史蘭香，牟 微，王永彬，張寶華

（1.石家莊學院 化工學院，河北 石家莊 050035；2.趙縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 石家莊 051530）

0 引言

B 族維生素在同型半胱氨酸代謝中起著重要作用，當飲食中及血循環(huán)中維生素B 含量低時，同型半胱氨酸便可積聚. 同型半胱氨酸可促進血小板激活，使血小板的粘附性和聚集性亢進，使血栓易于發(fā)生. 研究表明，葉酸、維生素B6 和維生素B12 可降低血清中同型半胱氨酸濃度，從而減少冠心病等的發(fā)病率. 維生素B6 是體內(nèi)輔酶的組成成分，是人體脂肪和糖代謝的必需物質(zhì)，與氨基酸代謝關(guān)系密切[1]. 維生素B6 可以使二磷酸腺苷（ADP）及腎上腺素誘導的血小板聚集明顯受抑，使膠原誘導的血小板聚集輕度受抑，具有一定的抑制血小板凝集與血液凝固的作用[2，3]. 但維生素B6 是易于相互轉(zhuǎn)換的3 種吡啶衍生物-吡哆胺、吡哆醛、吡哆醇的總稱，其水溶性很強，不耐高溫，遇光和遇堿易被破壞失效，生物利用度較低.

阿司匹林（乙酰水楊酸）為抗血小板聚集藥. 它通過對血小板的環(huán)氧合酶乙?；瘉頊p少血栓素A2 的生成，從而不可逆地抑制血栓素A2 誘導的血小板聚集產(chǎn)生，具有阻抑血小板誘聚劑二磷酸腺苷或腎上腺素誘導血小板聚集作用，對低濃度膠原、凝血酶、抗體-抗原復合物、某些病毒和細菌所致的血小板聚集也具有抑制作用[4-7]. 但阿司匹林分子中含有羧基，口服給藥對胃黏膜有刺激性，長期使用易引起胃潰瘍及導致腎臟毒性. 為了克服維生素B6 和阿司匹林單獨用藥存在的缺點，依據(jù)藥物拼合原理，本研究基于維生素B6 與乙酰水楊酸的抑制血栓功能，以維生素B6 與乙酰水楊酰氯為原料，在堿存在的條件下，制備了新型維生素B6 乙酰水楊酸衍生物，以期獲得具有雙重抑制血栓功能的前藥，提高其生物利用度.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

AC-500 型核磁共振儀（Bruker 公司）；QX-200 型血小板聚集儀（上海隆拓儀器設備有限公司）；6460 型質(zhì)譜儀（安捷倫公司）；EA 2400 II 型元素分析儀（珀金埃爾默公司）；維生素B6、乙酰水楊酰氯和二磷酸腺苷購于國藥集團化學試劑有限公司；其他試劑均為分析純.

1.2 方法

1.2.1 維生素B6 乙酰水楊酸衍生物的制備

將102.5 g（0.5 mol）維生素B6 懸浮于500 mL 有機溶劑中，加入 1.65 mol 堿，加熱至一定溫度，加入217.8 g（1.1 mol）乙酰水楊酰氯，保溫反應一定時間后，過濾除鹽，加入250 mL 水，攪拌，分層，有機溶劑萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮，硅膠柱層析純化[淋洗液∶V（石油醚）∶V（乙酸乙酯）=5∶1]，制得維生素 B6 乙酰水楊酸衍生物，收率為 93.7%.1H NMR（400 MHz，DMSO-d6），δ：10.62（brs，1H，HOAr），9.61（s，1H，CHAr），7.95～8.00（m，2H，CHAr），7.53（m，2H，CHAr），7.10～7.30（m，4H，CHAr），5.51（s，2H，CH2Ar），4.79（s，2H，CH2Ar），2.61（s，3H，CH3），2.34（s，6H，CH3）. ESI-MS（m/z）：494[M+H]+. 元素分析：C26H23NO9，計算值：C，63.28，H，4.70，N，2.84；實測值：C，63.26，H，4.71，N，2.85.

將維生素B6 乙酰水楊酸衍生物溶于乙酸乙酯中，加入等摩爾量的氯化氫乙酸乙酯溶液，在室溫條件下攪拌2 h，過濾，干燥，制得維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽，收率100%. 合成路線如圖1 所示.

圖1 維生素B6 乙酰水楊酸衍生物合成路線

1.2.2 體外血小板聚集的抑制

抗凝血離心分離富血小板血漿（PRP）和貧血小板血漿（PPP）. 以生理鹽水為陰性對照，以乙酰水楊酸和維生素B6 為陽性對照，分別配制0.5，1.0，2.0 g/L 的維生素B6 乙酰水楊酸衍生物水溶液，分別加入富血小板血漿，于37 ℃下攪拌10 min，再加入二磷酸腺苷誘聚劑，記錄5 min 內(nèi)最大聚集率，利用式（1）計算藥物的聚集抑制率：

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑的篩選

以三乙胺為堿，固定反應溫度為室溫，反應時間6 h，按1.2.1 節(jié)操作，對有機溶劑進行篩選（表1）. 結(jié)果表明，相同反應條件下，以二氯甲烷為溶劑時，產(chǎn)物收率最高，而以乙酸乙酯為溶劑時，產(chǎn)物收率略低. 但考慮到二氯甲烷在制藥行業(yè)屬二類溶劑，毒性較大，本著藥物制備盡量選擇低毒溶劑的原則，優(yōu)選乙酸乙酯為反應溶劑.

表1 溶劑的篩選

2.2 堿的篩選

固定反應溫度為室溫，反應時間6 h，乙酸乙酯為溶劑，按1.2.1 節(jié)操作，對堿的種類進行篩選（表2）. 結(jié)果表明，以三乙胺為堿時，產(chǎn)物收率最高. 以碳酸氫鈉與醋酸鈉為堿時，收率明顯降低，原因可能是在乙酸乙酯中它們的溶解性較差，對反應產(chǎn)生的氯化氫中和速度較慢，影響了酯化反應的進行. 以碳酸鉀為堿時，收率最低，原因是碳酸鉀堿性較強，與維生素B6 結(jié)構(gòu)中的酚羥基形成了鉀鹽，鉀鹽與乙酰水楊酰氯進一步發(fā)生反應，產(chǎn)生了副產(chǎn)物，導致收率低. 因此，為確保維生素B6 結(jié)構(gòu)中的酚羥基不發(fā)生或少發(fā)生副反應，所選縛酸劑的堿性強弱一定要適中，這也是影響產(chǎn)品收率的關(guān)鍵因素之一，優(yōu)選三乙胺為堿.

表2 堿的篩選

2.3 反應溫度的影響

固定反應時間6 h，乙酸乙酯為溶劑，三乙胺為堿，按1.2.1 節(jié)操作，考察反應溫度對反應的影響，如表3所示. 結(jié)果表明，隨著反應溫度的升高，產(chǎn)物收率增大，這說明升溫可以加快該反應的進行. 當反應溫度為45～50 ℃時，產(chǎn)物收率達到93.7%，繼續(xù)升溫至回流，收率不再有大的改變，故優(yōu)選反應溫度為45～50 ℃.

表3 反應溫度的影響

2.4 反應時間的影響

固定乙酸乙酯為溶劑，三乙胺為堿，反應溫度45～50 ℃，按1.2.1 節(jié)操作，考察反應時間對反應的影響（表4）. 結(jié)果表明，隨著反應時間的延長，產(chǎn)物收率逐漸提高，反應時間為5 h 時，產(chǎn)物收率最高，繼續(xù)延長反應時間，產(chǎn)物收率不再發(fā)生變化，故優(yōu)選反應時間為5 h.

表4 反應時間的影響

2.5 摩爾配比的影響

固定乙酸乙酯為溶劑，三乙胺為堿，反應溫度45～50 ℃，反應時間5 h，按1.2.1 節(jié)操作，考察物料摩爾配比對反應的影響（表 5）. 結(jié)果表明，當 n（VB6）∶n（乙酰水楊酰氯）∶n（三乙胺）=1.0∶2.2∶3.3 時，產(chǎn)物收率最高，繼續(xù)增大乙酰水楊酰氯和三乙胺的用量，對產(chǎn)物收率影響有限.

表5 摩爾配比的影響

2.6 體外血小板聚集抑制效果評價

按1.2.2 節(jié)操作，對維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽的血小板聚集抑制率進行了考察（表6）. 結(jié)果顯示，維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽對血小板聚集抑制率顯示出一定的量效關(guān)系，濃度越高對血小板聚集抑制越強. 在2.0 g/L 的濃度下，相較維生素B6 和乙酰水楊酸，維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽的血小板聚集抑制率分別提高了3.8 倍和2 倍. 相較1 mol 維生素B6 與2 mol 阿斯匹林的混合物，維生素B6乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽的血小板聚集抑制率提高了1.18 倍，這充分說明了維生素B6 乙酰水楊酸衍生物前藥的抗血栓效果優(yōu)于維生素B6 與阿司匹林聯(lián)合給藥效果，更優(yōu)于維生素B6 和乙酰水楊酸單獨使用抗血栓的效果，充分體現(xiàn)出了前藥的優(yōu)越性.

表6 體外血小板聚集抑制效果評價

3 結(jié)論

制備了新型維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽. 乙酸乙酯為溶劑，三乙胺為堿，n（VB6）∶n（酰氯）∶n（三乙胺）=1.0∶2.2∶3.3，反應溫度 45～50 ℃，反應時間 5 h 為最優(yōu)反應條件，在該反應條件下，維生素 B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽的收率達93.7%. 體外血小板聚集抑制效果評價表明，維生素B6 乙酰水楊酸衍生物鹽酸鹽對血小板聚集抑制率顯著優(yōu)于維生素B6 和阿司匹林聯(lián)合用藥和二者單獨用藥，值得進一步深入研究.