宗春燕，蘇學(xué)軍，趙子龍

（泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，江蘇 泰州 225300）

蒲黃系香蒲屬植物水燭香蒲、東方香蒲或同屬植物的干燥花粉[1]。香蒲屬植物為多年生、水生或沼生類草本，雌雄同柱，作為重要的水生經(jīng)濟(jì)作物，其遍布十分廣泛，在我國(guó)各省共有12 種[2]。香蒲的雌雄花序均呈棒狀，著生于同一花序軸上，雄花序細(xì)小而雌花序粗大。香蒲可用于工礦廢水治理，可作造紙?jiān)?，能提高土壤肥力，在許多領(lǐng)域均有應(yīng)用。人們對(duì)于香蒲花粉（即蒲黃）的藥用價(jià)值研究較早，最早可見于《神農(nóng)本草經(jīng)》[3]，被列為草木上品，具有活血化瘀，止血鎮(zhèn)痛，改善微循環(huán)，防治冠心病和心肌梗塞，興奮收縮子宮等多種藥理作用[3,4]。關(guān)于蒲黃中總黃酮的提取工藝，已有部分學(xué)者進(jìn)行過相關(guān)的研究[5-7]，報(bào)道中均以藥店購(gòu)買的蒲黃藥材為原料進(jìn)行提取試驗(yàn)，而該藥材一般是用采集的雄花序加工而成，對(duì)于同柱的雌花序中總黃酮的提取研究目前鮮有報(bào)道[8]。因此，本實(shí)驗(yàn)以泰州地區(qū)天德湖公園河道旁成熟的雌花序?yàn)樵?，采用醇提取法研究香蒲雌花序中總黃酮的提取工藝，以期為該香蒲屬植物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料、試劑及主要儀器

香蒲雌花序（自制 產(chǎn)自泰州）；蘆?。℉PLC≥98% 上海源葉生物科技有限公司）；無水乙醇（AR 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HKG-1OOA 型高速粉碎機(jī)（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司）；YP402N 型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；TG16G 型高速離心機(jī)（鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；SHZ-DⅢ型循環(huán)水真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；TU-1810 型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 香蒲雌花序中總黃酮的提取 新鮮采摘的水燭香蒲的雌花序自然晾曬，干后捋取雌花序的蒲絨。取適量置于50℃的烘箱中烘干到恒重，并以粉碎機(jī)稍加粉碎，過40 目篩。精密稱取2.0g 香蒲粉末于150mL 圓底燒瓶中，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的料液比加入一定濃度的乙醇溶液，浸泡30min，然后在微沸狀態(tài)下回流提取至設(shè)定的時(shí)間，再在轉(zhuǎn)速4000r·min-1條件下，離心分離10min，回收上清液，待測(cè)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品低溫烘干后，準(zhǔn)確稱取13.2mg，加入70%乙醇，超聲溶解后移入100mL 棕色容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，配得濃度為132μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密移取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別置于10mL 棕色容量瓶中，在各個(gè)容量瓶中依次加入5%的NaNO2溶液0.3mL，搖勻，靜置6min，加入10%的Al（NO3）3溶液0.3mL，搖勻，靜置6min，再加入20%的NaOH 溶液2.0mL，用30%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，室溫放置10min 后在最大吸收波長(zhǎng)505nm 處測(cè)定吸光度。以吸光度A 為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)，經(jīng)線性擬合得回歸方程為A=0.0150c-0.0291，R2=0.9975。

1.2.3 總黃酮含量的測(cè)定 移取1mL 提取液置于10mL 容量瓶中，加入30%的乙醇至5mL，再按1.2.2中方法加入顯色劑進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)出吸光度值，根據(jù)回歸方程計(jì)算出香蒲雌花序提取液中總黃酮含量，按下式計(jì)算提取率。

式中 c：上清液中總黃酮的濃度，μg·mL-1；v：乙醇溶液體積，mL；n：稀釋倍數(shù)；m：香蒲雌花序粉末的質(zhì)量，mg。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 乙醇濃度對(duì)提取率的影響 準(zhǔn)確稱取2.0g烘干的香蒲雌花序粉末，分別使用濃度為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%的乙醇溶液浸泡30min，設(shè)定料液比為1∶40（g∶mL），在微沸狀態(tài)下提取1h，結(jié)果見圖1。

圖1 乙醇濃度對(duì)提取率的影響Fig.1 Effects of ethanol concentration on extraction rate of corcin

由圖1 可知，在10%～40%的乙醇濃度范圍內(nèi)，乙醇濃度越高，雌花序中總黃酮的提取率也越大，當(dāng)乙醇濃度為40%時(shí)，提取率最大，此后再增加乙醇的濃度，提取率反而呈下降趨勢(shì)。這可能是由于香蒲雌花序中的黃酮類成分與40%的乙醇溶液極性相似，提取時(shí)有較多的黃酮溶出，因此，適宜的乙醇濃度選用40%。

2.1.2 回流時(shí)間對(duì)提取率的影響 準(zhǔn)確稱取2.0g烘干的香蒲雌花序粉末，選用濃度為40%的乙醇浸泡30min，設(shè)定料液比為1∶40（g∶mL），在微沸狀態(tài)下提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h，結(jié)果見圖2。

圖2 回流時(shí)間對(duì)提取率的影響Fig.2 Effects of extraction time on extraction rate of corcin

由圖2 可知，提取時(shí)間在0.5～1h 之間，香蒲雌花序中總黃酮的提取率在增大，當(dāng)回流時(shí)間超過1h后，總黃酮的提取率開始下降，這說明適當(dāng)增加回流時(shí)間，會(huì)使雌花序中的黃酮成分更多的溶出，但一直保持微沸提取，若時(shí)間過長(zhǎng)，則會(huì)影響黃酮成分的穩(wěn)定性，引發(fā)部分黃酮分解，因此，回流時(shí)間選擇1h 較好。

2.1.3 料液比對(duì)提取率的影響 準(zhǔn)確稱取2.0g 烘干的香蒲雌花序花粉末，選用濃度為40%的乙醇浸泡30min，分別設(shè)定料液比為1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70（g∶mL），在微沸狀態(tài)下提取1h，結(jié)果見圖3。

圖3 料液比對(duì)提取率的影響Fig.3 Effects of solid-liquid ratio on extraction rate of corcin

由圖3 可見，使用不同的料液比得到的香蒲雌花序總黃酮的提取率相差明顯。起初，隨著乙醇溶液用量的增加，提取率不斷增大，在料液比達(dá)到1∶50時(shí)，達(dá)到最大值。此后，再增加乙醇溶液用量，提取率反而降低。當(dāng)料液比值較大時(shí)，樣品粉末與乙醇溶液接觸不夠充分，影響提取。隨著料液比值的減少，植物細(xì)胞內(nèi)外黃酮的濃度差逐漸增大，黃酮的溶出逐步趨于飽和，但溶出的雜質(zhì)也會(huì)同時(shí)增多，會(huì)造成黃酮的提取率降低[9]。故料液比選擇1∶50 為宜。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

綜合單因素試驗(yàn)考察結(jié)果，以總黃酮提取得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選取乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間3 個(gè)影響因素進(jìn)行3 因素3 水平正交設(shè)計(jì)，結(jié)果見表1、2。

表1 因素水平表Tab.1 Factor and level table

由表2 中R 值分析可以看出，香蒲雌花序中總黃酮提取率大小影響順序?yàn)椋夯亓鲿r(shí)間＞料液比＞乙醇濃度，最佳組合為A3B2C2，即最佳工藝條件為乙醇濃度50%、料液比1∶50（g∶mL），回流時(shí)間1h。

表2 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析Tab.2 Orthogonal design and experiment results

采用優(yōu)化后的組合進(jìn)行3 次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，總黃酮的提取率分別為3.48%、3.45%、3.42%，平均提取率為3.45%。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以香蒲的雌花序?yàn)樘崛≡?，采用水浴乙醇浸提法提取其中的總黃酮，并通過單因素試驗(yàn)法及正交實(shí)驗(yàn)法考察了乙醇濃度、料液比、回流時(shí)間對(duì)提取率的影響，得到的最優(yōu)工藝條件為：乙醇濃度50%，液料比1∶50，回流時(shí)間1h，香蒲雌花序中總黃酮的提取率可達(dá)3.45%。本研究可為香蒲雌花序總黃酮的提取提供一定的參考依據(jù)。