韓勇 王春平 劉玉潔 呂桂霞 范承祥

（1，山東省日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276800；2，山東省東營(yíng)市現(xiàn)代畜牧業(yè)發(fā)展中心 257000）

禽白血病 （Avian leukosis，AL）又稱(chēng)禽白細(xì)胞增生癥，是由禽白血病病毒 （ALV）引起的禽類(lèi)多種腫瘤性疫病的總稱(chēng)，主要是淋巴細(xì)胞性白血病，其次是成紅細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞性白血病及骨髓細(xì)胞瘤、血管瘤、內(nèi)皮瘤等疫病[1]。禽白血病病毒可分為A-Kl1個(gè)亞群，其中A/B和J亞群對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害最大，在中國(guó)雞群中普遍存在單獨(dú)或共感染現(xiàn)象[2]。

日照麻雞原產(chǎn)于日照市東北部?jī)沙擎?zhèn)一帶，山東省膠南市瑯琊鎮(zhèn)一帶也有分布，也稱(chēng) “瑯琊雞”。日照麻雞抗病力強(qiáng)、耐粗飼、肉質(zhì)風(fēng)味好、產(chǎn)蛋多，屬肉蛋兼用型品種，深受廣大消費(fèi)者的歡迎。1978年被列為山東地方家禽良種，2009年被山東省畜牧獸醫(yī)局列入 《山東省畜禽遺傳資源保護(hù)名錄》[3]。經(jīng)過(guò)多年的保種和推廣，日照麻雞現(xiàn)存原種4萬(wàn)余只，祖代雞20萬(wàn)套，年產(chǎn)父母代雞苗720萬(wàn)套，品種接近30個(gè)。日照麻雞憑借其獨(dú)特的表現(xiàn)性狀和優(yōu)異的生產(chǎn)性能，產(chǎn)品銷(xiāo)往山東、河南、陜西、山西、江蘇、云南、貴州和四川等地，受到市場(chǎng)的廣泛認(rèn)可。近年來(lái)，我國(guó)大部分地區(qū)的地方品種雞禽白血病發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，并且感染情況越來(lái)越復(fù)雜，造成一些雞場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失慘重。為了解日照麻雞禽白血病感染狀況，本試驗(yàn)抽檢了19個(gè)雞場(chǎng)，檢測(cè)禽白血病J抗體、A/B抗體和p27抗原陽(yáng)性情況，為日照麻雞禽白血病凈化提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品及抽檢方法

2019年6月至2020年12月，在日照4個(gè)區(qū)縣分別采集19個(gè)雞場(chǎng)樣品進(jìn)行試驗(yàn)。由于采用實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要考慮檢測(cè)方法的敏感性，即檢測(cè)到陽(yáng)性動(dòng)物，采用當(dāng)前大多數(shù)獸醫(yī)流行病學(xué)抽樣軟件發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣樣本量計(jì)算公式[4]為：

其中n為抽樣個(gè)數(shù)，CL為置信水平，D為群中的陽(yáng)性動(dòng)物數(shù) （等于群內(nèi)個(gè)體數(shù)與預(yù)定流行率的乘積），N為群內(nèi)個(gè)體數(shù)，Se為檢測(cè)方法的敏感性。

每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)按照群內(nèi)陽(yáng)性率10%，置信水平95%，預(yù)計(jì)每個(gè)場(chǎng)點(diǎn)隨機(jī)抽樣30份。由于原種場(chǎng)陽(yáng)性率較低，試驗(yàn)擴(kuò)大了抽樣數(shù)量，每個(gè)場(chǎng)隨機(jī)抽樣100份。采樣從翅靜脈或心臟采血，分離血清4℃保存?zhèn)溆谩o(wú)菌棉簽采集雞泄殖腔棉拭子，置于滅菌的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液 （pH=7.4），與稀釋液混勻后冷凍。樣品采集情況詳見(jiàn)表1。

表1 日照麻雞禽白血病檢測(cè)采樣情況 （單位：個(gè)、份）

1.2 檢測(cè)試劑與儀器

1.2.1 檢測(cè)試劑

禽白血病病毒抗體J抗體、A/B抗體試劑盒和p27抗原試劑盒均購(gòu)自IDEXX公司。

1.2.2 儀器

美國(guó)賽默飛生產(chǎn)酶標(biāo)儀 （MultIIskan GO）；美國(guó)PALL生產(chǎn)超純水純化系統(tǒng) （Cascada）；上海南榮生產(chǎn)恒溫培養(yǎng)箱（DGX-9143BC）； Eppendorf移液器等。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

1.3.1 樣品處理

血清樣品在檢測(cè)前12000r/min離心1min。泄殖腔棉拭子-20℃凍融1次，恢復(fù)至室溫后劇烈振蕩1min，擠出棉簽中的液體，棄掉棉簽。液體在2～8℃ 12000r/min離心1min，吸取上清，加到反應(yīng)板中。

1.3.2 檢測(cè)方法

參照IDEXX公司檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，用酶聯(lián)免疫法（ELISA）進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

在日照全市19個(gè)雞場(chǎng)共檢測(cè)血清樣品710份，泄殖腔棉拭子710份。調(diào)查結(jié)果顯示，2個(gè)原種場(chǎng)有1個(gè)檢測(cè)出禽白血病p27抗原陽(yáng)性，未檢測(cè)出禽白血病J抗體、A/B抗體陽(yáng)性場(chǎng)。祖代禽白血病J抗體、A/B抗體和p27抗原檢測(cè)陽(yáng)性場(chǎng)均為1個(gè)，父母/商品代禽白血病J抗體、AB抗體和p27抗原檢測(cè)陽(yáng)性場(chǎng)分別為4、1和5個(gè)。禽白血病J抗體、A/B抗體和p27抗原總體陽(yáng)性率分別為8.0%、3.7%和11.0%。結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2 日照麻雞禽白血病檢測(cè)結(jié)果

3 討論

（1）由于目前沒(méi)有禽白血病疫苗可供使用，所以雞群中的抗原和抗體水平可以反映出日照麻雞禽白血病感染范圍依然較為廣泛，需要進(jìn)一步加強(qiáng)各代次雞場(chǎng)的禽白血病凈化工作。禽白血病既可水平傳播也可垂直傳播，其中垂直傳播方式隨著種群繁育會(huì)造成病毒擴(kuò)散、危害擴(kuò)大的繼代效應(yīng)[5，6]。因此，從原種、祖代場(chǎng)尤其是原種代開(kāi)展凈化勢(shì)在必行。

調(diào)查結(jié)果顯示，2個(gè)原種場(chǎng)均未檢測(cè)出禽白血病J抗體、A/B抗體，但有1個(gè)檢測(cè)出p27抗原陽(yáng)性。4個(gè)祖代中有1個(gè)檢測(cè)出禽白血病J抗體、A/B抗體和P27抗原陽(yáng)性。父母/商品代禽白血病J抗體、A/B抗體和P27抗原陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)分別為4、1和5個(gè)。結(jié)果表明，日照市原種和祖代場(chǎng)仍可能有禽白血病感染，父母/商品代感染率較高，主要流行亞群以ALV-J為主，凈化任務(wù)依然艱巨。

（2）本試驗(yàn)采用抽樣軟件發(fā)現(xiàn)疫病進(jìn)行抽樣，僅對(duì)群內(nèi)進(jìn)行科學(xué)抽樣，對(duì)場(chǎng)群采樣由于時(shí)間物力等原因，僅采集19個(gè)場(chǎng)，數(shù)量相對(duì)較少，所以，日照麻雞場(chǎng)群陽(yáng)性感染率有待進(jìn)一步研究。另外，由于原種場(chǎng)陽(yáng)性率較低，僅采樣100份，數(shù)量相對(duì)較少，不能最大限度地反應(yīng)祖代場(chǎng)感染情況。

（3）我國(guó)地方品種由于禽白血病的凈化啟動(dòng)比較晚，加上有些場(chǎng)引種等原因?qū)е缕潢?yáng)性率較高。禽白血病凈化需要長(zhǎng)期、持續(xù)的堅(jiān)持和努力，凈化是一個(gè)系統(tǒng)工程[7]。因此，面對(duì)禽白血病應(yīng)做好種群凈化工作，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，進(jìn)一步研究?jī)艋肪€(xiàn)和方法，制定適合的凈化方案，盡早解決禽白血病對(duì)日照麻雞這一優(yōu)良地方品種的威脅，達(dá)到國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃要求。