陳景芝, 馬麗麗, 馮艷玉

(北京市大興區(qū)人民醫(yī)院, 1. 檢驗(yàn)科, 2. 婦產(chǎn)科, 3. 普外科, 北京, 102600)

乳腺癌早期癥狀隱匿，患者就診時(shí)多已發(fā)展至中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)。因此，早期診斷對(duì)提高乳腺癌治愈率和延長(zhǎng)患者生存期至關(guān)重要。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)為外周血腫瘤細(xì)胞的總稱，是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移的標(biāo)志[1]; 微小核糖核酸-1246(miR-1246)是人體內(nèi)源性非編碼RNA，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起調(diào)節(jié)作用[2]; 糖類抗原153(CA153)為乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的相關(guān)糖類抗原，是病情嚴(yán)重程度的重要標(biāo)志物[3]。本研究觀察了CTCs、miR-1246、CA153在乳腺癌患者中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以期為乳腺癌的診療工作提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性方法選取本院2015年1月—2016年5月收治的108例乳腺癌患者納入乳腺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 臨床資料完整且依從性高者; ② 符合《中國(guó)晚期乳腺癌臨床診療專家共識(shí)(2018版)》[4]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)術(shù)后組織病理切片檢查證實(shí)者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 生存期短于6個(gè)月者; ② 嚴(yán)重肝腎功能不全或障礙者; ③ 自身免疫系統(tǒng)疾病患者; ④ 急慢性感染性疾病患者; ⑤ 合并其他惡性腫瘤者; ⑥妊娠期或哺乳期婦女。乳腺癌組患者年齡25～65歲，平均(48.83±8.74)歲; 病理切片診斷結(jié)果為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌38例(根據(jù)Nottingham組織學(xué)分級(jí)系統(tǒng)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌分為Ⅰ級(jí)13例、Ⅱ級(jí)17例、Ⅲ級(jí)8例)，非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌70例。選取乳腺良性腫瘤患者100例納入良性腫瘤組，患者年齡25～65歲，平均(49.01±8.92)歲，病理切片診斷結(jié)果為乳腺纖維腺瘤63例、乳腺普通型導(dǎo)管增生17例、乳腺腺病10例、乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤6例、乳腺囊腫4例。另選取同期本院體檢中心的100例健康體檢者納入對(duì)照組，年齡25～65歲，平均(48.93±9.02)歲。3組研究對(duì)象的基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，且所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2 方法

所有研究對(duì)象空腹8 h以上，并于次日晨8點(diǎn)左右抽取靜脈血2管，一管為紅色無(wú)添加劑干燥試管(3 mL), 以3 000轉(zhuǎn)/min離心10 min, 取上清液待檢，另一管為特殊專用試管(5 mL), 顛倒混勻數(shù)次。CTCs檢測(cè)方法: 獲得ACD抗凝血血樣后，采用免疫磁珠負(fù)向富集法捕獲CTCs, 再用免疫熒光與原位雜交結(jié)合技術(shù)進(jìn)行鑒定，應(yīng)用強(qiáng)生公司cell search系統(tǒng)機(jī)型檢測(cè)及分析。miR-1246檢測(cè)方法: 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)方法，應(yīng)用賽默飛公司的連續(xù)光譜熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。CA153檢測(cè)方法: 采用電化學(xué)免疫發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)儀器為貝克曼DXI-800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 3組CTCs、miR-1246、CA153水平比較

乳腺癌組CTCs、miR-1246、CA153水平高于良性腫瘤組和對(duì)照組，良性腫瘤組CTCs、miR-1246、CA153水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 CTCs、miR-1246、CA153單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷效能比較

ROC曲線分析結(jié)果顯示, CTCs、miR-1246、CA153聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.930(95%CI為0.901～0.970), 靈敏度為90.1%，特異度84.8%, 均優(yōu)于CTCs、miR-1246、CA15單獨(dú)檢測(cè)。見(jiàn)表2、圖1。

表1 3組CTCs、miR-1246、CA153水平比較

表2 CTCs、miR-1246、CA153單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能比較

圖1 CTCs、miR-1246、CA153單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷乳腺癌的ROC曲線

2.3 不同臨床病理特征的乳腺癌患者CTCs、miR-1246、CA153水平比較

CTCs、miR-1246、CA153水平與患者年齡、病理類型、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)(浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05), 與腫瘤直徑無(wú)關(guān)(P>0.05)。年齡≥40歲、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者CTCs、miR-1246、CA153水平分別高于年齡<40歲、非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 乳腺癌患者預(yù)后的影響因素分析

比較不同病理特征乳腺癌患者的5年生存率發(fā)現(xiàn)，年齡<40歲、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CTCs陰性、miR-1246陰性、CA153陰性的乳腺癌患者5年生存率分別高于年齡≥40歲、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CTCs陽(yáng)性、miR-1246陽(yáng)性、CA153陽(yáng)性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.5 影響乳腺癌患者預(yù)后的多因素分析

多因素Logistic回歸分析顯示, TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和CTCs、miR-1246、CA153表達(dá)情況是乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表3 不同臨床病理特征的乳腺癌患者CTCs、miR-1246、CA153水平比較

表4 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析[n(%)]

表5 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

3 討 論

盡管目前乳腺腫瘤的治療水平日益提升，但腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象仍然比較常見(jiàn)。因此，了解乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找潛在的血清學(xué)診斷標(biāo)志物，對(duì)于改善乳腺癌患者的療效和預(yù)后極其重要。CTCs是指從人體實(shí)質(zhì)性腫瘤或轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)入外周血液的腫瘤細(xì)胞，為目前臨床液體活檢技術(shù)的主要檢測(cè)物之一，適用于腫瘤的早期診斷。隨著腫瘤細(xì)胞的不斷浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)結(jié)締組織間隙或破裂的毛細(xì)血管進(jìn)入人體血液循環(huán)中，從而形成CTCs[5]。miR-1246是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的含有18～24個(gè)核苷酸的微小非編碼RNA, 含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等物質(zhì)，調(diào)控并參與腫瘤的轉(zhuǎn)移，可作為診斷和預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后的生物標(biāo)志物[6]。CA153屬于糖類抗原，能夠促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展，多數(shù)乳腺癌患者在初次就診和復(fù)發(fā)時(shí)CA153水平會(huì)顯著升高，因此CA153是乳腺癌早期診斷及預(yù)后判定的重要參考指標(biāo)[7]。

本研究中，乳腺癌組患者CTCs、miR-1246、CA153水平顯著升高，提示這些指標(biāo)均參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。CTCs、miR-1246、CA153聯(lián)合檢測(cè)相對(duì)于單獨(dú)檢測(cè)可進(jìn)一步提高診斷效能，靈敏度和特異度分別為90.1%和84.8%, 達(dá)到了理想水平。本研究還比較了不同病理特征乳腺癌患者的CTCs、miR-1246、CA153水平，結(jié)果顯示，年齡≥40歲、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者CTCs、miR-1246、CA153水平顯著更高。分析原因，年齡較大的患者處于圍絕經(jīng)期，體內(nèi)激素水平變化較大，預(yù)后較差。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者早期癥狀較隱匿，診斷率低，就診時(shí)多為晚期，惡性程度高。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期為乳腺癌晚期階段，分期越晚，惡性程度越高，預(yù)后越差。組織學(xué)級(jí)別是腫瘤的形態(tài)學(xué)評(píng)估，其級(jí)別越高，惡性程度越高，腫瘤擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)也就越大。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是乳腺癌轉(zhuǎn)移的主要途徑，不僅影響治療效果，也是患者預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素。

本研究開(kāi)展為期5年的隨訪發(fā)現(xiàn)，年齡<40歲、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CTCs陰性、miR-1246陰性、CA153陰性的乳腺癌患者5年生存率較高。分析原因，年齡是乳腺癌患者預(yù)后的影響因素，40歲被作為年輕乳腺癌患者的分界線[8]; TNM分期是影響乳腺癌預(yù)后的重要因素，也是獨(dú)立影響因素[9]; 組織學(xué)分級(jí)與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，分級(jí)越高，5年存活率越低[10]; 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能夠?qū)е氯橄侔┻h(yuǎn)期復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)上升，縮短患者生存時(shí)間，是影響乳腺癌患者預(yù)后的最關(guān)鍵的危險(xiǎn)因素[11]; CTCs、miR-1246、CA153表達(dá)水平與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)[12-13]。

綜上所述, CTCs、miR-1246、CA153在乳腺癌患者中表達(dá)水平明顯升高，且與乳腺癌患者不同臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，三者聯(lián)合檢測(cè)可作為早期診斷及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)。但本次研究屬于回顧性研究，樣本量較小，且來(lái)自同一醫(yī)院，可能存在一定選擇偏倚，未來(lái)可進(jìn)一步開(kāi)展前瞻性、大樣本量、多中心的研究加以驗(yàn)證。