◎ 徐 楓，艾 萍，金 浩，趙 詠

（1.錦州市疾病預防控制中心，遼寧 錦州 121000；2.錦州市第二醫(yī)院，遼寧 錦州 121000；3.錦州醫(yī)科大學，遼寧 錦州 121000）

微生物檢驗是疾控系統(tǒng)檢驗工作的重要部分，包括對食品安全事故致病因子、生活飲用水、公共場所的空氣、公用物品、醫(yī)院消毒效果、病原菌檢驗、抗原抗體檢驗和分子生物學檢驗等多個項目。由于微生物種類繁多，體積微小，適應性強，培養(yǎng)步驟煩瑣，核酸檢驗易污染，加之取材和檢驗方法的問題，對微生物檢驗質量的影響很大，為保證微生物檢驗結果的準確性和可靠性，必須充分考慮影響微生物檢驗質量的因素并加以控制。

影響微生物檢驗的質量因素有管理體系、環(huán)境設施、儀器設備、檢驗人員、培養(yǎng)基和試劑、標準菌株、樣品采集運輸和保存、檢驗方法、質量控制及報告審核等，管理控制好這些影響因素，是確保實驗結果準確的保障。

1 管理體系

按照《檢驗檢測機構資質認定能力評價 檢驗檢測機構通用要求》（RB/T 214—2017）和《食品檢驗機構資質認定條件》建立實驗室管理體系，編制體系文件，制定工作流程及各部門和人員的職責，嚴格按照管理體系文件的要求運行，在人、機、料、法、環(huán)和測等方面進行控制。

2 環(huán)境設施

實驗室環(huán)境和設施是影響微生物檢驗質量的重要因素，因此成為關鍵管理內容。針對實驗室的設計，要求滿足國家制定的相關標準[1]。實驗室布局要合理，采用由清潔區(qū)到污染區(qū)的單一工作流程，避免相鄰工作區(qū)域的相互影響，采取有效措施，做好相鄰工作區(qū)域的隔離。有避光要求的實驗室應采取物理屏障措施，要具備雙路供電設施或備用電源，防止檢驗過程中斷電而影響實驗。根據(jù)需要設置無菌室、潔凈室、生物安全實驗室，做好無菌室、潔凈室、生物安全實驗室的潔凈度監(jiān)控，保證實驗環(huán)境滿足標準要求。

3 儀器設備

應建立儀器設備檔案，一臺一檔。對檢驗結果準確性有影響的儀器設備在使用前應采用核查、檢定或校準等方式進行溯源。按照《中華人民共和國計量法》的要求，強制檢定的儀器設備必須按照規(guī)定的周期進行檢定，強制檢定目錄外的儀器設備要進行校準，儀器設備的檢定/校準必須選擇具備資質的機構進行。根據(jù)儀器設備特性，定期對所用儀器設備進行期間核查，保持儀器設備的穩(wěn)定性。重要的大型儀器設備要由專人操作，授權上崗。

在儀器設備使用時，要填寫使用記錄，以便出現(xiàn)問題時，可以溯源。編寫儀器設備的操作規(guī)程，嚴格按照規(guī)程操作，制定儀器設備維護計劃，定期維護。對于出現(xiàn)故障的儀器設備應及時進行維修，待維修測試合格后才可再次使用[2]。

4 檢驗人員

檢驗人員是微生物檢驗工作開展的直接實施者、參與者，其專業(yè)水平與檢驗結果的準確性關系密切[3]。要求檢驗人員應具有相應的微生物專業(yè)教育或培訓經(jīng)歷，具備相應的資質，能夠理解并正確實施檢驗，掌握實驗室生物安全操作和消毒知識，所以必須對人員的能力進行確認，授權上崗。有計劃地對新上崗和轉崗人員進行監(jiān)督，使其掌握正確的操作方法。定期進行新知識、新方法的培訓，提高人員的技術水平。優(yōu)秀的檢驗人員，能夠及時發(fā)現(xiàn)并糾正實驗過程中的不利因素，對各種實驗結果進行嚴謹?shù)姆治?，保證實驗結果的準確可靠。

微生物檢驗工作具有操作復雜、技術難度高的特點，檢驗人員必須具有較強的責任心、嚴謹?shù)墓ぷ鲬B(tài)度、豐富的專業(yè)知識以及熟練的操作技能。在檢驗工作中，能夠意識到檢驗操作的重要性，并且嚴格按照相關的規(guī)范要求和標準進行，從而減少操作因素的影響。與此同時，微生物檢驗人員還應該不斷學習基礎醫(yī)學、微生物學、分子生物學，不僅要增強專業(yè)理論知識，還要通過技能培訓，提高專業(yè)操作能力。檢驗人員在上崗前，必須經(jīng)過資格考試，確保持證上崗。除此之外，還要鼓勵檢驗人員參加培訓班、進修、交流會等，不斷學習新型的微生物檢驗技術。

5 培養(yǎng)基和試劑

培養(yǎng)基和試劑的優(yōu)劣直接影響檢驗質量，應在源頭對其進行控制。建立供應商檔案，確定其資質，并定期對供應商進行評價，選擇產品質量好、企業(yè)信譽高的供應商[4]。

采購的培養(yǎng)基和試劑要通過驗收，驗收包括符合性驗收和技術驗收。符合性驗收應驗收培養(yǎng)基和試劑的品名、規(guī)格、等級、生產日期、保質期、成分、包裝、儲存條件和合格證明等。技術驗收要通過陽性、陰性菌株進行對照實驗，根據(jù)實驗結果判斷該培養(yǎng)基和試劑是否滿足標準和技術規(guī)范的要求，培養(yǎng)基和試劑經(jīng)驗收合格后方可投入使用。

6 標準菌株

標準菌株是在培養(yǎng)基技術驗收和陰陽性對照時需要使用的，所以標準菌株的生物學特性非常重要，是判定實驗結果和培養(yǎng)基合格與否的依據(jù)。采購的標準菌株要通過實驗驗證其應具有的生物學特性，同時還要做好菌株的管理工作。標準菌株由專人保管，雙人雙管雙鎖，保管人員應接受過專業(yè)培訓，有足夠的菌株保藏經(jīng)驗。菌株保藏管表面應粘貼標簽，標簽上注明菌株名稱、菌株號、保藏日期、傳代次數(shù)等。保藏的菌株要定期傳代，檢查菌株的形態(tài)特征、變異和污染情況。每轉種三代做一次鑒定，檢查菌株是否發(fā)生變異，并做詳細記錄。菌株傳代時，要標上傳代的次數(shù)、傳代的日期、所用的培養(yǎng)基。另外，菌株要有使用和保藏記錄。

實驗后的菌株、儲存經(jīng)確認或驗證不合格的菌株、超過保藏期限的菌株要進行銷毀，銷毀時必須按照菌株的危害程度嚴格進行個體防護后，由兩人共同操作，同時填寫壓力蒸汽滅菌器使用記錄和菌株銷毀記錄。

7 樣品采集保存和運輸

樣品采集過程中若操作不標準、不規(guī)范，無法確保采集樣品的有效性，影響檢測結果[5]。必須嚴格按照標準要求進行采樣，每件樣品的采樣量應滿足微生物指標檢驗單位的要求，采樣過程中保證無菌。采樣后做好標識，送檢樣品的標識要求具有唯一性，填寫好樣品名稱、樣品編號、采樣時間、采樣地點、批號、數(shù)量和保存條件等信息。

根據(jù)檢驗目的、食品特點、批量、檢驗方法、微生物的危害程度和食品安全相關標準的規(guī)定等確定采樣方案。發(fā)生食品安全事故時，如果食品安全事故是由批量生產加工的食品污染導致的，按照二級采樣或三級采樣法采集，重點采集同批次食品樣品。如果是由餐飲單位或家庭烹調加工的食品導致的，重點采集現(xiàn)場剩余食品樣品，以滿足食品安全事故病因判定和病原確證的要求。

運輸過程中保護好樣品，避免樣品的玷污、變質和損壞。對于高致病性病原微生物的樣品應按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》執(zhí)行。

保留的樣品，粘貼好留樣標識，保存在清潔、干燥、避光的環(huán)境中，對保存環(huán)境有要求的樣品，應監(jiān)控環(huán)境溫濕度，填寫環(huán)境監(jiān)控記錄。不同樣品要分區(qū)存放，避免混淆。

8 檢驗方法

檢驗方法直接影響檢出率的高低和結果的準確性。檢驗時應優(yōu)先使用國家標準規(guī)定的方法，并定期查新，保證使用的標準是現(xiàn)行有效的。在使用新標準方法前，要進行方法驗證，驗證內容包括方法所涉及的環(huán)境設施、人員技能、儀器設備、培養(yǎng)基和試劑等必須滿足新標準方法的要求。對方法掌握的熟練程度將影響檢驗結果，要求定期采用盲樣考核、加標試驗等方法進行考核，以便能正確熟練掌握檢驗方法。

9 質量控制

質量控制是保證檢驗質量的重要因素，質量控制包括內部質量控制和外部質量控制。內部質量控制可采用定期使用標準物質、定期使用經(jīng)過檢定或校準的具有溯源性的替代儀器、對設備的功能進行檢查、運用工作標準與控制圖、使用相同或不同方法進行重復檢驗檢測、保存的樣品再次檢驗檢測、分析樣品不同結果的相關性、對報告數(shù)據(jù)進行審核、盲樣檢驗檢測、實驗過程的空白對照、陰陽對照及加標試驗等進行監(jiān)控。外部質量控制可采用參加權威機構組織的能力驗證或實驗室間比對等手段。為保證檢驗結果的準確可靠，可以多途徑多手段進行質量控制[6]。實驗室應根據(jù)工作需要，制定質量控制計劃，通過質量控制活動，不斷提高自身的檢驗能力。

內部質量控制是判斷實驗是否成立的重要依據(jù)，是保證實驗數(shù)據(jù)準確的手段，通過內部質量控制，可以保證實驗的可信度和質量。以下以某醫(yī)院的微生物檢驗質量控制為例，分析質量控制對檢驗結果的影響。

某醫(yī)院發(fā)生患者術后感染，對無菌包進行檢驗，是由于無菌包滅菌不合格造成，更換滅菌合格的無菌包，杜絕了院內感染的發(fā)生。質量控制對檢驗結果的影響如表1所示。

表1 質量控制對檢驗結果的影響表

通過內部質量控制，可以及時發(fā)現(xiàn)實驗過程中存在的問題，對與實驗有關的各個因素（包括培養(yǎng)基、標準菌株、培養(yǎng)箱、無菌室等）進行分析，查找原因，及時糾正存在的問題，保證實驗數(shù)據(jù)和結果的準確性。實驗室應該積極參與實驗室間比對活動、能力驗證活動，從而科學評估實驗室在本領域的技術地位，明確差距和不足。通過不斷的改進，提高實驗室的技術水平。

10 報告審核

建立報告審核制度，明確各級審核人員職責，履職盡責，保證發(fā)出報告的準確性。如表2所示，錦州市疾病預防控制中心在2020年，經(jīng)過授權簽字人審核，發(fā)現(xiàn)錯誤報告81份，全部改正，準確無誤發(fā)出檢驗檢測報告。

表2 2020年審核前后檢驗檢測報告質量問題分析表

錦州市疾病預防控制中心的質量目標是檢驗檢測報告的一次交驗合格率≥97%，經(jīng)過對檢驗檢測報告的審核，使各科室都能達到中心的質量目標，為客戶提供真實、可靠、準確的數(shù)據(jù)和結果。

除了控制好以上各種影響因素外，還需建立提高微生物檢驗質量的規(guī)章制度。規(guī)范的、嚴謹?shù)?、完整的質量管理制度，是促進微生物檢驗順利進行的基礎和前提，也是提高檢驗質量的保障。實驗室應該根據(jù)自身情況，進一步完善檢驗程序，防止其他因素對檢驗工作帶來的影響。要把管理制度責任落實到每一個檢驗人員身上，提高工作責任心，保證各項規(guī)章制度能夠順利執(zhí)行、規(guī)范執(zhí)行。檢驗人員的素質水平也會對檢驗質量造成一定影響，因此必須組建一支高素質的人才隊伍，提升管理效果。

11 結語

開展微生物檢驗工作可以發(fā)現(xiàn)不合格樣品和致病因子，為各項衛(wèi)生管理工作提供科學依據(jù)，對于預防和減少食品安全事故的發(fā)生和疾病控制工作具有積極的作用。做好微生物檢驗工作的質量管理和質量控制，提高檢驗人員專業(yè)能力，是保證微生物檢驗結果準確可靠的關鍵。