馬靜茹，張 強(qiáng)，王吉峰，徐 立

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院 檢驗(yàn)科,吉林 長(zhǎng)春130041)

動(dòng)脈粥樣硬化是多因素參與的慢性炎癥過程[1]，研究表明氧化應(yīng)激[2]參與動(dòng)脈粥樣硬化的過程，氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作為動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3]，可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)單核細(xì)胞的粘附，誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成，可誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的形成進(jìn)而促使斑塊破裂和血栓形成，在動(dòng)脈粥樣硬化中起重要的作用[4-5]。但是血漿ox-LDL水平在急性冠脈綜合征患者是否升高仍存在爭(zhēng)議[4,6-7]。檢測(cè)ox-LDL的方法很多且未統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化[8]，目前以4E6抗體為基礎(chǔ)的ELISA最為廣泛使用，但國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。本研究旨在分析冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變程度與血漿ox-LDL的關(guān)系，評(píng)估ox-LDL在冠心病臨床診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年10月至2018年4月期間在吉林大學(xué)第二醫(yī)院心血管內(nèi)科住院首次確診的患者73例。根據(jù)冠脈造影檢查結(jié)果分為單支病變組22例，雙支病變組20例，三支病變組31例。另選擇同期在我院進(jìn)行健康體檢者經(jīng)問診，體格檢查如心電圖、心電圖、心肌酶譜等排除心血管疾病，以及冠脈造影正常無狹窄者30例作為對(duì)照組。排除標(biāo)準(zhǔn):①急、慢性感染性疾病；②糖尿病以及空腹血糖受損；③自身免疫性疾病以及腫瘤患者；④血液系統(tǒng)疾??；⑤合并肝腎功能不全；⑥其他心肌病及心臟瓣膜病；⑦存在腦梗塞，頸動(dòng)脈狹窄。⑧服用他汀等降脂藥物。所有受試者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑

TC,LDL-C，HDL-C,apoA,apoB,Lp(a),hs-CRP使用日立LABOSPECT 008AS全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。Ox-LDL與氧化脂質(zhì)的吸光度使用Thermo Variosbon Fish酶標(biāo)儀讀取。Ox-LDL使用4E6單抗包被的雙抗體夾心法ELISA試劑盒(Mercodia AB,Uppsala,Sweden)檢測(cè)。氧化脂質(zhì)檢測(cè)使用TBARS試劑盒(Cayman,Michigan,USA)以MDA量表示。TC試劑購(gòu)自浙江東甌診斷有限公司，LDL-C,HDL-C試劑購(gòu)自日本積水醫(yī)療株式會(huì)社，apoA,aopB試劑購(gòu)自英國(guó)朗道實(shí)驗(yàn)診斷有限公司，Lp(a)試劑購(gòu)自上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司，hs-CRP試劑購(gòu)自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

1.3 方法

1.3.1樣本采集與檢測(cè) 受試者空腹12 h以上，于次日清晨采集外周肘靜脈血,分別收集血清與EDTA-Na2抗凝血漿，標(biāo)本采集后3 500 rpm,15 min離心,當(dāng)天完成檢測(cè)或放置于-80℃冰箱保存并于6個(gè)月內(nèi)完成檢測(cè)。所有檢測(cè)一式兩份。

1.3.2冠狀動(dòng)脈造影 冠脈造影的患者均采用標(biāo)準(zhǔn)的Judkins法常規(guī)體位投射。冠狀動(dòng)脈造影診斷冠心病的標(biāo)準(zhǔn):至少一支冠狀動(dòng)脈分支直徑狹窄程度≥50%，可診斷為冠心病。根據(jù)造影結(jié)果中顯示的不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度以及累及的左主干、左前降支、左回旋支、右冠脈的數(shù)量，將冠心病患者分為單支冠脈病變組、雙支冠脈病變組和三支冠脈病變組，采用Gensini評(píng)分系統(tǒng)對(duì)冠脈血管病變狹窄程度進(jìn)行評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 患者臨床資料比較

對(duì)照組，單支病變組，雙支病變組，三支病變組性別，飲酒等方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。但單支病變組，雙支病變組，三支病變組等冠心病患者年齡，高血壓，吸煙等方面高于對(duì)照組，見表1。冠心病患者具體病變部位見表2。

表1 不同冠心病病變程度組一般臨床資料

表2 冠心病患者各組病變部位

2.2 不同冠脈病變程度組間蛋白類生化指標(biāo)比較

單支病變組，雙支病變組，三支病變組血漿ox-LDL水平均高于對(duì)照組且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001),但病變程度增強(qiáng)ox-LDL呈下降趨勢(shì)，雙支病變組與三支病變組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.537)。ApoA在組間差異顯著，對(duì)照組水平顯著高于病變患者(P=0.001)，但病變組之間無顯著差異(P=0.572)。ApoB在各組間無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.438)。Lp(a)各組間具有顯著的差異(P=0.002)，病變組顯著高于對(duì)照組(P<0.001)，但病變組之間無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.684)。Hs-CRP 各組間具有顯著的差異(P<0.001)，病變組顯著高于對(duì)照組(P<0.001)，兩支病變組與三支病變組之間無顯著的差異(P=1.000)，見表3。

表3 不同冠脈病變程度組生化指標(biāo)比較

2.3 不同冠脈病變程度組間脂類生化指標(biāo)比較

血清MDA水平在各組間差異顯著(P<0.001)，病變組顯著高于對(duì)照組(P<0.001)，隨著病變程度的加重而顯著升高。TC水平各組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。LDL-C各組間具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.025)，病變組顯著高于健康對(duì)照組(P=0.006)，但病變組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.45)。HDL-C水平各組間具有顯著的差異(P<0.001)，病變組顯著低于對(duì)照組(P<0.001)，見表4。

表4 不同冠脈病變程度組生化指標(biāo)比較

2.4 冠心病患者血漿與Gensini評(píng)分之間的相關(guān)分析

將冠心病患者血漿ox-LDL水平與Gensini評(píng)分進(jìn)行直線相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)ox-LDL與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.285,P=0.015)，見圖1。

圖1 血漿ox-LDL與Gensini評(píng)分的相關(guān)分析

3 討論

《中國(guó)心血管病報(bào)告2017》[9]顯示，我國(guó)心腦血管疾病患者人數(shù)2.9億，冠心病患者1100萬，患病率和死亡率仍處于上升階段，冠心病的防治刻不容緩。本研究將氧化低密度脂蛋白作為研究對(duì)象，分析冠脈粥樣硬化病變程度間的變化。研究結(jié)果顯示，隨著冠脈病變程度的加重，機(jī)體氧化應(yīng)激水平增加，不飽和脂肪酸(PFUA)被氧化為氧化脂質(zhì)的程度增加。冠心病患者血漿ox-LDL水平顯著高于健康對(duì)照組，提示ox-LDL可作為早期識(shí)別冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的標(biāo)志物。與Pasini A F[10]等研究所不同的是，隨著病變程度的加重血漿ox-LDL水平降低，但是兩支冠脈病變組與三支病變組無顯著性差異，并且與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，可能與人群的異質(zhì)性以及機(jī)體血漿中Lp(a)和hs-CRP識(shí)別轉(zhuǎn)運(yùn)ox-LDL有關(guān)。研究表明[11]，ox-LDL一旦形成就會(huì)被冠脈壁的巨噬細(xì)胞所吞噬進(jìn)而形成泡沫細(xì)胞從而完成ox-LDL的降解過程。CRP可通過CRP-Fcγ受體交聯(lián)以及清道夫受體促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL形成泡沫細(xì)胞[12-14]。Lp(a)是一類具有遺傳特性的致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，但最近研究表明Lp(a)可作為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白[15]，與ox-LDL的E06具有高度相關(guān)性，具有結(jié)合、降解ox-LDL的作用[16]。另一方面目前檢測(cè)ox-LDL有DLH3、4E6、E06[3]等不同的單克隆抗體，以此為基礎(chǔ)的不同方法的敏感性和特異性可能不同以及識(shí)別的ox-LDL成分不同，由此得出不同的結(jié)果。

我們推測(cè)Lp(a)、hs-CRP與ox-LDL通過特異性靶點(diǎn)結(jié)合，形成穩(wěn)定或者不穩(wěn)定的可溶性復(fù)合物，可進(jìn)一步的研究探索能夠檢測(cè)相應(yīng)的復(fù)合物的研究方法，具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步闡明。本研究樣本量較小，需要在今后的研究中增加人群數(shù)量進(jìn)一步確定血漿ox-LDL在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，冠心病患者血漿ox-LDL水平顯著高于對(duì)照組，可作為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。但是血漿ox-LDL水平并不與冠脈病變程度成正相關(guān)，可能與機(jī)體hs-CRP和Lp(a)特異結(jié)合ox-LDL并通過清道夫受體的上調(diào)表達(dá)等機(jī)制促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL形成泡沫細(xì)胞，進(jìn)而清除體內(nèi)ox-LDL。