□張 艷 黃紅衛(wèi)

施氏假單胞菌隸屬于假單胞菌科假單胞菌屬，是一類具有單極性鞭毛的革蘭陰性桿菌，臨床上極為罕見[1～3]。近十年來，國(guó)內(nèi)僅報(bào)道2例由該菌引起的感染。湘南學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)中心微生物室于2019年8月從一例外傷患者傷口膿汁中分離出一株施氏假單胞菌，現(xiàn)報(bào)告如下。

一、臨床資料

患者，男，30歲。因車禍致右小腿外傷，術(shù)后皮膚壞死、脛骨及內(nèi)固定外露十余天，2019年8月25日轉(zhuǎn)至湘南學(xué)院附屬醫(yī)院。既往二十余年前有右下肢燙傷手術(shù)史，現(xiàn)遺留廣泛肢體瘢痕。入院查體：體溫36.6℃，脈搏90次/分，呼吸19次/分，血壓110/77mmHg。右腿皮膚組織檢查：右小腿上段內(nèi)側(cè)可見一大小約25*8cm的創(chuàng)面，創(chuàng)緣部分皮膚顏色暗，血運(yùn)差，部分皮膚顏色發(fā)黑，血運(yùn)無，傷口周圍稍紅腫，皮溫稍高，創(chuàng)面可見部分壞死組織，創(chuàng)口內(nèi)可見脛骨外露，外露骨質(zhì)顏色發(fā)暗，血運(yùn)差，同時(shí)可見鋼板及鋼絲外露，創(chuàng)面外側(cè)可見一長(zhǎng)約8cm的手術(shù)縫合傷口，傷口緣部分皮膚顏色暗，血運(yùn)差。

實(shí)驗(yàn)室檢查：紅細(xì)胞(RBC)3.56X1012/L，血紅蛋白(HGB)99g/L，總蛋白(TP)62.8g/L，清蛋白(ALB)32.7g/L，球蛋白(GLB)30.1g/L，血沉及凝血功能未見異常。

圖1 患者傷口圖

二、儀器與試劑

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、梅里埃VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)、VITEK MS全自動(dòng)快速微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)、ABI3730XL測(cè)序儀。

三、分離、培養(yǎng)及鑒定

(一)標(biāo)本采集。用滅菌生理鹽水擦洗傷口表面，用無菌棉拭子采取傷口膿汁分泌物，置于無菌試管內(nèi)送檢。

(二)分離培養(yǎng)。將傷口膿汁分泌物通過平板劃線方法接種于血瓊脂培養(yǎng)基、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和弱選擇性培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫需氧培養(yǎng)。24小時(shí)后取出平板觀察菌落特征。同一平板上可見顏色、形狀、大小等性狀相同或接近的菌落。經(jīng)革蘭染色，細(xì)菌均呈紅色桿菌，初步判定為同一種菌。

(三)分純及生化鑒定。挑取單個(gè)菌落于血平板進(jìn)行分純培養(yǎng)，后取純培養(yǎng)物于專用比濁管中調(diào)至濃度為0.5麥?zhǔn)媳葷岫染鷳乙?，?jīng)Compact VITEK2(AST-GN09)系統(tǒng)對(duì)該菌進(jìn)行種類鑒定和耐藥性分析。

(四)質(zhì)譜鑒定。運(yùn)用MALDI-TOF原理，由VITEK MS全自動(dòng)快速微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

(五)基因測(cè)序。委托北京睿博興科生物技術(shù)有限公司進(jìn)行基因測(cè)序。

四、結(jié)果

該菌經(jīng)涂片染色為革蘭陰性桿菌，無芽孢、無莢膜，有單鞭毛。血平板培養(yǎng)48h后，菌落呈現(xiàn)粗糙、干燥、扁平、皺折、堅(jiān)韌而粘附平板狀。普通平板上，菌落呈現(xiàn)出淡黃色。VITEK2(AST-GN09)鑒定為施氏假單胞菌，藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)哌拉西林，替卡西林/克拉維酸，第三代頭孢菌素，亞胺培南，氮唑烷，去甲沙星，環(huán)丙沙星和氨基糖苷敏感，對(duì)氨芐西林，阿莫西林/克拉維酸，頭孢噻吩，頭孢西汀和復(fù)方新諾明耐藥。VITEK MS質(zhì)譜鑒定結(jié)果為施氏假單胞菌，與VITEK2鑒定結(jié)果一致?；驕y(cè)序結(jié)果為施氏假單胞菌，與VITEK2鑒定結(jié)果、VITEK MS質(zhì)譜鑒定結(jié)果一致。

圖2 血瓊脂平板菌落 圖3 質(zhì)譜鑒定結(jié)果

圖4 基因測(cè)序結(jié)果

五、討論

根據(jù)伯杰分類手冊(cè)第1卷，按照rRNA同源性分類，施氏假單胞菌隸屬于rRNAI群，與銅綠假單胞菌同屬1群。該菌廣泛存在于土壤、水、糞便及肥料中，人類呼吸道及泌尿道均可存在。屬于條件致病菌，當(dāng)人體抵抗力降低時(shí)可引起感染，主要引起機(jī)會(huì)感染或醫(yī)院內(nèi)感染。該菌臨床感染率較低，臨床案例研究報(bào)道少。文獻(xiàn)研究多集中于施氏假單胞菌在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用。經(jīng)檢索中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)、中文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CMCC)、Medline等數(shù)據(jù)庫(kù)，僅有2篇關(guān)于該菌引起臨床感染的報(bào)道。2012年，董政等報(bào)道了從患者壞死皮膚組織中分離出1例施氏假單胞菌。2016年，王亞煒等報(bào)道了燒傷傷口分泌物中一株施氏假單胞菌的分離與鑒定。此次，也從患者傷口膿汁中分離出該菌，提示該菌可存在于自然環(huán)境或人體皮膚表面。當(dāng)機(jī)體防御功能減弱，機(jī)體免疫力下降時(shí)，應(yīng)重視由該菌引起的臨床感染。該菌是否好發(fā)于外傷傷口中，引起傷口感染，仍值得進(jìn)一步探討。該菌菌落呈粗糙、干燥、扁平、皺折、堅(jiān)韌而粘附平板狀，特征較為典型，培養(yǎng)遇此類菌落時(shí)，應(yīng)高度懷疑此菌，并對(duì)病原體進(jìn)行鑒定。藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示該菌對(duì)部分藥物耐藥明顯，提示臨床用藥應(yīng)在藥敏試驗(yàn)結(jié)果指導(dǎo)下進(jìn)行，臨床醫(yī)生不可單憑經(jīng)驗(yàn)用藥。