展建麗，姜 珊，陳穆芝，田樹革

（1.新疆師范大學 化學化工學院，新疆 烏魯木齊830017；2.新疆醫(yī)科大學 中醫(yī)學院，新疆 烏魯木齊830011；3.浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院 風濕免疫科，浙江 杭州310005）

草木犀是一年生或兩年生草木犀屬植物，《藏藥標準》、《歐洲藥典（第5 部）》中均記載草木犀為豆科植物黃花草木犀[Melilotusofficinalis（Linn.）Pall.]，又被稱作野苜蓿，辟漢草。黃花草木犀是草木犀的一種，大多生長在我國西北、華南、東北等地，其具有重要的農(nóng)用價值和藥用價值。在農(nóng)用方面，黃花草木犀耐鹽堿，耐旱，抗寒，抗風沙，貧瘠地方也能生長，生命力非常頑強[1]，在國內(nèi)早期黃花草木犀大多作為飼料和肥料使用，它的根系極其發(fā)達，與大豆植物相似，營養(yǎng)價值與大豆類似，是牧民首選的飼料[2]。在藥用方面，黃花草木犀其性味苦、涼，具有清熱解毒、消炎、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗腫瘤、改變急性腦缺血等藥效[3,4]，用于脾臟病、絞腸痧、白喉、乳蛾等治療[5]，在國外其藥用價值得到較好的開發(fā)。日本開發(fā)的草木犀流浸片（香豆素酸）已上市使用，黃花草木犀的藥用價值有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

黃花草木犀在實際使用過程中大多考慮活性成分，無機陰離子很少被考慮，但無機陰離子在中藥考察中也很重要。Cl-能調(diào)節(jié)植物氣孔，維持植物體內(nèi)pH 平衡，使植物健康生長，NO-3為植物提供氮元素，是蛋白質(zhì)合成的必要元素，SO24-對植物體內(nèi)的微生物有抑制作用，為全面分析藥品，分析測定無機陰離子可以為全面考察藥材的質(zhì)量價值提供參考。如用離子色譜法測植物、藥品和肉制品中的無機陰離子[6-8]。采用離子色譜法快速、便捷、并可同時檢測多種陰離子，適用于批量較多的樣品檢測，為離子檢測工作節(jié)省大量時間。

本實驗采用超聲法提取黃花草木犀，用離子色譜法對全草、莖、葉、花4 個不同生長部位同時進行陰離子測定，為黃花草木犀的開發(fā)提供基礎(chǔ)研究。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

DIONEX ASI 型離子色譜儀（賽默飛世爾（上海） 儀器有限公司）；DIONEX AS22 型離子色譜柱；ME204E 型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；KQ5200DE 型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

去離子水，KNO3、K2SO4以及KCl 試劑均為分析純。

1.2 標準溶液的制備

參照國標HJ84-2016，準確稱取1.6485g NaCl、1.4792g 無水Na2SO4、1.6304g KNO3分別溶于水中，分別移入1000mL 容量瓶，用水稀釋定容至標線，混勻。移轉(zhuǎn)入聚乙烯瓶中貯存。精確移取100mL NaNO3標準儲備液、200mL K2SO4標準儲備液、200mL KCl標準儲備液于1000mL 聚四氟乙烯容量瓶中，加水定容至刻度線，配制100mg·L-1的NO-3、200mg·L-1的SO24-、200mg·L-1的Cl-的混合標準使用液；準確移取1.00、2.00、5.00、10.0、20.0mL 的混合標準使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的Cl-系列溶液；準確移取0.50、1.00、2.50、5.0、10.0mL 的混合標準使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的NO-3系列溶液；準確移取0.50、1.00、2.50、5.00、10.00mL 的混合標準使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的SO24-系列溶液。

1.3 樣品溶液制備

參照文獻[11-13]制備檢測含量，將新鮮的黃花草木犀清洗干凈，再用純水沖洗3 次，置于通風室內(nèi)陰干，使用電動粉碎機將黃花草木犀的根、莖、葉和全草分別粉碎，將粉碎后的樣品過篩（80 目）備用。稱取1.00g 樣品于50mL 錐形瓶中，加入35mL 去離子水，混勻。超聲提取20min，過濾，轉(zhuǎn)移至50mL 的容量瓶中，用去離子水定容至刻度線，混勻，用0.22μm濾膜過濾，離子色譜儀測定。表1 為陰離子色譜峰參考保留時間。

表1 陰離子保留時間Tab.1 Anion retention time

1.4 色譜條件

色譜柱DionexIonPacAS22 型色譜柱（4×250mm）；淋洗條件：采用1.5mmol·L-1的Na2CO3和1.5mmol·L-1的NaHCO3混合溶液；洗脫條件：等度洗脫0～20min；流速：1.2mL·min-1；進樣體積：10μL；柱溫：室溫；抑制性電導檢測器。

2 結(jié)果與討論

2.1 離子色譜圖

3 種離子混標溶液色譜圖見圖1；3 種離子全草溶液色譜圖見圖2。

圖1 離子混標色譜圖Fig.1 Ionmixed standard chromatogram

圖2 樣品色譜圖Fig.2 Chromatogram of sample

2.2 線性關(guān)系和方法檢出限

分別吸取不同濃度的離子標準溶液，依次進樣測定，以離子峰面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制3 種陰離子的標準曲線，得出其線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限，結(jié)果見表2。

由表2 可以看出，3 種陰離子測定均在線性范圍內(nèi)，離子色譜法測定黃花草木犀的3 種陰離子具有良好的線性相關(guān)性，其線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9993，0.9995，0.9991。

表2 方法線性范圍和檢出限Tab.2 Results of coefficient and detection limit

2.3 樣品的穩(wěn)定性實驗

稱取1.0g 藥品，按“1.4 項下”方法提取樣品，相同色譜條件，測樣時間1、2、3、4、5、6h 分別進行測定，結(jié)果顯示，Cl-、NO-3、SO24-的峰面積RSD 值均小于5%，表明樣品在6h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 樣品的精密度實驗

稱取1.00g 藥品，將藥品“按1.2”色譜條件連續(xù)平行測定6 次，樣品中Cl-、NO-3、SO24-的峰面積RSD值分別為2.00%、3.89%、2.14%，表明儀器精密度良好，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量精密度實驗Tab.3 Precision test of sample content

2.5 樣品的加標回收率

稱取3 份黃花草木犀樣品2.0g，按“1.4 項下”實驗方法樣品溶液制備，分別加入Cl-、NO-3、SO24-的混標溶液，回收率在90.00%～105.00%之間，RSD 為1.7%，結(jié)果見表4。

表4 樣品加標回收率實驗Tab.4 Recovery of samples with added standard

2.6 樣品不同生長部位的離子含量測定

分別稱取對不同生長部位的黃花草木犀2.0g，按“1.4 項下”方法制備樣品溶液，微濾膜過濾后，測全草、莖、葉、花的Cl-、NO-3、SO24-含量，結(jié)果見表5。

由表5 可見，葉的Cl-、NO-3、SO24-含量最高，全草和莖的Cl-、NO-3、SO24-含量比較低。

表5 黃花草木犀不同部位的離子含量Tab.5 Ion content of different parts of herba botanica

3 結(jié)論

本實驗采用超聲法提取黃花草木犀，操作簡便，提取率高，采用離子色譜法測定黃花草木犀中的Cl-，NO-3和SO24-的含量。應(yīng)用DionexIonPacAS22 型色譜柱適合快速分析常規(guī)離子，短時間內(nèi)能快速實現(xiàn)簡單基質(zhì)的離子分離和無機陰離子的等度分析。抑制性電導檢測器，該方法靈敏度高，快速、簡潔、分離效果好，16min 內(nèi)完成分析，可以用于該藥品的批量檢測。