国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

QF-PCR技術(shù)應(yīng)用于快速產(chǎn)前診斷額外檢出母體性染色體數(shù)目異常3例報告

2022-02-23 10:24羅海艷鄒永毅陽彥陳佳黃婷劉艷秋
實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2022年5期
關(guān)鍵詞:核型母體數(shù)目

羅海艷,鄒永毅,陽彥,陳佳,黃婷,劉艷秋

(江西省婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心,江西 南昌 330006)

性染色體數(shù)目異常在可生育女性中存在著一定的發(fā)生率,其類型主要為嵌合型特納綜合征(Turner Syndrome,TS)與超雌綜合征(Jacob Syndrome),臨床上往往不表現(xiàn)出明顯異常。但性染色體數(shù)目異常發(fā)生在生殖腺時有遺傳給子代的風(fēng)險[1]。定量熒光PCR(Quantitive fluorescent PCR,QF-PCR)是一項基于多態(tài)性短串聯(lián)重復(fù)序列(Short tandem repeat,STR)進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增并通過毛細(xì)管電泳以分析STR位點個性化信息的技術(shù),應(yīng)用于產(chǎn)前診斷不僅可實現(xiàn)對胎兒常見染色體21、18、13、X、Y數(shù)目異常的快速診斷,同時可獲得孕婦上述常見染色體的信息,排除檢測樣本的母體細(xì)胞污染,并額外檢出孕婦自身存在的性染色體數(shù)目異常,對提高孕婦染色體異常檢出率與提供優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)具有重要意義[2-4]。本研究報告了3例經(jīng)QF-PCR快速產(chǎn)前診斷而額外檢出的母體性染色體數(shù)目異常病例,對QF-PCR技術(shù)在額外檢出母體性染色體數(shù)目異常中的臨床應(yīng)用進(jìn)行了總結(jié)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 孕婦1,26歲,G1P0,自然受孕,孕18周B超示正常妊娠,NIPT提示性染色體異常;孕婦2,32歲,G2P1,自然受孕,孕24周B超示羊水偏多及胎兒右鎖骨下動脈迷走;孕婦3,20歲,G1P0,自然受孕,孕20周B超示正常妊娠,NIPT提示性染色體異常。3例孕婦均否認(rèn)近1年內(nèi)有輸血史。獲取充分知情同意后,于B超引導(dǎo)下對3例孕婦行羊水穿刺術(shù)采集羊水行產(chǎn)前診斷。同時抽取3例孕婦的外周血,對外周血與羊水行QF-PCR檢測、以及羊水行CMA與核型分析,并對QF-PCR檢測提示性染色體數(shù)目異常的孕婦行核型分析進(jìn)一步驗證。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取 提取外周血、羊水基因組DNA,具體操作參照Qiagen血液組織DNA提取試劑盒說明書。

1.2.2 QF-PCR檢測 采用QF-PCR快速診斷試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)對21、18、13、X、Y染色體非整倍體數(shù)目異常進(jìn)行檢測。(1)STR位點:本研究中QF-PCR快速診斷試劑盒包含人類牙釉蛋白基因(Amelogenin,AMELXY)及14個STR位點,見表1。(2)PCR擴(kuò)增與毛細(xì)管電泳:參照試劑盒說明書行PCR擴(kuò)增(ABI 9700,Applied Biosystem,美國)與毛細(xì)管電泳(ABI 3500 DX,Applied Biosystem,美國)。(3)結(jié)果分析:使用GeneMapper ID 4.0軟件分析毛細(xì)管電泳結(jié)果,判斷標(biāo)準(zhǔn)遵照英國臨床分子遺傳協(xié)會(Clinical Molecular Genetics Society,CMGS)2012年新頒布的指南“QFPCR for the diagnosis of aneuploidy best practice guidelines(2012)v3.01”。

表1 21、18、13、X/Y染色體特異STR位點的遺傳標(biāo)記

1.2.3 CMA檢測 參照Affymetrix芯片系統(tǒng)操作流程,取300 ng羊水gDNA用NspI酶隨機(jī)消化,將消化產(chǎn)物末端補(bǔ)齊并與共同引物連接,連接處理后的樣本行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物大小為150~2000 bp,4%瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)產(chǎn)物條帶。磁珠法純化擴(kuò)增產(chǎn)物,純化產(chǎn)物由片段化酶處理為25~125 bp片段并連上生物素標(biāo)記。標(biāo)記產(chǎn)物與雜交液混勻變性后加載于750K芯片,置于Genechip hybridization oven 645雜交儀于50℃60 r/min條件下雜交16~18 h,隨后于GeneChip@FluidiesStation 450Dx v.2洗滌工作站洗滌并染色。洗滌后的芯片于GeneChip@Scanner 3000Dx v.2 with AutoLoader掃描儀中掃描,獲取數(shù)據(jù)并加載于配套ChAS v4.0軟件后進(jìn)行結(jié)果分析及判讀。以上實驗儀器均購自美國Affymetrix公司。

1.2.4 染色體核型分析 10 mL羊水1500 rpm離心10 min棄上清,重懸羊水細(xì)胞并接種至Amniopan培養(yǎng)基中,0.5 mL外周血接種至RPMI-1640培養(yǎng)基中。按照常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)制備染色體,320-400條帶水平G顯帶,徠卡染色體核型掃描系統(tǒng)進(jìn)行分析,鏡下每例樣本計數(shù)30個中期分裂相,分析10個核型,對疑似嵌合體或異常核型者再加數(shù)至100個分裂相,具體參照人類染色體命名的國際規(guī)則ISCN(2016)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

3例孕婦的羊水樣本未見母體細(xì)胞污染,QFPCR檢測、核型分析、CMA檢測顯示3例胎兒未見檢測范圍內(nèi)的染色體異常;QF-PCR檢測顯示3例孕婦存在性染色體數(shù)目異常,與外周血染色體核型分析結(jié)果一致。此處僅針對3例性染色體數(shù)目異常孕婦的QF-PCR與核型檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

2.1 QF-PCR檢測結(jié)果QF-PCR檢測示孕婦1存在嵌合型性染色體數(shù)目異常,無法判斷具體嵌合比例;孕婦2與孕婦3存在性染色體數(shù)目異常,提示為X三體,見圖1。具體判讀標(biāo)準(zhǔn)如下:(1)某一染色體上單個或多個STR位點出現(xiàn)多余等位基因峰(三體最多出現(xiàn)3個1:1:1等位基因峰)或雙等位基因峰比率發(fā)生偏移(<0.45或>2.4),考慮嵌合體可能,需結(jié)合熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)或核型綜合分析。(2)某一染色體上超過兩個STR位點出現(xiàn)1:1:1三等位基因峰或1:2(0.45~0.65)、2:1(1.8~2.4)的雙峰,且其他染色體STR位點檢測無與之矛盾的結(jié)果,提示樣本為該染色體三體。

圖1 3例孕婦Q F-PCR檢測結(jié)果示意圖

2.2 核型分析結(jié)果 孕婦1外周血染色體核型分析結(jié)果為mos 47,XXX[79]/45,XO[21],孕婦2和孕婦3外周血染色體核型分析結(jié)果為47,XXX,見圖2,QF-PCR檢測結(jié)果與外周血染色體核型分析結(jié)果一致。

圖2 3例孕婦外周血染色體G顯帶核型分析圖

2.3 妊娠結(jié)局隨訪 3例孕婦均足月順產(chǎn),3例胎兒出生時身高體重合格,阿氏評分為10分,后期將繼續(xù)定期隨訪。

3 討論

QF-PCR作為目前產(chǎn)前診斷的主流技術(shù),具有檢測速度快、自動化程度高的特點,對21、18、13、X、Y五組染色體非整倍體數(shù)目異常檢出具有高度敏感性與特異性,可診斷出絕大部分的染色體數(shù)目異常疾病[5-6]。QF-PCR技術(shù)用于快速產(chǎn)前診斷中,能排除胎兒標(biāo)本的母體細(xì)胞污染,快速檢出胎兒常見的染色體數(shù)目異常,大大減少了孕婦及家屬的心理負(fù)擔(dān),并根據(jù)STR位點信息可判斷多余染色體的親本來源,判斷樣本間親緣關(guān)系與檢出單親二倍體(Unparental disomy,UPD);此外,可獲得孕婦上述常見染色體的信息并額外檢出母體的性染色體數(shù)目異常,為遺傳咨詢提供更多指導(dǎo)。當(dāng)然,QF-PCR用于快速產(chǎn)前診斷也具有一定的局限性,如對于非常見染色體的數(shù)目異常檢測需選擇特異性的STR位點,且對于上述五組染色體的結(jié)構(gòu)異常及嵌合比例低于20%的染色體數(shù)目異常不敏感[13]。

特納氏綜合征與超雌綜合征是女性常見的性染色體疾病[7-9],完全型特納氏綜合征患者常由身材矮小,發(fā)育畸形、原發(fā)閉經(jīng),原發(fā)性不孕、第二性征發(fā)育不良等臨床癥狀就診而得到診斷[10]。嵌合型特納氏綜合征患者的臨床表型常視正常細(xì)胞與異常細(xì)胞之間的比例不同而有所差異,45,XO細(xì)胞的比例越小則臨床表現(xiàn)越近似正常個體[11]。大部分超雌綜合征患者青春期月經(jīng)正常且能正常生育,少數(shù)患者性器官發(fā)育不全,出現(xiàn)月經(jīng)紊亂及早期絕經(jīng)[12]。由于部分性染色體數(shù)目異常女性患者發(fā)育正常且具有生育能力,常常未能得到及時的檢查與診斷,臨床上很容易漏檢,當(dāng)該染色體異常發(fā)生在生殖腺時可遺傳給子代而導(dǎo)致出生缺陷。本報道中3例孕婦由產(chǎn)前篩查未通過而行產(chǎn)前診斷,診斷結(jié)果表明3例胎兒未見檢測范圍內(nèi)的染色體異常,孕婦1經(jīng)QF-PCR檢測提示為性染色體嵌合體,核型分析為47,XXX與45,XO的嵌合體(由于孕婦未同意,遂未行FISH檢測該孕婦其它組織的嵌合比例),孕婦2與孕婦3經(jīng)QF-PCR檢測提示為X三體,核型驗證結(jié)果與其一致。3例孕婦均未表現(xiàn)出明顯智力與外貌異常,可自然妊娠,僅通過常規(guī)的產(chǎn)前診斷技術(shù)不能檢出母體的性染色體數(shù)目異常而容易漏檢。通過QF-PCR技術(shù),不僅實現(xiàn)了對胎兒常見染色體非整倍體的快速產(chǎn)前診斷,降低了孕婦及家屬的心理焦慮,而且經(jīng)濟(jì)快速地檢出了上述3例孕婦自身存在的性染色體數(shù)目異常,為3例孕婦的優(yōu)生優(yōu)育提供了指導(dǎo)??紤]到3例孕婦均自身存在性染色體數(shù)目異常,我們建議其后續(xù)妊娠時直接行產(chǎn)前診斷。

綜上所述,QF-PCR技術(shù)在快速產(chǎn)前診斷中具有重要的臨床應(yīng)用價值。與產(chǎn)前診斷中其它遺傳學(xué)檢測方法相比,QF-PCR不僅能實現(xiàn)對胎兒常見染色體數(shù)目異常的快速診斷及排除母體細(xì)胞污染,在額外檢出母體性染色體數(shù)目異常方面,QFPCR更具有其獨特的優(yōu)勢:QF-PCR在快速產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用提高了可生育女性中性染色體數(shù)目異常的檢出率,對其后續(xù)生育指導(dǎo)具有重要意義。

猜你喜歡
核型母體數(shù)目
蒲公英
移火柴
SNP-array技術(shù)聯(lián)合染色體核型分析在胎兒超聲異常產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用
《哲對寧諾爾》方劑數(shù)目統(tǒng)計研究
牧場里的馬
多胎妊娠發(fā)生的原因及母體并發(fā)癥處理分析
染色體核型異?;颊呷蚪M芯片掃描結(jié)果分析
染色體核型分析和熒光原位雜交技術(shù)用于產(chǎn)前診斷的價值
平鯛不同發(fā)育類型的染色體核型分析
三種稠環(huán)硝胺化合物的爆炸性能估算及其硝化母體化合物的合成
若羌县| 时尚| 资兴市| 大英县| 二手房| 星子县| 河池市| 南部县| 新乡县| 望城县| 通山县| 壤塘县| 开江县| 揭东县| 舞钢市| 陵川县| 察雅县| 蓬莱市| 中宁县| 八宿县| 津市市| 辽阳市| 济阳县| 嘉荫县| 象山县| 乌拉特前旗| 武鸣县| 阿城市| 白朗县| 枝江市| 泸西县| 边坝县| 绩溪县| 定日县| 桐柏县| 旅游| 渑池县| 石柱| 清河县| 类乌齐县| 河东区|