牛萌萌 姬俊 王立云 王尊文

1 青島市食品藥品檢驗研究院，國家藥監(jiān)局海洋中藥質(zhì)量研究與評價重點實驗室 （山東 青島 266071）

2 青島市婦女兒童醫(yī)院 （山東 青島 266034）

內(nèi)容提要：目的：評價2020年青島市生產(chǎn)的醫(yī)用口罩的過濾效率和微生物指標。方法：對37批次三種類型的醫(yī)用口罩分別按照現(xiàn)行標準GB19083-2010《醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求》、YY 0469-2011《醫(yī)用外科口罩》、YY/T 0969-2013《一次性使用醫(yī)用口罩》進行檢測。結(jié)果：所檢批次口罩中，有兩批次的微生物指標不符合規(guī)定，所有批次的過濾效率均符合規(guī)定。結(jié)論：2020年青島市生產(chǎn)的37批次三類醫(yī)用口罩微生物指標的合格率為95%，過濾效率合格率為100%。

新型冠狀病毒肺炎肆意全球，傳播范圍之廣，感染人數(shù)之多，造成了全球性流行。其傳播的主要途徑為呼吸道飛沫傳播和密切接觸傳播，為阻斷傳播途徑，佩戴口罩是預防呼吸道傳播疾病的重要方法之一。國家衛(wèi)生健康委發(fā)布的《預防新型冠狀病毒感染的肺炎口罩使用指南》建議使用的主要口罩類型為醫(yī)用防護性口罩、醫(yī)用外科口罩及一次性使用醫(yī)用口罩，在正確佩戴的前提下能對病毒進行有效防護，降低新型冠狀病毒感染的風險[1]?？谡值姆雷o性能主要取決于顆粒過濾效率和細菌過濾效率，而微生物指標則與口罩的衛(wèi)生和安全性能息息相關(guān)[2]。因此，考察口罩的顆粒過濾效率、細菌過濾效率以及微生物指標對于評價口罩質(zhì)量有著重要意義。本文通過對2020年青島市生產(chǎn)的37批次三類醫(yī)用口罩進行過濾效率和微生物指標的檢測并對檢測結(jié)果進行評價，進一步了解青島市生產(chǎn)的醫(yī)用口罩質(zhì)量，為打好疫情防控阻擊戰(zhàn)提供數(shù)據(jù)支持和技術(shù)保障。

1.材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 口罩

醫(yī)用防護口罩共計6批，產(chǎn)自四個不同企業(yè)，包裝上均無滅菌或無菌字樣。

醫(yī)用外科口罩共計8批，產(chǎn)自五個不同企業(yè)，4批次包裝上有滅菌或無菌字樣。

一次性使用醫(yī)用口罩共計23批，產(chǎn)自九個不同企業(yè)，包裝上均無滅菌或無菌字樣。所有的口罩樣品均產(chǎn)自青島市的生產(chǎn)企業(yè)。根據(jù)口罩種類分別按照現(xiàn)行標準GB 19083-2010《醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求》、YY 0469-2011《醫(yī)用外科口罩》、YY/T 0969-2013《一次性使用醫(yī)用口罩》進行相應項目的檢測，見表1。

表1.各類口罩檢測依據(jù)的標準和檢驗項目

1.1.2 儀器

口罩細菌過濾效率（BFE）檢測儀（ZR-1000型，青島眾瑞）、口罩顆粒物過濾效率及氣流阻力測試儀（ZR-1006型，青島眾瑞）、恒溫恒濕箱（KMF240，賓德）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（INE500，德國MEMMERT）、隔水式培養(yǎng)箱（GNP-9160E，上海三發(fā)）、無菌集菌儀（HTY-603，泰林）、全自動微生物生化分析儀（VITEK 2 Compact，梅里埃）、顯微鏡（SCOPE A1，ZIESS）等。

1.1.3 培養(yǎng)基和菌種

pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（批號：20200307，海博）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號：20190715，日水）、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（批號：20191203，海博）、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（批號：20200317，海博）、營養(yǎng)瓊脂（批號：20191228，海博）、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基（批號：20171025，海博）、SCDLP液體培養(yǎng)基（批號：190806，陸橋）、十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基（批號：20180402，海博）、血瓊脂培養(yǎng)基（批號：20200217，海博）、葡萄糖肉湯（批號：20200313，海博）、沙氏培養(yǎng)基（批號：20200220，海博）、沙氏瓊脂培養(yǎng)基（批號：20191219，海博）、VITEK革蘭氏陽性鑒定卡（批號：2421354203，梅里埃）。

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]、大腸埃希菌[CMCC（B）44 102]、乙型溶血性鏈球菌[ATCC 21059]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10 104]。標準菌株均購于中檢院，零代干粉經(jīng)活化制備成標準工作菌株，采用十倍稀釋法。其中金黃色葡萄球菌按照2015版《中國藥典》通則1105規(guī)定的制備新鮮培養(yǎng)物，以1.5%無菌蛋白胨溶液稀釋，制成含量為5.0×105CFU/mL的菌懸液。

1.2 方法

1.2.1 無菌

取樣品10個，按照無菌操作將每個口罩平分，取一份分別投入至100mL的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，根據(jù)《中國藥典》2015年版通則1101無菌檢查法中要求進行無菌試驗。

1.2.2 微生物指標

供試液制備：用無菌的方法打開用于檢測的3個包裝，從每個包裝中取樣，將口罩剪碎后準確稱取10g樣品，加入到200mL滅菌生理鹽水中，充分混勻，作為樣液。

細菌菌落總數(shù)檢測：待樣液自然沉降后取上清液作菌落計數(shù)，每個平皿加入1mL樣液，共接種5個平皿，置于36°C培養(yǎng)48h后計數(shù)，再根據(jù)公式計算樣品的細菌菌落總數(shù)。

大腸菌群檢測：取樣液5mL接種至50mL的乳糖膽鹽發(fā)酵管中，置于36°C培養(yǎng)24h，如不產(chǎn)酸產(chǎn)氣則報告陰性；如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，劃線接種至伊紅美藍平板上，置于36°C培養(yǎng)24h，若有可疑菌落，進行鏡檢并同時接種乳糖發(fā)酵管。

綠膿桿菌檢測：取樣液5mL接種至50mL的SCDLP培養(yǎng)基中，置于36°C培養(yǎng)24h，從培養(yǎng)基中挑取培養(yǎng)物劃線接種十六烷三甲基溴化銨平板上，置于36°C培養(yǎng)24h后，觀察菌落特征，若有可疑菌落，則挑取可疑菌落進行鏡檢、氧化酶試驗、綠膿菌素試驗、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗、明膠液化試驗以及42°C生長試驗。

金黃色葡萄球菌檢測：取樣液5mL接種至50mL的SCDLP培養(yǎng)基中，置于36°C培養(yǎng)24h，從培養(yǎng)基中挑取培養(yǎng)物劃線接種血平板上，置于36°C培養(yǎng)48h后，挑取典型菌落進行鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗、血漿凝固酶試驗。

溶血性鏈球菌檢測：取樣液5mL接種至50mL的葡萄糖肉湯中，置于36°C培養(yǎng)24h，從培養(yǎng)基中挑取培養(yǎng)物劃線接種血平板上，置于36°C培養(yǎng)24h后，挑取典型菌落進行鏡檢、鏈激酶試驗、桿菌肽敏感試驗。

真菌菌落總數(shù)檢測：待樣液自然沉降后取上清液作真菌計數(shù)，每個平皿加入1mL樣液，共接種5個平皿，置于24°C培養(yǎng)7d后計數(shù)，再根據(jù)公式計算樣品的真菌菌落總數(shù)。

真菌定性檢測：取樣液5mL接種至50mL的沙氏培養(yǎng)基中，置于24°C培養(yǎng)7d，每天觀察是否有真菌生長，若培養(yǎng)管混濁則劃線至沙氏瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，證實是否有真菌生長[3]。

1.2.3 細菌過濾效率（BFE）

每批取3個樣品進行試驗，將樣品放置在溫度21°C、相對濕度為85%的恒溫恒濕箱中預處理至少4h后再進行試驗。

BFE試驗系統(tǒng)中先不放入樣品，在通過采樣器的氣體流速為28.3L/min的狀態(tài)下，向噴霧器輸送細菌懸液的時間設定為1min，空氣壓力和采樣器運行時間設定為2min，開啟儀器，使細菌氣溶膠收集到胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，作為陽性質(zhì)控值，以此值計算氣溶膠流速，應為（2200±500）CFU。取樣品，分別加在采樣器上端，被測面向上，按照上述程序進行采樣。采樣后，將胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在36°C培養(yǎng)48h后計數(shù)，使用轉(zhuǎn)換表將菌落數(shù)轉(zhuǎn)換為校正后的顆粒計數(shù)值，用公式計算出樣品的細菌過濾效率值[4]。

1.2.4 顆粒過濾效率（PFE）

每批取3個樣品進行試驗，將樣品放置在溫度38°C、相對濕度為85%的恒溫恒濕箱中預處理25h，試驗在預處理結(jié)束10h后完成。測試過程中氣體流量穩(wěn)定至30L/min，氣體通過的截面積為100cm2，試驗用氯化鈉氣溶膠顆粒大小分布應為粒數(shù)中值直徑（0.075±0.020）μm，幾何標準差不超過1.86，濃度不超過200mg/m3。

2.結(jié)果

2.1 醫(yī)用防護口罩檢測結(jié)果

根據(jù)GB 19083-2010《醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求》對6批醫(yī)用防護口罩樣品進行微生物指標的檢測。在試驗過程中，由于醫(yī)用防護口罩材質(zhì)較厚且不易吸水，在制備供試液時需充分震蕩和混勻，使樣品充分接觸到稀釋液，增加檢出概率，提高試驗的準確性。6批次結(jié)果均符合規(guī)定。

2.2 醫(yī)用外科口罩檢測結(jié)果

根據(jù)YY 0469-2011《醫(yī)用外科口罩》，對包裝上有滅菌或無菌字樣的4批樣品進行無菌檢測，其余4批樣品進行微生物指標的檢測，8批次均進行細菌過濾效率和顆粒過濾效率的檢測，結(jié)果見表2。

表2.醫(yī)用外科口罩檢測結(jié)果

2.3 一次性使用醫(yī)用口罩檢測結(jié)果

根據(jù)YY/T 0969-2013《一次性使用醫(yī)用口罩》對23批樣品進行微生物指標和細菌過濾效率的檢測。23批次的細菌過濾效率結(jié)果均在95%以上。其中J廠家2批次口罩在金黃色葡萄球菌檢測中發(fā)現(xiàn)疑似菌株，經(jīng)革蘭氏染色和VITEK 2全自動微生物生化分析儀鑒定為表皮葡萄球菌和沃氏葡萄球菌，為葡萄球菌屬，主要存在于人類的皮膚、鼻腔等，正常情況下為非致病性的葡萄球菌。N廠家1批次口罩在溶血性鏈球菌檢測中，發(fā)現(xiàn)疑似菌落，經(jīng)革蘭氏染色和VITEK 2全自動微生物生化分析儀鑒定為枯草芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌。N廠家2批次口罩在真菌檢測中，發(fā)現(xiàn)沙氏瓊脂平皿上均有真菌生長，結(jié)果不符合規(guī)定。同一廠家2批次口罩檢測出真菌，這2批生產(chǎn)批號相近，其他批號未檢出真菌，可能在該段時期存在真菌污染。

3.討論

醫(yī)用口罩的過濾效率和微生物指標是影響口罩質(zhì)量的重要因素和關(guān)鍵指標，GB 19083-2010《醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求》、YY 0469-2011《醫(yī)用外科口罩》、YY/T 0969-2013《一次性使用醫(yī)用口罩》有明確規(guī)定，在口罩檢測時應嚴格按照標準，區(qū)分口罩的類型、是否滅菌，確定檢測項目和方法。

試驗樣品中的無菌醫(yī)用外科口罩檢測結(jié)果均為無菌，在其生產(chǎn)工藝中使用環(huán)氧乙烷滅菌，能達到較好的滅菌效果，不同于輻照滅菌，環(huán)氧乙烷滅菌不會大幅降低口罩的顆粒過濾效率[5]。

口罩的過濾效率是體現(xiàn)口罩對細菌、顆粒、飛沫等的隔離阻擋作用，是體現(xiàn)口罩質(zhì)量的重要指標。有研究表明，醫(yī)用外科口罩的細菌過濾效率與顆粒過濾效率的結(jié)果數(shù)值呈正相關(guān)，當顆粒過濾效率達到86%以上時，細菌過濾效率可達到98%以上，8批醫(yī)用外科口罩樣品的細菌過濾效率與顆粒過濾效率均達到95%以上，與該結(jié)論一致[6,7]。細菌過濾效率與顆粒過濾效率檢測的原理和目的比較相似，但細菌過濾效率所需周期較長。所以可以考慮在疫情期間如果出現(xiàn)醫(yī)用外科口罩短缺時，采用檢測周期較短的顆粒過濾效率代替細菌過濾效率檢測，但是根據(jù)本文的檢測結(jié)果，現(xiàn)行標準中顆粒過濾效率限度值較低（30%），采用指標替代時應提高限度。根據(jù)顆粒過濾效率放行的產(chǎn)品還要對同批次產(chǎn)品進行細菌過濾效率檢測，一旦出現(xiàn)檢測不合格的情況要立即召回放行產(chǎn)品。

佩戴口罩時，局部的溫暖潮濕為微生物生長提供的適宜的微環(huán)境，若口罩微生物污染，則會失去口罩的防護目的，因此考察醫(yī)用口罩的微生物指標有非常重要的安全意義[8]。由于疫情造成對非無菌醫(yī)用口罩的需求大增，有些非口罩生產(chǎn)企業(yè)也轉(zhuǎn)產(chǎn)口罩生產(chǎn)，對這些企業(yè)產(chǎn)品的安全性應給予重視，從本文中2批微生物指標不合格產(chǎn)品均來自服裝轉(zhuǎn)型企業(yè)能說明一定問題。

在2020年青島市生產(chǎn)的37批次三類醫(yī)用口罩中，微生物指標的合格率為95%，過濾效率合格率為100%，總體情況較好。但是在口罩生產(chǎn)中，應重視口罩的微生物指標，對于跨行轉(zhuǎn)產(chǎn)生產(chǎn)醫(yī)用口罩的生產(chǎn)企業(yè)來說，更需要加強人員衛(wèi)生和無菌意識，增加微生物知識的培訓，確保醫(yī)用口罩的衛(wèi)生質(zhì)量和使用的安全性，從而提高口罩的整體質(zhì)量。