楊海勇，廖 瑋，丘韶麟，鄭澤洋，張靜舒，梁姍姍

（1.茂名市茂南區(qū)食品醫(yī)藥信息技術(shù)服務(wù)和快篩快檢中心，廣東茂名 525000；2.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東廣州 511442；3.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東廣州 511442）

褐籃子魚(yú)[Siganus fuscessens(Houttuyn)]是籃子魚(yú)科，籃子魚(yú)屬的一個(gè)種[1]。體長(zhǎng)一般約15～20 cm。體側(cè)上方為褐綠色，下方為銀白色并雜以白色微帶淺藍(lán)的圓形斑。這些圓形斑沿體縱軸拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)成行。側(cè)線之下，斑點(diǎn)較大，約成6行，側(cè)線以上，斑點(diǎn)較小，拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)較不規(guī)則約成18～20行。背、腹和臀鰭亦各有13枚、4枚和7枚毒棘，生活水深1～50 m，喜食海藻、海中浮游生物和附著物，故肉質(zhì)有獨(dú)特風(fēng)味。

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一種殺菌劑，也是高效廣譜的抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有較好的抑制作用?！秳?dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》（原農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)）中規(guī)定，氯霉素為禁止使用的藥物，在動(dòng)物性食品中不得檢出[2]。長(zhǎng)期食用氯霉素殘留超標(biāo)的食品可能引起腸道菌群失調(diào)，導(dǎo)致消化機(jī)能紊亂。人體過(guò)量攝入氯霉素可引起人肝臟和骨髓造血機(jī)能的損害，導(dǎo)致再生障礙性貧血和血小板減少、肝損傷等健康危害[3]。國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理局食品安全抽檢系統(tǒng)公布的結(jié)果顯示，不合格褐籃子魚(yú)中氯霉素檢出數(shù)值范圍從幾微克每千克到幾百微克每千克。

相關(guān)論文資料顯示，水產(chǎn)品非法添加氯霉素的原因主要有3個(gè)：①養(yǎng)殖環(huán)節(jié)為防病、增加養(yǎng)殖密度而使用相關(guān)藥物；②養(yǎng)殖環(huán)節(jié)購(gòu)買(mǎi)使用的飼料中添加了相關(guān)藥物；③物流運(yùn)輸環(huán)節(jié)和市場(chǎng)終端暫養(yǎng)殖環(huán)節(jié)為增加存活率而帶入的外源性污染[4]。氯霉素在水產(chǎn)品的檢出率常年居高不下，這是由于在運(yùn)輸及銷售過(guò)程中，儲(chǔ)存密度較大，不易存活，在水體中添加氯霉素可起到抗菌消炎和保鮮的作用。研究表明，水產(chǎn)品菲律賓蛤仔中的氯霉素含量可隨著不同貯藏和前處理方式消退氯霉素殘留含量[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

養(yǎng)殖水鹽（江西鹽通科技有限公司）；氯霉素殘留檢測(cè)試紙條（檢出限為1.0 μg·kg-1，內(nèi)含試劑及檢測(cè)卡，北京勤邦生物技術(shù)有限公司）；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（CAS:56-75-7，純度≥98%，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

AB SCIEX 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀；搗樣機(jī)（JYL-C020E，九陽(yáng)）；電子天平（AR323CN，奧豪斯儀器有限公司）；渦旋混合儀（MS3 basic S025，德國(guó)IKA公司）；離心機(jī)（2-4，上海拖莫斯科學(xué)儀器有限公司）；樣品濃縮儀（Pro-12 L，南京百思威科技發(fā)展有限公司）；單道手動(dòng)可調(diào)移液器（20～200 μL、1～5 mL，芬蘭biohit實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司）；ACO系列電磁式空氣泵（森森集團(tuán)股份有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 空白實(shí)驗(yàn)

選取個(gè)體重量為100～150 g的褐籃子魚(yú)，需先經(jīng)過(guò)氯霉素殘留膠體金快檢定性初篩實(shí)驗(yàn)，對(duì)快速檢測(cè)結(jié)果顯示為陰性的樣本，根據(jù)《動(dòng)物源性食品中氯霉素藥物殘留量測(cè)定》（GB/T 22338—2008）再次進(jìn)行定量檢測(cè)確證，確認(rèn)同一批的樣本不含有氯霉素殘留。實(shí)驗(yàn)采用4次平行。

1.3.2 暫養(yǎng)處理實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)備2個(gè)規(guī)格容積為60 L的容器用于暫養(yǎng)褐籃子魚(yú)，2個(gè)容器分別以A容器、B容器代名。在每個(gè)容器中鋪平放入12條褐籃子魚(yú)后加入40 L養(yǎng)殖水溶液（鹽度為19 ‰），控制水溫在18～23 ℃，室溫20 ℃[6]。在A容器中使用增氧泵來(lái)暫養(yǎng)殖，B容器不使用增氧泵。比對(duì)A、B容器中褐籃子魚(yú)在12 h內(nèi)的暫養(yǎng)情況，每隔2 h記錄1次存活率。

1.3.3 停藥處理實(shí)驗(yàn)

將不含氯霉素的褐籃子魚(yú)分別暫養(yǎng)于5個(gè)規(guī)格容積為60 L的容器。在每個(gè)容器內(nèi)放置21條不含氯霉素的鮮活褐籃子魚(yú)，對(duì)應(yīng)添加氯霉素的給藥濃度 為 0 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、15 mg·L-1和20 mg·L-1，并按1.3.2暫養(yǎng)處理實(shí)驗(yàn)中A容器的環(huán)節(jié)條件進(jìn)行控制。

在本次實(shí)驗(yàn)的第0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h分別取3條褐籃子魚(yú)進(jìn)行氯霉素殘留量的測(cè)定，同時(shí)測(cè)定對(duì)應(yīng)養(yǎng)殖水中氯霉素殘留量。

1.3.4 換水處理實(shí)驗(yàn)

將21條不含氯霉素的褐籃子魚(yú)暫養(yǎng)于1個(gè)規(guī)格容積為60 L的容器，氯霉素給藥濃度為20 mg·L-1，并按1.3.2暫養(yǎng)處理實(shí)驗(yàn)中A容器的環(huán)節(jié)條件進(jìn)行控制。在24 h后，把容器中的魚(yú)轉(zhuǎn)移至另一新的容器中，并在暫養(yǎng)殖的第0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h和48 h分別更換1次純凈水繼續(xù)暫養(yǎng)。每次換水后立刻取3條褐籃子魚(yú)，對(duì)其進(jìn)行氯霉素殘留含量的測(cè)定，同時(shí)測(cè)定水中氯霉素殘留量。測(cè)定結(jié)果與1.3.3中相同給藥濃度的樣本結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 氯霉素給藥濃度對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素含量的影響

本實(shí)驗(yàn)選擇了4個(gè)梯度的氯霉素養(yǎng)殖水溶液對(duì)褐籃子魚(yú)進(jìn)行養(yǎng)殖，濃度分別為 5 mg·L-1、10 mg·L-1、15 mg·L-1和 20 mg·L-1，養(yǎng)殖后褐籃子魚(yú)中氯霉素含量初始濃度分別為 168.27 μg·kg-1、224.70 μg·kg-1、347.37 μg·kg-1和 478.48 μg·kg-1。由圖 1 可知，氯霉素給藥濃度在0～20 mg·L-1，褐籃子魚(yú)體內(nèi)的氯霉素含量為0～478 μg·kg-1，從而可初步推斷出流通環(huán)節(jié)中褐籃子魚(yú)氯霉素的非法添加量。結(jié)果表明，當(dāng)氯霉素給藥濃度在0～20 mg·L-1，氯霉素給藥濃度與褐籃子魚(yú)中氯霉素含量呈線性關(guān)系，氯霉素給藥濃度越高，褐籃子魚(yú)中氯霉素含量越大。

圖1 氯霉素給藥濃度與褐籃子魚(yú)中氯霉素含量的關(guān)系

2.2 停藥處理對(duì)褐籃子魚(yú)體內(nèi)氯霉素含量的影響

4個(gè)梯度的氯霉素養(yǎng)殖水溶液中（5 mg·L-1、10 mg·L-1、15 mg·L-1和 20 mg·L-1）養(yǎng) 殖 褐 籃 子 魚(yú)24 h，停藥后采用不換水方式持續(xù)養(yǎng)殖，觀察氯霉素在褐籃子魚(yú)體內(nèi)的消除情況。

由表1可知，在4個(gè)梯度的氯霉素藥濃度下，隨著停藥時(shí)間的延長(zhǎng)，48 h內(nèi)褐籃子魚(yú)中氯霉素含量逐漸降低。當(dāng)氯霉素給藥濃度為5 mg·L-1時(shí)，褐籃子魚(yú)中的氯霉素含量在48 h內(nèi)從168.27 μg·kg-1降低至4.42 μg·kg-1；當(dāng)氯霉素給藥濃度為 10 mg·L-1時(shí)，褐籃子魚(yú)中的氯霉素含量在48 h內(nèi)從224.70 μg·kg降低至11.78 μg·kg-1；當(dāng)氯霉素給藥濃度為 15 mg·L-1時(shí)，褐籃子魚(yú)中的氯霉素含量在 48 h 內(nèi)從 347.37 μg·kg-1降低至 5.37 μg·kg-1；當(dāng)氯霉素給藥濃度為 20 mg·L-1時(shí)，褐籃子魚(yú)中的氯霉素含量在48 h內(nèi)從478.48 μg·kg-1降低至 8.73 μg·kg-1。

表1 停藥時(shí)間對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素含量的影響

由表2可知，當(dāng)氯霉素給藥濃度為20 mg·L-1時(shí)，停藥后養(yǎng)殖水養(yǎng)殖2 h氯霉素消除率高達(dá)50.74%，而在當(dāng)給藥濃度為 5 mg·L-1、10 mg·L-1和 15 mg·L-1時(shí)，氯霉素消除率分別為34.67%、14.92%和38.02%。在 4 個(gè)梯度的給藥濃度（5 mg·L-1、10 mg·L-1、15 mg·L-1和20 mg·L-1）下，停藥后養(yǎng)殖水養(yǎng)殖12 h褐籃子魚(yú)中氯霉素消除率均在70%以上，而經(jīng)過(guò)停藥養(yǎng)殖水養(yǎng)殖24 h后消除率均在90%以上。

表2 停藥時(shí)間對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素消除率的影響

2.3 換水處理對(duì)褐籃子魚(yú)內(nèi)氯霉素含量的影響

褐籃子魚(yú)養(yǎng)殖于20 mg·L-1氯霉素養(yǎng)殖水溶液24 h，停藥后采用養(yǎng)殖水養(yǎng)殖，每個(gè)時(shí)間段換水1次，并觀察氯霉素在褐籃子魚(yú)體內(nèi)的消除規(guī)律，結(jié)果如表3、表4所示。

表3 換水處理對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素含量的影響

表4 換水處理對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素消除率的影響

經(jīng)過(guò)48 h后，換水處理組的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量從 479.31 μg·kg-1下降至 2.61 μg·kg-1，氯霉素消除率高達(dá)99.46%，而未換水（對(duì)照組）的氯霉素消除率為98.18%。褐籃子魚(yú)停藥后采用養(yǎng)殖水養(yǎng)殖，每換水1次，在養(yǎng)殖第8 h內(nèi)，換水前后褐籃子魚(yú)中氯霉素含量無(wú)明顯變化；在第12～24 h內(nèi)，換水處理組的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量明顯低于未換水處理組。在第 12 h 時(shí)，換水處理組（78.43 μg·kg-1）的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（92.94 μg·kg-1）；在第 24 h 時(shí)，換水處理組（22.78 μg·kg-1）的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（44.29 μg·kg-1）；在第 48 h 時(shí)，換水處理組（2.61 μg·kg-1）的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（8.73 μg·kg-1）。換水與不換水養(yǎng)殖方式對(duì)褐籃子魚(yú)中氯霉素殘留量變化的影響不會(huì)很大，但通過(guò)換水養(yǎng)殖還是會(huì)令魚(yú)體內(nèi)的氯霉素殘留量有所下降，換水處理有助于褐籃子魚(yú)體中氯霉素含量的消除。

2.4 養(yǎng)殖水溶液中氯霉素的變化

2.4.1 氯霉素給藥濃度中褐籃子魚(yú)養(yǎng)殖水中氯霉素含量的變化

于4個(gè)梯度的氯霉素養(yǎng)殖水溶液中（5 mg·L-1、10 mg·L-1、15 mg·L-1和 20 mg·L-1）養(yǎng) 殖 褐 籃 子 魚(yú)24 h，停藥后采用不換水方式持續(xù)養(yǎng)殖，觀察褐籃子魚(yú)養(yǎng)殖水中氯霉素含量的變化。

由圖2可知，在4種氯霉素給藥濃度下，隨著停藥時(shí)間的延長(zhǎng)（2～24 h），養(yǎng)殖水中的氯霉素含量變化不明顯。當(dāng)氯霉素給藥濃度為5 mg·L-1時(shí)，養(yǎng)殖水中的氯霉素含量在24 h內(nèi)從45.59 μg·kg-1降低至42.58 μg·kg-1，氯霉素消除率為6.60%；當(dāng)氯霉素給藥濃度為10 mg·L-1時(shí)，養(yǎng)殖水中的氯霉素含量在 24 h 內(nèi) 從 164.41 μg·kg-1降低至 148.79 μg·kg-1，氯霉素消除率為9.50%；當(dāng)氯霉素給藥濃度為15 mg·L-1時(shí)，養(yǎng)殖水中的氯霉素含量在24 h內(nèi)從245.98 μg·kg-1降低至 227.19 μg·kg-1，氯霉素消除率為7.64%；當(dāng)氯霉素給藥濃度為20 mg·L-1時(shí)，養(yǎng)殖水中的氯霉素含量在24 h內(nèi)從298.41 μg·kg-1降低至283.22 μg·kg-1，氯霉素消除率為5.09%。而在48 h時(shí)，氯霉素給藥濃度為 5 mg·L-1、10 mg·L-1、15mg·L-1、20 mg·L-1分別下降到 27.41 μg·kg-1、116.08 μg·kg-1、190.96 μg·kg-1、201.54 μg·kg-1，氯霉素消除率分別為39.88%、29.40%、22.37%和32.46%。由此可見(jiàn)在0～24 h養(yǎng)殖水中的氯霉素含量變化不大，直至48 h之后，其含量才開(kāi)始有明顯的下降。

圖2 停藥時(shí)間對(duì)養(yǎng)殖水中氯霉素的影響

2.4.2 換水方式對(duì)褐籃子魚(yú)養(yǎng)殖水中氯霉素含量的變化

將褐籃子魚(yú)養(yǎng)殖于濃度為20 mg·L-1氯霉素養(yǎng)殖水溶液中24 h，停藥后采用不含氯霉素的養(yǎng)殖水養(yǎng)殖，每個(gè)時(shí)間段換水1次，并觀察氯霉素在養(yǎng)殖水溶液中的消除規(guī)律。養(yǎng)殖水經(jīng)過(guò)儀器檢測(cè)方法檢測(cè)，結(jié)果如表5所示。換水比未換水處理組織樣本結(jié)果有明顯下降趨勢(shì)；由此推斷養(yǎng)殖水養(yǎng)殖溶液中氯霉素含量受換水與不換水方式影響很大，第3次（8 h）換水時(shí)，養(yǎng)殖水中氯霉素的含量接近為0 μg·kg-1。

由表5可知，經(jīng)過(guò)48 h后，換水處理組的養(yǎng)殖水中氯霉素含量從 294.48 μg·kg-1下降至 0 μg·kg-1，氯霉素消除率高達(dá)100.00%，而對(duì)照組的養(yǎng)殖水中氯霉素含量從 298.41 μg·kg-1下降至 201.54 μg·kg-1，消除率為32.46%。褐籃子魚(yú)停藥后采用養(yǎng)殖水養(yǎng)殖，每換水1次，換水前后養(yǎng)殖水中氯霉素含量都有明顯變化；在第12～48 h內(nèi)，換水處理組的養(yǎng)殖水中氯霉素含量已為0 μg·kg-1。在第12 h時(shí)，換水處理組（0 μg·kg-1）的養(yǎng)殖水中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（289.98 μg·kg-1）；在第 24 h 時(shí)，換水處理組（0 μg·kg-1）的養(yǎng)殖水中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（283.22 μg·kg-1）；在第 48 h 時(shí)，換水處理組（0 μg·kg-1）的養(yǎng)殖水中氯霉素含量明顯低于未換水處理組（201.54 μg·kg-1）。由此可見(jiàn)，未經(jīng)換水的養(yǎng)殖水中氯霉素消除速度比較慢，而經(jīng)過(guò)換水的養(yǎng)殖水中的氯霉素在12 h時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果為未檢出，由此可為監(jiān)管部門(mén)在褐籃子魚(yú)水產(chǎn)品的監(jiān)督檢查工作提供執(zhí)法判斷依據(jù)。

表5 換水處理對(duì)養(yǎng)殖水中氯霉素含量的影響

3 結(jié)論

當(dāng)氯霉素給藥濃度在0～20 mg·L-1，氯霉素濃度與褐籃子魚(yú)中氯霉素含量呈正相關(guān)，氯霉素濃度越高，褐籃子魚(yú)中氯霉素含量越高。停藥后在不換水狀態(tài)下持續(xù)養(yǎng)殖的褐籃子魚(yú)中氯霉素含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，呈先快速下降后逐漸趨于平衡的變化趨勢(shì)，不同給藥濃度的褐籃子魚(yú)停藥持續(xù)養(yǎng)殖48 h后，消除率均可達(dá)90%以上。

對(duì)褐籃子魚(yú)進(jìn)行換水處理，換水較不換水養(yǎng)殖更有利于氯霉素消減，換水養(yǎng)殖氯霉素消除率為99.46%，不換水養(yǎng)殖氯霉素消除率98.18%，換水比未換水多消除1.28%氯霉素。停藥后在不換水狀態(tài)下養(yǎng)殖水中氯霉素含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)緩慢下降；換水后養(yǎng)殖水中氯霉素含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而呈快速下降后到達(dá)零點(diǎn)。根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，氯霉素最高殘留限量為不得檢出。本次實(shí)驗(yàn)中，停藥處理有利于在褐籃子魚(yú)體內(nèi)氯霉素的消除，氯霉素含量能明顯下降；換水處理也有利于褐籃子魚(yú)中氯霉素的消除。