熊光冰 王敏 朱峰 秦仁義

胰腺癌是一種臨床發(fā)現(xiàn)晚、惡性程度高和預(yù)后差的消化系統(tǒng)惡性腫瘤[1]。其中，最常見的病理類型為胰腺導(dǎo)管腺癌。流行病學(xué)研究表明，其5年總體生存率在9%以下，分別位居我國和美國惡性腫瘤致死因素的第6位和第4位，并呈逐年上升趨勢，預(yù)計(jì)于2030年成為美國第2位的腫瘤相關(guān)死亡原因[2]。根治性手術(shù)切除是胰腺癌目前唯一可能的治愈手段，但80%左右的病人在初次就診時已不可切除或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[3]?；熓歉纳撇荒苁中g(shù)病人預(yù)后的重要治療策略，然而以吉西他濱為基礎(chǔ)的單藥或聯(lián)合用藥方案并沒有大幅度延長病人的總體生存時間，大部分晚期病人的中位生存時間仍小于1年。究其原因，早期臨床癥狀不典型、缺乏靈敏且特異的早期診斷標(biāo)志物是主要因素[4]。因此，研究用于胰腺癌病人早期診斷的腫瘤標(biāo)志物，以提高早期診斷率和手術(shù)可切除率，對于改善病人預(yù)后具有重要的臨床意義。

目前，臨床上診斷胰腺癌的常用方法包括血液學(xué)檢測、影像學(xué)檢查及組織病理學(xué)分析。CA19-9是唯一被美國食品藥品管理局批準(zhǔn)用于胰腺癌診斷的血液學(xué)檢測標(biāo)志物，但隨著對CA19-9的深入研究發(fā)現(xiàn)，CA19-9及其他消化道腫瘤標(biāo)志物(如CEA、CA125、CA72-4等)對于胰腺癌早期診斷的靈敏度與特異度均不高，甚至在與慢性胰腺炎的鑒別診斷中可產(chǎn)生假陽性結(jié)果[5-6]。增強(qiáng)CT(contrast-enhanced computed tomography)和核磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)是臨床上常用的影像學(xué)檢查手段，但現(xiàn)有的研究證據(jù)表明，二者在胰腺癌早期診斷方面存在不足[6-7]。而在診斷方面具有較高靈敏度的正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(positron emission tomography/CT，PET/CT)因其昂貴的檢查費(fèi)用限制了其廣泛的使用[6,8]。內(nèi)鏡超聲引導(dǎo)下的細(xì)針穿刺(endoscopic-ultrasound guided fine-needle aspiration,EUS-FNA)是目前胰腺癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，文獻(xiàn)報(bào)道其靈敏度和特異度可高達(dá)86.8%和95.8%[9-10]。然而，一方面由于EUS-FNA屬于復(fù)雜的侵入性操作，不僅具有操作并發(fā)癥發(fā)生的可能(如腫瘤播散、胰腺炎、出血及消化道穿孔等)，還不易多次重復(fù)進(jìn)行或部分病人不能滿足操作要求；另一方面，因?yàn)橐认侔┨赜械哪[瘤間質(zhì)成分，EUS-FNA僅能提供有限的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行病理相關(guān)細(xì)胞學(xué)分析，往往可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，且不能提供充足的組織完成腫瘤分子生物學(xué)研究以指導(dǎo)治療策略的選擇；從而導(dǎo)致EUS-FNA在胰腺癌診斷上的應(yīng)用受限。因此，臨床上迫切需要新技術(shù)或新的生物標(biāo)志物用來輔助胰腺癌的早期診斷，并克服與侵入性檢查相關(guān)的禁忌證。近年來的研究表明，液態(tài)活檢(liquid biopsy,LB)作為一類新興且熱門的非侵入性檢測技術(shù)，主要從病人血液中獲得腫瘤的相關(guān)信息，主要包括循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)、循環(huán)腫瘤DNA(circulating- tumor DNA,ctDNA)及外泌體(exosomes)等的檢測[4,11]，不僅在胰腺癌早期診斷中發(fā)揮潛在的優(yōu)勢，還可對病人的預(yù)后判斷以及復(fù)發(fā)監(jiān)測有一定的指導(dǎo)意義。

一、液態(tài)活檢的主要檢測內(nèi)容

1.CTCs:CTCs于1869年被首次報(bào)道[12]，是指實(shí)體腫瘤因生長、或腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、或外科手術(shù)操作擠壓等原因，使部分腫瘤細(xì)胞穿過基底膜、細(xì)胞外基質(zhì)及血管管壁等，從而進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞[13]。其在外周血中數(shù)量罕見，每1×108個血細(xì)胞中約含一個，常呈現(xiàn)為單個細(xì)胞或細(xì)胞簇，大小為毛細(xì)血管徑的2 ～ 4倍左右。近年來的研究表明，CTCs檢測在胰腺癌的早期診斷方面扮演著重要角色，一方面腫瘤細(xì)胞可通過EMT過程在胰腺癌發(fā)生發(fā)展的最初始階段就播散入血，如Rhim等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在胰腺癌小鼠模型轉(zhuǎn)化過程中，CTCs早于腫瘤組織病變?yōu)榍忠u性原位癌而出現(xiàn)在外周血中，且CTCs在未惡變?yōu)橐认侔┑?1例胰腺囊性疾病病人的外周血中有7例可檢測出CTCs的相關(guān)標(biāo)志物[15]。另一方面，現(xiàn)有的研究證據(jù)表明，CTCs與胰腺癌的原發(fā)灶和/或轉(zhuǎn)移灶中的腫瘤細(xì)胞在基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)方面存在相關(guān)性；可通過相關(guān)新興技術(shù)對病人外周血中富集而來的CTCs進(jìn)行深入的DNA、RNA及蛋白質(zhì)等分子標(biāo)志物檢測分析以達(dá)到早期診斷目的[16-17]。

2.循環(huán)腫瘤DNA:ctDNA是腫瘤在發(fā)生發(fā)展中的各個階段因?yàn)槟[瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡、壞死及自噬而釋放到外周血中的一種特殊DNA片段，可由基因組DNA、線粒體DNA和非編碼gDNA等組成[18-19]。與CTCs不同，ctDNA在病人的循環(huán)血中可被大量檢測出來，其檢測豐度為0.01%～93%，是與腫瘤負(fù)荷直接相關(guān)的測量值，可間接反映出腫瘤當(dāng)前狀態(tài)。越來越多的證據(jù)表明，ctDNA在胰腺癌早期診斷上具有重要的作用，其一，與健康受試者相比較，胰腺癌病人循環(huán)血中的ctDNA含量顯著升高[20]。其二，盡管胰腺癌細(xì)胞的異質(zhì)性較多樣化，外周血中ctDNA檢測出的胰腺癌特有的基因組學(xué)(KRAS突變)和/或表觀遺傳學(xué)(DNA甲基化)改變等[21-22]，與胰腺癌組織中的相應(yīng)變化具有較高的一致性[23]。

3.外泌體:外泌體是細(xì)胞外膜泡的一種，常呈球狀或柱狀，大小約30～150 nm，密度為1.13～1.19 g/ml，多由正常細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞因胞吐作用而分泌到細(xì)胞外或外周血中[24]。其包含大量的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸(DNA、mRNA、microRNA及l(fā)ong non-coding RNA)等信號分子，是腫瘤細(xì)胞之間和/或與腫瘤微環(huán)境之間信號傳導(dǎo)的重要途徑，參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥等[25]。有研究發(fā)現(xiàn)，外泌體可作為胰腺癌早期診斷的重要探索方向。首先，外泌體主要是活細(xì)胞所分泌，其在外周循環(huán)血中出現(xiàn)的時間早于因腫瘤細(xì)胞壞死而釋放的ctDNA，理論上可在腫瘤早期階段予以檢測[26]。其次，雖然外泌體的檢測豐度取決于腫瘤的狀態(tài)和所研究的體液，但研究表明，胰腺癌病人循環(huán)血中的外泌體的數(shù)量顯著高于健康受試者。然后，在腫瘤的各個階段都可分泌的外泌體，因其天然的脂質(zhì)雙分子層模型保證了血循環(huán)中的高穩(wěn)定性，且可攜帶大分子量的核酸或蛋白質(zhì)等物質(zhì)，并在其內(nèi)部或表面上具有腫瘤特異性標(biāo)志物，使其成為胰腺癌液態(tài)活檢較好的檢測內(nèi)容[23]。

4.其他潛在的早期診斷標(biāo)志物:有報(bào)道表明，外周血循環(huán)中的RNA、血小板及免疫細(xì)胞等都可能是胰腺癌早期診斷方面潛在的液態(tài)活檢標(biāo)志物[23]。循環(huán)血RNA的檢測可提供胰腺癌在遺傳學(xué)和/或表觀遺傳學(xué)等方面改變而導(dǎo)致的基因表達(dá)變化信息，較ctDNA檢測更具腫瘤特異性，特別是非編碼RNA檢測，如多項(xiàng)研究已證實(shí)，microRNA(miRNA)檢測在區(qū)分胰腺癌病人與健康人或其他胰腺疾病病人方面顯示了非常高的準(zhǔn)確性，可作為胰腺癌早期診斷的分子標(biāo)志物[18,27]。血小板在腫瘤細(xì)胞生長、遷移、侵襲及血管生成等方面的重要調(diào)控作用，使其成為了胰腺癌早期診斷方面潛在的標(biāo)志物，如Best等[28]通過對腫瘤病人血小板RNA進(jìn)行測序，發(fā)現(xiàn)與55例健康受試者相比，288例腫瘤病人(35例胰腺癌)的診斷準(zhǔn)確率可為96%；而對于胰腺癌的診斷，準(zhǔn)確率可達(dá)100%。同時，也有文獻(xiàn)報(bào)道，通過對血小板蛋白質(zhì)組進(jìn)行檢測，可以區(qū)分早期胰腺癌病人和健康人[29]。免疫細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色，或參與機(jī)體免疫應(yīng)答或被腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體所調(diào)控。檢測這些被調(diào)控后的免疫細(xì)胞則為胰腺癌的早期診斷提供了一個可能的契機(jī)，如Chen等[30]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)胰腺癌外泌體誘導(dǎo)后的樹突狀細(xì)胞在mRNA及l(fā)ncRNA表達(dá)上與未誘導(dǎo)的對照組樹突狀細(xì)胞存在顯著差異。

二、液態(tài)活檢在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用

1.CTCs與胰腺癌早期診斷：CTCs檢測在20世紀(jì)90年代后期由于檢測技術(shù)的進(jìn)步再次成為了腫瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，并隨之展現(xiàn)出了廣泛的應(yīng)用前景。美國食品藥品管理局于2004年首先批準(zhǔn)CellSearch系統(tǒng)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌CTCs的檢測，現(xiàn)被認(rèn)為是CTCs檢測研究的金標(biāo)準(zhǔn)[31]。在胰腺癌中，Allard等[32]于2004年，通過CellSearch系統(tǒng)首次在16例確診為胰腺癌病人的循環(huán)血中的6例檢測到CTCs的存在，而并沒有從健康對照組中檢測出CTCs的存在，這表明，CTCs檢測在胰腺癌早期診斷中具有潛在的價(jià)值。然而，由于胰腺癌CTCs較其他腫瘤CTCs的特殊性(EMT過程中丟失檢測標(biāo)志物EpCAM和細(xì)胞角蛋白等)，有研究指出，CellSearch系統(tǒng)在胰腺癌診斷中的準(zhǔn)確率為11%～48%，甚至在部分晚期胰腺癌病人中的檢出率僅為32.3%[31]。為了進(jìn)一步提高胰腺癌病人循環(huán)血中CTCs的檢出率，在基于CellSearch系統(tǒng)的基礎(chǔ)上多種新技術(shù)、新方法被運(yùn)用于CTCs的相關(guān)檢測，如Khoja等[33]運(yùn)用ISET(isolation by size of epithelial tumor cells method)富集方法檢測病人循環(huán)血中的CTCs，從而避免因CTCs表面標(biāo)志物EpCAM等丟失導(dǎo)致的檢出率低。與CellSearch系統(tǒng)相比，ISET方法在27例病人(80%為轉(zhuǎn)移病人)中的檢出率可達(dá)93%，CellSearch系統(tǒng)的檢出率僅為40%。同時，越來越多的研究表明，采用不同檢測方法的CTCs在Ⅰ期和Ⅱ期胰腺癌病人中的診斷敏感性可>70%，如Zhou等[34]采用免疫磁珠分離富集法檢測胰腺癌病人循環(huán)血中CTCs，對25例病人診斷的靈敏性為96%，特異性為100%，其中，對5例早期胰腺癌病人的診斷率可為100%。Xu等[35]應(yīng)用陰性富集結(jié)合免疫熒光原位雜交技術(shù)(negative enrichment and immunostaining-fluorescence in situ hybridization,NE-iFISH)，發(fā)現(xiàn)6/8的胰腺良性疾病(75%)和8/11的早期胰腺癌(73%)病人中存在CTCs(≥1)；Gao等[36]也采用同樣方法的檢出率可達(dá)12/13(92%)。Ankeny等[37]通過微流控法(Microfluidic)對72例胰腺癌和28例胰腺良性疾病病人進(jìn)行CTCs檢測研究顯示，微流控法的敏感性為75%，特異性為96.4%。Kulemann等[38]進(jìn)一步通過ScreenCell方法結(jié)合KRAS基因突變檢測對58例胰腺癌病人和10例健康對照人進(jìn)行CTCs檢測研究，顯示胰腺癌病人CTCs總體檢測率為67%；而Kulemann等[39]采用同樣檢測方法的另一項(xiàng)研究則顯示，早期胰腺癌的檢測率可達(dá)80%(8/10)。綜上，雖然上述研究結(jié)果表明CTCs檢測在胰腺癌早期診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景，但由于CTCs富集方法的不同和檢測標(biāo)志物的多樣性，CTCs在胰腺癌早期診斷中的研究結(jié)果差異較大，仍需大規(guī)模的研究及統(tǒng)一的檢測方法進(jìn)一步探索其臨床應(yīng)用價(jià)值。

2.ctDNA與胰腺癌早期診斷：ctDNA在胰腺癌中的研究始于20世紀(jì)80年代，Shapiro等[40]首次在胰腺癌病人外周血中檢測到ctDNA呈高表達(dá)狀態(tài)(>100 ng/ml)，而Sorenson等[41]隨后通過PCR法在3例胰腺導(dǎo)管腺癌病人血漿中證實(shí)了ctDNA的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌病人血漿中ctDNA的表達(dá)水平與健康對照組、胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤或慢性胰腺炎病人等不同[26]。隨著腫瘤臨床分期的不同ctDNA的檢出率也不同，如Bettegowda等[42]的研究顯示，在155例胰腺癌病人中ctDNA的檢出率隨著TNM分期的上升而增加。這些研究表明，ctDNA可作為胰腺癌早期診斷的生物分子標(biāo)志物。同時，近年來的研究顯示，胰腺癌病人外周血中ctDNA的突變檢測較ctDNA豐度檢測的臨床應(yīng)用價(jià)值更重要。Zill等[43]對54例胰腺癌病人組織和外周血標(biāo)本進(jìn)行突變基因檢測發(fā)現(xiàn)，ctDNA中可檢測到與組織標(biāo)本90%左右相同的基因突變類型。KRAS作為胰腺癌最重要的驅(qū)動基因之一，其在胰腺癌病人外周血中的突變片段可在近一半病人的血漿DNA中被檢測到，而在健康人中幾乎沒有。因此，ctDNA中的KRAS突變檢測可以作為胰腺癌早期診斷的生物標(biāo)志物，如Sausen等[44]采用超敏微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)技術(shù)對51例早期胰腺癌病人的ctDNA 中的KRAS 突變進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示,22例病人(43%)血漿ctDNA中具有KRAS基因突變， ctDNA KRAS突變檢出率的診斷特異度大于99.9%。目前，大多數(shù)研究已經(jīng)將胰腺癌ctDNA KRAS基因突變作為識別循環(huán)腫瘤DNA的檢測標(biāo)志之一。同時，近年來的研究也提示，ctDNA的甲基化檢測也可作為胰腺癌的潛在標(biāo)志物，如Henriksen等[45]通過對95例胰腺癌、97例慢性胰腺炎、59例急性胰腺炎和27例其它非胰腺癌病人外周血中ctDNA甲基化水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示,胰腺癌組ctDNA甲基化基因數(shù)量平均為8.41(95%CI:7.62～9.20)，而對照組為4.74(95%CI:4.40～5.08)，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，診斷胰腺癌的靈敏度為76%、特異度為83%。雖然ctDNA為胰腺癌早期診斷提供了一種可能性，但現(xiàn)有研究也提示，在胰腺癌的早期階段，由于ctDNA的釋放量較低或ctDNA的濃度太低被降解，導(dǎo)致KRAS突變檢測對于胰腺癌早期診斷價(jià)值似乎有限，如在70%～80%局部進(jìn)展期和轉(zhuǎn)移性病人中可檢測到ctDNA中的KRAS突變，而對于可切除病人則為30%～68%[31]。同時，由于胰腺癌組織的特殊性，原發(fā)腫瘤中KRAS突變檢測結(jié)果與ctDNA中的KRAS突變檢測結(jié)果的一致性仍不穩(wěn)定，為25%～75%[4,46]。因而，需要更敏感的核酸處理和分析技術(shù)，以及統(tǒng)一的檢測方法和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

3.外泌體與胰腺癌早期診斷：外泌體因含有豐富的蛋白質(zhì)及核酸等，是胰腺癌早期診斷方面潛在的重要液態(tài)活檢標(biāo)志物，如Melo等[47]于2015年通過對146例胰腺癌病人、32例胰腺良性疾病及120例健康對照人的循環(huán)血外泌體表面標(biāo)志物進(jìn)行檢測分析發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(glypican-1,GPC1)蛋白的表達(dá)顯著升高，對胰腺癌的診斷具有100%的敏感性和特異性，可以早期分辨胰腺癌病人、正常人及胰腺良性疾病病人；Hu等[48]的研究證實(shí)，外泌體內(nèi)GPC1 mRNA的表達(dá)對于胰腺癌早期診斷具有重要的意義，可顯著區(qū)分早期病人和晚期病人，是胰腺癌早期診斷的潛在標(biāo)志物。然而，后續(xù)的相關(guān)研究指出，GPC1缺乏可靠的早期診斷能力，如Castillo等[49]報(bào)道GPC1在正常胰腺組織和胰腺癌細(xì)胞系中都有表達(dá)，因此缺乏診斷的價(jià)值；Lai等[50]對29例胰腺癌和11例慢性胰腺炎病人的循環(huán)血外泌體中的GPC1表達(dá)進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，GPC1不能有效區(qū)分胰腺癌和慢性胰腺炎。同時，相關(guān)研究亦指出GPC1聯(lián)合其他外泌體分子標(biāo)志物的檢測可提高診斷效能，如Yang等[51]報(bào)道，GPC1聯(lián)合EGFR、EpCAM、MUC1及WNT2等的診斷靈敏度和特異度可為86%和81%；Lewis等[52]發(fā)現(xiàn)，GPC1聯(lián)合CD63檢測的診斷靈敏度為99%，特異度82%。究其原因，可能是由于研究方法、檢測對象或?qū)嶒?yàn)試劑的差異導(dǎo)致的。因此，仍需要進(jìn)一步的深入研究GPC1在胰腺癌早期診斷方面的臨床應(yīng)用。此外，有研究報(bào)道鋅指蛋白4(zinc finger protein-4,ZIP4) 亦是胰腺癌早期診斷潛在的標(biāo)志物之一[53]。

近來年的研究表明，循環(huán)血中外泌體內(nèi)miRNA在胰腺癌早期診斷方面具有重要的意義，如Que等[54]于2013年對16例胰腺癌、6例慢性胰腺炎、5例胰腺囊性疾病、5例壺腹癌及6例健康對照組人循環(huán)血外泌體內(nèi)miRNA進(jìn)行檢測分析發(fā)現(xiàn)，miR-17-5p、miR-21及miR-155等呈差異性表達(dá)；Goto等[55]的研究發(fā)現(xiàn)，32例胰腺癌循環(huán)血中外泌體內(nèi)miR-21、miR-191及miR-451a等較29例胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液腫瘤病人(intraductal papillary mucinous neoplasm,IPMN)和22例健康對照組人表達(dá)升高，提示外泌體內(nèi)異常表達(dá)的miRNA是胰腺癌早期診斷的潛在標(biāo)志物之一。然后，Madhavan等[56]通過對131例胰腺癌病人和64健康對照組人循環(huán)血中外泌體內(nèi)miRNA進(jìn)行芯片檢測分析發(fā)現(xiàn)，miR-1246、miR-4644、miR-3976和miR-4306等表達(dá)顯著升高，聯(lián)合這4種miRNA的檢測，可顯著提高胰腺癌的診斷效能，但存在9%的假陽性和20%的假陰性可能。Xu等[57]研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌循環(huán)血中外泌體內(nèi)表達(dá)升高的miR-196a、miR-196b及miR-1246等，在胰腺癌診斷效能評價(jià)中的ROC曲線下面積(AUCs)分別為0.81、0.71和0.73。Lai等[50]對29例胰腺癌和11例慢性胰腺炎病人循環(huán)血中外泌體內(nèi)的檢測發(fā)現(xiàn)，表達(dá)異常的miR-10b、 miR-21、miR-30c、miR-181a及l(fā)et-7a對胰腺癌診斷的靈敏性及特異性均為100%。綜上，以上結(jié)果表明,外泌體內(nèi)miRNA可以作為胰腺癌早期診斷和鑒別診斷的生物標(biāo)志物，但存在研究方法不統(tǒng)一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性較差及檢測樣本例數(shù)較小等問題，仍需進(jìn)一步的深入探索。

少數(shù)研究也探索了循環(huán)血外泌體內(nèi)DNA(exosomal DNA,exoDNA)在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用，如Allenson等[58]通過ddPCR系統(tǒng)在樣本總量為127例可切除的、局部進(jìn)展期及轉(zhuǎn)移性胰腺癌循環(huán)血外泌體內(nèi)可檢測到KRAS基因突變，其檢測率分別為67%、80%和85%，高于外周循環(huán)血中的ctDNA KRAS基因突變檢測率(分別為46%、31%和58%)；在另一項(xiàng)研究中，Yang等[59]應(yīng)用ddPCR系統(tǒng)在48例胰腺癌、9例慢性胰腺炎及7例胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液瘤病人循環(huán)血外泌體內(nèi)檢測到KRAS和TP53基因的突變率分別為40%和4%、55.6%和0、28.6%和14.3%。因此，以上結(jié)果提示了exoDNA可能是胰腺癌早期診斷的潛在標(biāo)志物，然而現(xiàn)有研究表明其在診斷中的作用尚需進(jìn)一步探索。其一，在健康對照人循環(huán)血外泌體內(nèi)可檢測到KRAS突變，突變率可高達(dá)3.5%，可出現(xiàn)假陽性結(jié)果[60]；其二，目前的研究報(bào)道exoDNA在胰腺癌中的診斷效能較差，Allenson等[58]研究報(bào)道exoDNA KRAS突變率的診斷靈敏度和特異度分別為64%和85%，Yang等[59]指出exoDNA KRAS突變率的靈敏度和特異度則分別為40%和97%，總體的診斷準(zhǔn)確率僅為35%～69%。

液態(tài)活檢與傳統(tǒng)組織活檢相比，具有操作簡單、不良反應(yīng)少及經(jīng)濟(jì)成本低等特點(diǎn)，不僅減輕了病人的痛苦，且臨床應(yīng)用更為簡便。雖然CTCs、ctDNA以及外泌體等檢測在胰腺癌早期診斷中的價(jià)值較高，但目前尚不足以替代傳統(tǒng)檢測方法，仍需發(fā)展新的檢測技術(shù)和大規(guī)模的臨床研究驗(yàn)證。隨著液態(tài)活檢技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，該技術(shù)在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用具有廣闊的前景。