陳 燁，魏 浩，張亞東

(遼寧大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧省小分子靶向藥物研究中心，遼寧 沈陽 110036)

0 引言

YAP(Yes-Associated Protein)是Hippo-YAP信號(hào)通路中下游的效應(yīng)蛋白，在1994年由Sudol等人首先發(fā)現(xiàn).YAP也是Hippo信號(hào)通路的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白，在正常情況下發(fā)揮相應(yīng)的生理作用；在非正常情況下YAP會(huì)參與腫瘤的產(chǎn)生，成為致癌基因的角色.通過綜述YAP在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況以及所發(fā)揮的作用，來表明腫瘤與YAP 之間的關(guān)系，從而為YAP在腫瘤治療中提供有力的理論支持.

1 YAP與Hippo信號(hào)通路概述

Hippo-YAP信號(hào)通路最先在果蠅體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，后來陸續(xù)在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)其同源蛋白[1].YAP約65kDa，基因位置位于人類染色體11q22上，包括兩種亞型Yes相關(guān)蛋白1(Yes-Associated Protein 1，YAP1)和Yes相關(guān)蛋白2(Yes-Associated Protein 2，YAP2)，其中YAP1含有一個(gè)WW結(jié)構(gòu)域，YAP2含有兩個(gè)WW結(jié)構(gòu)域[2].在Hippo信號(hào)通路中YAP是最主要的效應(yīng)蛋白，YAP作為細(xì)胞內(nèi)連接蛋白和轉(zhuǎn)錄激活因子，它在細(xì)胞內(nèi)可以調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[3].Hippo信號(hào)通路是一條有關(guān)生長控制、調(diào)節(jié)的通路具有很高的保守性，通過調(diào)控細(xì)胞的增殖與凋亡，從而控制人體器官的大小.

2 Hippo信號(hào)通路的調(diào)節(jié)

2.1 上游調(diào)節(jié)因子的調(diào)節(jié)作用

目前發(fā)現(xiàn)的該因子有蛋白Ex(Expanded，Ex)、原鈣黏蛋白(Fat，F(xiàn)t)、G 蛋白偶聯(lián)受體(G-Protein Coupled Receptor，GPCR)等.Ex蛋白能夠傳遞細(xì)胞表面受體所接受的信號(hào)，正常情況下Ex蛋白會(huì)阻礙細(xì)胞的生長發(fā)育，如果Ex蛋白失活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖.Ft屬于原鈣黏蛋白家族成員，它可以作為Hippo-YAP信號(hào)通路的受體，F(xiàn)t失活會(huì)增強(qiáng)凋亡抑制蛋白1(DrosophilaInhibitor of Apoptosis Protein1，DIAP1)的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖.血液中的溶血磷脂酸(LysophosPhatidicAcid，LAP)與GPCR相結(jié)合后，能增強(qiáng)大腫瘤抑制因子激酶1/2(Largetumorsuppressor homology 1 and 2，Lats1/2)的活性，進(jìn)而活化 YAP[4].對(duì)于上游調(diào)節(jié)因子還需要進(jìn)一步的研究來闡述其具體作用機(jī)制.

2.2 核心組件的調(diào)節(jié)作用

哺乳動(dòng)物的核心激酶鏈?zhǔn)怯傻鞍准っ窶st1/2(Mammalian sterile 20-like kinasesl and 2，Mst1/2)、Lats1/2、蛋白抗體Sav1(Salvador 1，Sav1)等核心組件構(gòu)成.Mst1/2磷酸化后與 Sav1 結(jié)合，進(jìn)而激活 Lats1/2，Lats1/2激活 YAP，使YAP停留在胞質(zhì)中，導(dǎo)致下游基因的表達(dá)受阻.在上述的激酶鏈中，Mst1/2 有多種作用形式活化Lats1/2[5].最新的研究顯示，絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated ProteinKinaseKinaseKinaseKinase，MAP4Ks)在磷酸化后也可以活化Lats1/2[6-8].

2.3 下游效應(yīng)因子的調(diào)節(jié)作用

目前已知的因子有DIAP1、bantam 及結(jié)締組織生長因子(Connective Tissue Growth Factor，CTGF)等.研究發(fā)現(xiàn)，果蠅中的DIAP1會(huì)使 caspase失活從而阻礙細(xì)胞凋亡，bantam異常表達(dá)也會(huì)將阻礙細(xì)胞的正常凋亡[9].在哺乳動(dòng)物中CTGF是 YAP 的靶基因，YAP 通過活化 CTGF 促使細(xì)胞過度生長[10].

2.4 轉(zhuǎn)錄共激活因子的調(diào)節(jié)作用

轉(zhuǎn)錄共激活因子YAP在體內(nèi)各組織中廣泛表達(dá)，它位于人類染色體11q22上[11].YAP 只能間接的與 DNA 結(jié)合，通過結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子后才能促進(jìn)下游基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長發(fā)育.YAP過表達(dá)時(shí)，會(huì)引起組織器官過度生長；YAP 失活時(shí)，會(huì)引起組織器官發(fā)育不良.

3 YAP與腫瘤

3.1 卵巢癌

卵巢癌為女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，它早期癥狀輕微不易被發(fā)現(xiàn).早期卵巢癌很難被及時(shí)的發(fā)現(xiàn)，許多患者只有在中晚期才能進(jìn)行有效的診斷，從而錯(cuò)過了最佳的治療時(shí)期，導(dǎo)致該病具有較高的死亡率[12].最新的研究顯示，在卵巢癌細(xì)胞胞核和胞質(zhì)中YAP的表達(dá)率遠(yuǎn)高于正常卵巢細(xì)胞胞核和胞質(zhì)的表達(dá)率，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[13].卵巢癌患者的五年生存率與YAP的表達(dá)水平有著極為密切的關(guān)系，如果YAP在癌細(xì)胞核中表達(dá)率較高，那么該患者的五年生存率會(huì)降低50%，抑制YAP在癌細(xì)胞核的表達(dá)將會(huì)明顯提高順鉑對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺滅作用[14].

晚期卵巢癌容易復(fù)發(fā)，對(duì)于復(fù)發(fā)的卵巢癌一般采用姑息療法.Zhang等[15]運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)一共檢測(cè)了284例卵巢癌患者組織的YAP表達(dá)情況，其中有40例患者YAP在細(xì)胞核中高表達(dá)，說明預(yù)后性可能較差.He等[16]發(fā)現(xiàn)YAP在小鼠卵巢組織中高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致小鼠患卵巢癌，對(duì)正常的卵巢組織和卵巢癌組織分別進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示正常組織中YAP免疫信號(hào)較低或者檢測(cè)不到，癌組織中YAP表達(dá)顯著增加，表明YAP是可以致癌的基因.以上研究表明，YAP在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到了促進(jìn)作用.

3.2 宮頸癌

宮頸癌是女性生殖道的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌.Liu等[17]檢測(cè)了120例宮頸癌組織和22例正常宮頸組織中YAP的表達(dá)情況，結(jié)果顯示正常的宮頸組織上皮細(xì)胞中YAP不表達(dá)，有37例患者宮頸癌組織上皮細(xì)胞中YAP表達(dá)呈陽性.采用PCR技術(shù)檢測(cè)70例正常宮頸組織中人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)的感染狀況，有81%的人宮頸組織HPV表達(dá)呈陽性，在這些HPV陽性者中有54%的人YAP陽性表達(dá)，兩者可以結(jié)合用來鑒別宮頸是否病變[18].He等[19]也發(fā)現(xiàn)與正常的宮頸組織相比癌癥患者的宮頸組織的YAP表達(dá)率極高，在進(jìn)展期宮頸癌患者組織中YAP的表達(dá)水平最高.

3.3 肺癌

肺癌是一種發(fā)病率、病死率極高的惡性腫瘤，近幾年發(fā)病率有上升的趨勢(shì)，其中非小細(xì)胞肺癌(Non Small Cell Lung Cancer，NSCLC)約占85%.研究發(fā)現(xiàn)，正常情況下YAP在肺組織細(xì)胞的表達(dá)率只占7%，YAP在肺癌組織的細(xì)胞核中表達(dá)率約為54%、細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)率約為86%，YAP在正常肺組織和肺癌組織的表達(dá)率有很明顯的差異且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[20].Wang等[21]運(yùn)用免疫組化的方法對(duì)92例NSCLC患者的癌組織分析發(fā)現(xiàn)，約33%的患者組織中YAP表達(dá)呈強(qiáng)陽性且均在細(xì)胞核內(nèi)，而對(duì)20例正常肺組織檢測(cè)顯示僅有15%的人組織中YAP高表達(dá)，NSCLC 患者癌組織中YAP表達(dá)為陰性比表達(dá)為陽性的患者五年生存率高.Cui等[22]通過研究人正常肺組織和肺腺癌組織YAP的表達(dá)情況，得出肺腺癌組織YAP表達(dá)率高于正常肺組織YAP表達(dá)率的結(jié)論.Kim等[23]對(duì)多例肺腺癌單因素研究顯示，細(xì)胞周期蛋白A和絲裂素活化蛋白激酶可促使細(xì)胞核內(nèi)YAP高表達(dá)；通過多因素研究顯示，細(xì)胞周期蛋白A的表達(dá)與YAP的表達(dá)獨(dú)立相關(guān)，YAP常用于鑒別腫瘤的亞型.

3.4 前列腺癌

前列腺癌多發(fā)于老年人，發(fā)病率呈上升趨勢(shì).李文賓[24]等分析發(fā)現(xiàn)：在32例前列腺癌患者中有25例患者癌組織YAP表達(dá)為陽性，在15例前列腺癌患者中有4例患者癌旁組織YAP表達(dá)為陽性，在15例前列腺增生患者組織中YAP全不表達(dá)，這些差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.YAP的陽性表達(dá)與Gleason分級(jí)有關(guān)，分級(jí)越高YAP的陽性率越高.綜上所述，YAP極有可能成為前列腺癌治療診斷的新指標(biāo).

3.5 胰腺癌

胰腺癌是發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，惡性程度高，位于癌癥死亡的第四位[25].多年研究顯示，藥物二甲雙胍具有抗腫瘤的作用，經(jīng)常服用二甲雙胍的高血糖患者和服用其它類型降糖藥物的患者相比患胰腺癌的概率更低[26-27].二甲雙胍可以通過干擾Hippo通路中的GPCR信號(hào)系統(tǒng)，來抑制胰腺癌細(xì)胞的產(chǎn)生[28].李映璇等[29]研究結(jié)果顯示，二甲雙胍能夠明顯抑制人胰腺癌細(xì)胞的增殖，且YAP蛋白的表達(dá)明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)了二甲雙胍抑制癌細(xì)胞的作用.李曉宇等[30]研究結(jié)果表明：胰腺癌組織的YAP表達(dá)率明顯高于胰腺正常組織的YAP表達(dá)率且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

3.6 胃癌

胃癌常見于胃黏膜上皮和腺上皮是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，死亡率高.Da等[31]通過生物技術(shù)檢測(cè)98例胃癌患者癌組織和98例正常胃黏膜組織發(fā)現(xiàn)，YAP在這些組織當(dāng)中的表達(dá)率分別為48%、13%具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)發(fā)現(xiàn)YAP能促進(jìn)凋亡抑制基因Survivin的表達(dá)，細(xì)胞凋亡受到抑制導(dǎo)致胃癌發(fā)生.Zhang等[32]運(yùn)用免疫技術(shù)檢測(cè)了78例胃腺癌患者癌組織YAP表達(dá)情況，結(jié)果顯示有54例胃腺癌患者組織中YAP有表達(dá)，培養(yǎng)抑制YAP表達(dá)的胃癌細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移明顯降低.Song等[33]檢測(cè)223例胃癌患者癌組織細(xì)胞核內(nèi)YAP表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)約有27%的患者YAP表達(dá)呈陽性，腸型胃癌患者的生存率與癌組織YAP的陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān).敲除或沉默胃癌細(xì)胞的YAP基因則癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力明顯降低，在體外YAP基因的高表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移.

3.7 肝癌

原發(fā)性肝癌是一種病死率極高的惡性腫瘤且手術(shù)后容易復(fù)發(fā).Zhao等[34]檢測(cè)了115例肝癌患者的癌組織，發(fā)現(xiàn)超過50%的患者YAP表達(dá)率較高尤其是在細(xì)胞核內(nèi)高表達(dá)，在正常肝細(xì)胞組織中只有5%的肝組織YAP表達(dá)呈陽性或弱陽性，結(jié)果表面YAP有可能參與肝癌的產(chǎn)生、發(fā)展.Wu等[35]研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌患者癌組織中YAP表達(dá)率高的一般腫瘤的體積更大，更容易形成腫瘤多發(fā)灶、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤等現(xiàn)象.在對(duì)小鼠的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，升高肝臟中YAP的表達(dá)可以明顯地觀察到肝臟腫大，一段時(shí)間之后導(dǎo)致小鼠肝癌形成[36].升高小鼠肝臟中YAP的表達(dá)，第一周小鼠的肝臟體積比原來大一倍，第二周肝臟的重量達(dá)到體重的五分之一，五個(gè)月之后發(fā)展成了肝癌，當(dāng)抑制YAP的表達(dá)之后，肝臟體積減小，肝實(shí)質(zhì)的結(jié)構(gòu)慢慢恢復(fù)，肝功能也恢復(fù)正常[37].通過以上研究表明，YAP與肝癌的發(fā)生緊密相關(guān)，提示我們Hippo-YAP信號(hào)通路可以作為治療肝臟腫瘤的新方向.

3.8 乳腺癌

在我國乳腺癌的發(fā)病率占女性惡性腫瘤的第一位，最近幾年發(fā)病率明顯上升且發(fā)病人群年輕化.在患有乳腺癌的小鼠模型中，沉默其YAP的表達(dá)可以延緩乳腺癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移.Wang等[38]通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)了69例人乳腺癌組織發(fā)現(xiàn)有75%的患者癌組織中YAP有表達(dá)，說明YAP是和癌癥密切相關(guān)的基因.Overholtzer等[39]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌小鼠模型中YAP過表達(dá)造成其表型發(fā)生改變，如細(xì)胞凋亡受阻、細(xì)胞增殖加快、生長因子非依賴性增生，這些變化表明細(xì)胞惡化.劉玉等[40]檢測(cè)分析了60例乳腺癌患者的癌組織，對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行YAP陽性染色有20例患者顯示陽性，而對(duì)26例正常乳腺組織YAP陽性染色結(jié)果有1例為陽性，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.提示：YAP過表達(dá)可能與乳腺癌的形成有關(guān)，也有可能成為診斷早期乳腺癌的一個(gè)標(biāo)志.

3.9 結(jié)腸癌

在我國結(jié)腸癌是常見的消化道惡性腫瘤且發(fā)病率不斷升高，可能是飲食結(jié)構(gòu)改變所致.結(jié)腸癌可以通過手術(shù)的方式切除病變部位，但是患者的5年生存率并沒有明顯升高.Plouffe等[41]研究發(fā)現(xiàn)，抑制YAP的表達(dá)可減少癌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取、延緩癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移.與正常的結(jié)腸組織相比結(jié)腸癌組織中YAP在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中都高表達(dá)，YAP的表達(dá)程度與腫瘤大小、預(yù)后顯著相關(guān)[42].Zhou等[43]研究表明，E3泛素連接酶1的HECT和錨蛋白結(jié)構(gòu)域(HECT and Ankyrin domain containing E3 ubiquitin ligase 1，HACE1)可以直接作用YAP，上調(diào)HACE1表達(dá)可以抑制Hippo通路的活性，相反，缺失HACE1會(huì)激活YAP導(dǎo)致加快了結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與增殖.Yao等[44]研究發(fā)現(xiàn)，錨蛋白重復(fù)序列編碼的蛋白可以作用于YAP進(jìn)而導(dǎo)致Hippo信號(hào)通路被異常激活，加快了結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移.對(duì)于晚期的結(jié)腸癌患者一般采取保守治療即化療，然而許多患者對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性.Song等[45]研究發(fā)現(xiàn)，敲除YAP基因可以加強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的敏感性，在使用5-氟尿嘧啶作為化療藥物的患者中，若癌細(xì)胞YAP表達(dá)率越高則腫瘤復(fù)發(fā)的幾率越大.

4 抑制YAP活性的藥物

根據(jù)已有的研究結(jié)果表明，抑制YAP的活性可以用來治療腫瘤.某些治療其它疾病的藥物也可以抑制YAP的活性.如藥物維替泊芬(Verteporfin，VP)是用來治療病理性近視、黃斑變性的光敏劑，VP是一種卟啉化合物，一般多為注射用藥.最新研究顯示，VP可以抵消或抑制YAP過表達(dá)所導(dǎo)致的肝臟異常腫大，長時(shí)間的注射VP可以延緩腫瘤的進(jìn)程.他汀類降膽固醇藥物，通過控制三磷酸酶的活性來抑制YAP活性.達(dá)沙替尼、帕唑帕尼和氟伐他汀三藥聯(lián)用能夠增加化療藥對(duì)YAP介導(dǎo)型乳腺癌的治療效果.

最新的研究結(jié)果顯示，甲羥戊酸代謝途徑能夠調(diào)控YAP的活性.Sorrentino等[46]篩選了多種抗腫瘤藥，研究這些藥物在乳腺癌細(xì)胞系中對(duì)YAP細(xì)胞定位的影響，發(fā)現(xiàn)抑制HMG-CoA還原酶活性的他汀類藥物能夠有效地阻礙YAP進(jìn)入細(xì)胞核.甲羥戊酸途徑產(chǎn)生的牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸(Geranylgeranyl Pyrophosphat，GGPP)可以修飾三磷酸酶，導(dǎo)致三磷酸酶在細(xì)胞膜上被激活，進(jìn)而激活YAP.當(dāng)他汀類藥物抑制HMG-CoA還原酶的活性，則不能產(chǎn)生GGPP，進(jìn)而抑制三磷酸酶的活性，YAP不能表達(dá)[46].綜上所述，HMG-CoA還原酶抑制劑可能成為YAP的抑制劑.

余發(fā)星等[47]研究發(fā)現(xiàn)，G蛋白偶聯(lián)受體偶聯(lián)的G蛋白不同，對(duì)YAP的作用也不相同有可能抑制也有可能促進(jìn)作用.溶血磷脂酸和1-磷酸鞘氨醇受體的激動(dòng)劑多肽通過相關(guān)的受體抑制Latsl/2激酶，使YAP處于激活的狀態(tài)；而胰高血糖素、腎上腺素等激活鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白偶聯(lián)的受體，促進(jìn)YAP磷酸化而失活[48].開發(fā)相應(yīng)的抗體或激動(dòng)劑可能成為新的治療手段，如1-磷酸鞘氨醇的阻斷抗體鞘氨醇正在臨床試驗(yàn)階段[49].

5 展望

YAP與卵巢癌、宮頸癌、肺癌等形成密切相關(guān)，YAP的異常表達(dá)可能促進(jìn)上述腫瘤的產(chǎn)生.在Hippo信號(hào)通路中YAP是起主要作用的效應(yīng)因子，因此當(dāng)Hippo信號(hào)通路發(fā)生異?；験AP異常激活可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生.所以，通過對(duì)YAP基因的靶向治療可以延緩腫瘤的進(jìn)展甚至根治腫瘤.轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子(Transcriptional Enhancer Associate Domain transcription factors，TEADs)是YAP發(fā)揮促轉(zhuǎn)錄作用的關(guān)鍵因子，干擾YAP與TEADs的結(jié)合可作為抑制YAP活性的研究方向.市場(chǎng)上已有的藥物，例如VP可以作為YAP的抑制劑，但是目前還無法證明VP在治療腫瘤方面有足夠的安全性和有效性，還需要進(jìn)一步的研究.隨著研究的深入，對(duì)YAP的作用機(jī)制將會(huì)更加清楚，在未來有望發(fā)現(xiàn)針對(duì)YAP基因的新型抗腫瘤藥物.