張娟，孫麗莎，王虹

（焦作市第二人民醫(yī)院婦科，河南 焦作 454150）

宮頸癌是原發(fā)于子宮頸部位的惡性腫瘤，在宮頸癌早期及時進行手術治療，治愈率可達到80%以上，但單一的宮頸癌根治術仍可能出現(xiàn)宮頸癌復發(fā)情況[1]。相關研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌復發(fā)部位從高到低依次為盆壁、宮旁和宮頸，復發(fā)因素主要包括術后恢復、治療方法、疾病分期與疾病類型，術后護理及術后飲食也是導致宮頸癌復發(fā)的重要因素[2]。Zeste基因增強子人類同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一種組蛋白賴氨酸N-甲基轉移酶，其過表達與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展相關[3]。乳腺癌轉移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1)是在乳腺癌細胞中發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉移抑制基因，可降低乳腺癌細胞的轉移潛能[4]；早期宮頸癌復發(fā)與其臨床病理特征有密切相關性，但其臨床病理特征與EZH2、BRMS1蛋白表達的相關性尚無明確報道。因此，本研究旨在探討早期宮頸癌根治術后復發(fā)的臨床病理特征及與EZH2、BRMS1蛋白表達的相關性，以期為臨床預防宮頸癌復發(fā)提供更多循證數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2015年6月至2020年6月在本院收治的238例行宮頸癌根治術治療的早期宮頸癌患者，根據(jù)術后1年隨訪有無復發(fā)分為復發(fā)組64例與未復發(fā)組174例。納入標準：均符合《婦產科學》[5]中宮頸癌的相關診斷標準，病理診斷為宮頸癌；FIGO臨床分期均為ⅠA2～ⅡA2期；臨床資料完整。排除標準：合并嚴重精神障礙疾病者；妊娠期或哺乳期者；合并嚴重心腦、肝腎功能障礙者；合并其他腫瘤疾病者。

1.2 EZH2、BRMS1蛋白免疫組化檢測方法 儀器與試劑：EZH2多克隆抗體（美國艾美捷Epigentek，貨號A-2019-050）、BRMS1兔抗人多克隆抗體（美國艾美捷Epigentek，貨號ABP52889）。

選擇鏈酶卵白素-過氧化物酶免疫組織化學法檢測EZH2、BRMS1蛋白表達水平。將所有患者的石蠟包埋組織準確切片，再經(jīng)常規(guī)脫蠟（放入二甲苯中10 min）及水化處理（無水乙醇-95%酒精-85%酒精-75%酒精各5 min逐級進行）后，加入枸櫞酸鈉緩沖液進行抗原熱修復，滴加一抗[EZH2抗體（1∶100）及BRMS1抗體（1∶410）]4℃過夜，PBS緩沖液沖洗5 min，重復3次，滴加生物素二抗孵育，37℃孵育30 min后，進行PBS沖洗，加入適量DAB顯色液進行顯色，蘇木素染色2 min，1%鹽酸酒精分化10 s，二甲苯透明1 min，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察切片癌細胞細胞核。

結果判定[6]：染色結果均以細胞核內出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色。免疫組織化學評分包括染色強度（0分：無明顯著色，1分：黃色，2分：棕黃色，3分：黃褐色）、陽性細胞所占比例（0分：陽性細胞數(shù)＜5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%為，3分＞50%），總分≥2分定義為陽性表達。

1.3 觀察指標 根據(jù)本研究目的，自行設計調查表，通過電子病例系統(tǒng)收集所有納入對象的年齡、組織學類型、臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度、分化程度等臨床資料，資料收集工作由醫(yī)院專職人員完成。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料（±s）組間差異采用獨立t檢驗，計數(shù)資料用（n，%）組間差異比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 臨床資料比較 兩組患者的組織學類型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度有顯著差異（P＜0.05）。見表1。

表1 臨床資料比較（n，%）

2.2 EZH2、BRMS1蛋白表達情況比較 238例宮頸癌組織中EZH2表達陽性例數(shù)為128例，陽性率為53.78%，見圖1；BRMS1表達陽性例數(shù)為38例，陽性率為15.97%，見圖2。復發(fā)組宮頸癌組織中EZH2陽性表達率為70.31%（45/64），BRMS1陽性表達率為7.81%（5/64），未復發(fā)組宮頸癌組織中EZH2陽性表達率為56.32%（83/174），BRMS1陽性表達率為18.97%（33/174）；復發(fā)組中EZH2蛋白的陽性表達率明顯高于未復發(fā)組（P＜0.05），復發(fā)組中BRMS1蛋白的陽性表達率明顯低于未復發(fā)組（P＜0.05）。見表2。

表2 EZH2、BRMS1蛋白表達情況比較（n，%）

圖1 EZH2蛋白在宮頸癌組織中表達陽性；陰性

圖2 BRMS1蛋白在宮頸癌組織中表達陽性；陰性

2.3 EZH2、BRMS1蛋白表達與宮頸癌術后復發(fā)患者的臨床特征的關系 宮頸癌術后復發(fā)患者EZH2、BRMS1蛋白表達與臨床分期、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度有關（P＜0.05），與組織學類型、腫瘤直徑（P＞0.05）。見表3。

3 討論

多項臨床研究表明[7]，宮頸癌早期手術治療后會復發(fā)，1年內的復發(fā)率大概為50%左右，且復發(fā)后患者死亡風險極高。因此，若能早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，可以有較好的根治及預后效果。相關研究報道[8]，早期宮頸癌術后復發(fā)與患者的多種臨床特征密切相關。本次研究中，術后1年隨訪發(fā)現(xiàn)有64例患者癌癥復發(fā)，復發(fā)率為26.89%；同時分析患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，組織學類型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度與宮頸癌術后復發(fā)有相關性，分析其原因可能是：在組織學類型方面，鱗癌細胞更容易發(fā)生遠處轉移，形成繼發(fā)腫瘤；臨床分期高、宮頸浸潤較深、有淋巴結轉移的患者，其腫瘤惡化程度更嚴重，部分患者及時做了根治手術，也有復發(fā)的可能。提示臨床需重點關注宮頸癌患者的組織學類型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度，慎重考慮手術方案，是否需要進行術后放化療，預防腫瘤擴散導致癌癥復發(fā)。

腫瘤的侵襲和轉移是癌癥復發(fā)的重要階段，是成功根治腫瘤的最大障礙。已有研究發(fā)現(xiàn)[9-10]，EZH2參與多種惡性腫瘤的侵襲和轉移，BRMS1具有降低癌細胞侵襲和轉移的作用。本次研究中，復發(fā)組中EZH2蛋白的陽性表達率明顯高于未復發(fā)組，BRMS1蛋白的陽性表達率明顯低于未復發(fā)組，進一步說明早期宮頸癌患者若癌組織中BRMS1陽性表達率較高，可抑制腫瘤轉移，控制病情發(fā)展；同時，若EZH2高表達，可能抑制BRMS1，促進癌細胞的侵襲和轉移，進而導致宮頸癌復發(fā)。多項研究發(fā)現(xiàn)[11]，EZH2蛋白在乳腺癌、肝癌、前列腺癌以及宮頸癌等惡性腫瘤中陽性表達明顯增高，且與腫瘤增殖、轉移、生存時間和不良預后密切相關。本此研究結果與上述報道基本一致，分析原因可能是，EZH2是位于7號染色體的基因，是多梳基因家族的主要成員，屬于轉錄抑制因子[12]，能夠抑制多種抑癌基因和腫瘤轉移抑制基因的表達，促進腫瘤細胞侵襲轉移，因此在復發(fā)患者體內呈現(xiàn)高表達；BRMS1表達能夠通過與其他分子形成轉錄復合物抑制腫瘤轉移，因此在未復發(fā)患者體內BRMS1表達相對較高。本次研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌術后復發(fā)患者EZH2、BRMS1蛋白表達水平與臨床分期、淋巴結轉移、宮頸浸潤深度有關。說明患者臨床分期越晚，宮頸浸潤越深，且有淋巴結轉移，其EZH2表達越高，則BRMS1表達下調或缺失。

綜上所述，早期宮頸癌根治術后復發(fā)患者，其臨床分期越晚、宮頸浸潤越深、有淋巴轉移，則EZH2蛋白表達越高、BRMS1蛋白表達越低。但本研究仍存在一定的局限性，一是本次研究樣本數(shù)量較少；二是本次研究為回顧性研究，可能存在個體差異。還需進一步采用大樣本研究對相應的治療手段進行深入研究，如EZH2抑制劑的使用對預防宮頸癌復發(fā)的效果。