文 李娜（樂山市疾病預(yù)防控制中心）

目前，發(fā)達國家、發(fā)展中國家都普遍存在食物中生物性污染這一嚴重現(xiàn)象，該因素是影響食品安全問題的重要原因，致病性微生物對于消費者生命而言危害性極大。近些年來，各國都在重點關(guān)注食品安全問題，同時也采取了一系列有效措施，而想要明確食源性致病菌在食物鏈中的相關(guān)食品，并盡可能避免食物污染，極大程度地依賴于對致病菌的檢測水平以及能力。以往傳統(tǒng)的檢測方式對于難以培養(yǎng)的致病菌無法實施檢測，并且檢測方式耗時較長，想要獲取檢測結(jié)果需要幾天時間，因此不能起到實質(zhì)性的檢測、預(yù)防作用。鑒于此，發(fā)展新的快速檢測技術(shù)是及時防控致病菌傳播的關(guān)鍵所在。本文就來說一說食源性致病菌快速檢測技術(shù)到底有哪些？

免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)檢測技術(shù)主要指的是將抗體、抗原反應(yīng)的特異性有效結(jié)合酶的高催化作用，屬于一種較為全面的綜合技術(shù)，能有效定位、定量及定性，敏感度、專一性均較高。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。Engvall于1971年創(chuàng)建了ELISA方法，將酶作為標記物，對抗體或是抗原進行有效標記，并利用酶促反應(yīng)所起到的放大作用將初級免疫學(xué)反應(yīng)進一步顯示，同時通過聚苯乙烯微量反應(yīng)板將抗體或是抗原吸附，進而使其固相化，而后再于其中實施免疫反應(yīng)。ELISA方法具有較強的實用性，同時檢測結(jié)果客觀、準確率較高，并且還能對大量樣品進行處理，這些優(yōu)點彌補了以往傳統(tǒng)化學(xué)分析方法和其他傳統(tǒng)儀器檢測方法上存在的不足之處。但是ELISA對于試劑的選擇性較高，同一時間難以對多種成分進行有效分析，并且針對結(jié)構(gòu)相似的化合物，會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。另外，在對小分子量化合物進行分析時存在一定的難度。免疫磁性分離技術(shù)。免疫磁性分離技術(shù)主要指的是通過將特異性抗體偶聯(lián)于磁性顆粒表面，使得樣品中存在的致病菌與其特異性結(jié)合，而存在致病菌的磁性顆粒在外加磁場的作用下，聚集于磁極方向，這種情況下將檢樣混合液取出，不斷地分離致病菌，使其濃縮。免疫磁性分離技術(shù)可以替代以往傳統(tǒng)的選擇性增菌培養(yǎng)環(huán)節(jié)，并且可以有效地將需要檢驗的微生物從試驗樣品中有效、快速分離。免疫膠體金技術(shù)（GICT）。Faulk等在1971年電鏡免疫膠體金染色法實驗對沙門氏菌進行觀察時創(chuàng)建了免疫膠體金技術(shù)。該技術(shù)的應(yīng)用原理主要是將微孔濾膜作為載體，包被已知的致病菌抗體、抗原，再將待檢標本加入后，在濾膜的作用下讓標本內(nèi)的抗體或是抗原有效結(jié)合膜上包被的抗體或是抗原，而后再應(yīng)用膠體金結(jié)合物進行標記，從而實施有效監(jiān)測。該技術(shù)的優(yōu)點在于具有較高的特異性、敏感度，不需要再應(yīng)用其他儀器，實際操作相對簡單，且快速，在幾分鐘內(nèi)便可以對實驗結(jié)果進行肉眼觀察，同時還能將實驗結(jié)果加以保持。

聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測技術(shù)

多重PCR檢測技術(shù)（m-PCR）。PCR技術(shù)現(xiàn)目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于檢測食品中的單一致病菌，并取得了較佳的效果。但是由于食品中通常存在多重致病菌，因此就需要建立多重PCR，便同時檢測多種食源性致病菌。m-PCR主要指的是在同一反應(yīng)體系內(nèi)，將多種特異性引物加入，加入后如若出現(xiàn)與各引物互補的模板，則可以同時在同一反應(yīng)管內(nèi)對目的DNA片段進行擴增，進而滿足同一時間一次性對多種致病菌實施檢測的需求。

定量PCR檢測技術(shù)。定量PCR檢測技術(shù)則是對以往所應(yīng)用的定性PCR技術(shù)進行的補充和延伸，主要指的是在PCR反應(yīng)體系內(nèi)加入標記物，進而通過觀察標記物的表達量，在對其定性的情況下再進行定量。其中又細分為內(nèi)標定量PCR與定時熒光定量PCR。①內(nèi)標定量PCR：內(nèi)標定量PCR主要是應(yīng)用的終點檢測方式，指的是在PCR處于平臺期階段時實施檢測，首先創(chuàng)建常規(guī)PCR，通過對數(shù)期后，逐步擴增至平臺期，但是檢測重顯性相對較差。鑒于此，是難以從終點產(chǎn)物中直接將起始模板量推算出來的，但是在加入內(nèi)標后，便可以將部分終點產(chǎn)物定量所致的不確定性消除，進而起到定量的作用。內(nèi)標定量主要包括ELISA法、競爭法、內(nèi)參照法等。將內(nèi)標物加入PCR反應(yīng)觀眾后，可以消除PCR在逐步擴增時標本之間及反應(yīng)管內(nèi)存在的差異，其中方法的關(guān)鍵所在是對內(nèi)標物進行有效構(gòu)建。構(gòu)建的基礎(chǔ)原則在于內(nèi)標物應(yīng)具有一定的靶基因相同擴增效率及條件。②實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR檢測技術(shù)不需要內(nèi)標物，但是需要在反應(yīng)體系中加入一定量的熒光基團，并通過實施監(jiān)測熒光信號，觀察PCR進程，進而在應(yīng)用標準曲線對未知的模板實施定量分析，不僅可以突破以往內(nèi)標定量PCR只能夠于終點進行檢測存在的局限性，還能實現(xiàn)每一輪循環(huán)均可以對熒光信號強度再實施一次檢測，并詳細記錄與電腦中，而通過計算每個樣品的Ct值，再根據(jù)標準曲線得出相應(yīng)的定量結(jié)果。實時熒光定量PCR將分子雜交與DNA擴增同時實施，并且應(yīng)用閉管檢測，DNA在擴增后不需要電泳，檢測自動化，極大程度地降低了污染發(fā)生的風(fēng)險，同時還進一步提升了檢測結(jié)果的特異度、靈敏度。

小結(jié)

隨著對于食源性致病菌快速檢測技術(shù)研究的不斷深入，越來越多的新技術(shù)在持續(xù)發(fā)展，而在食源性致病菌檢測過程中，這一系列新的檢測技術(shù)也發(fā)揮著巨大的作用，雖然不同的檢測技術(shù)其作用、適用范圍均有所不同，但是可以充分滿足檢測所需的差異化需求，進而確保我國食品安全，避免不良事件發(fā)生。隨著時代的進步，科學(xué)技術(shù)也在不斷發(fā)展，食源性致病菌快速檢測方式也在不斷地完善、改進，同時檢測標準也在發(fā)生變化，相信以后還會出現(xiàn)更簡便、更快速、更有效的檢測技術(shù)，進而滿足人們對食品安全的高需求。