由此可見，AFP、CEA、CA125指標(biāo)應(yīng)用于雅培i2000SR系統(tǒng)和博奧賽斯Axceed 260系統(tǒng)的檢測(cè)作用效果明顯。在日常檢測(cè)中，為保證質(zhì)量，采用不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)驗(yàn)證。